细菌学诊断新技术的应用

传统的细菌分离、培养及生化反应,不能满足对各种病原微生物的诊断.近年来,国内外已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法,明显提高了细菌的诊断水平.现就细菌学诊断技术的应用进行探讨.     

脂肪酶产生菌的筛选及基因的克隆表达

目的筛选出脂肪酶活性较高菌株,通过脂肪酶基因克隆技术获得高表达的脂肪酶,根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.方法采用透明圈法,以三丁酸甘油酯为底物筛选脂肪酶活性较高菌株;通过PCR扩增获得其脂肪酶基因Pseudomonas peli(PP)序列,构建pET-28 a表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;通过Ni柱将脂肪酶纯化,并根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.结果筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株,16S rRNA基因序列比对结果初步鉴定为Pseudomonas peli.PCR扩增得到的基因片段长度为801 bp,其序列与Pseudomonas peli中的脂肪酶基因序列相似性达到100%,PP基因在大肠杆菌中异源表达蛋白的分子量约29 KD,该蛋白在55℃、pH 7.0时活性最高.结论通过基因克隆表达后得到的脂肪酶Ni柱纯化后纯度达95%以上,且耐高温,为脂肪酶工业化应用奠定了基础.     

高炉富氧鼓风对高炉热状态的影响及对策

为进一步探究高炉富氧操作下的冶炼规律,用已建立的高炉富氧综合模型对不同操作条件下的高炉热状态进行计算和分析.结果表明:炉缸喷吹循环煤气能有效抵消富氧操作引起的燃料比增长,且在低富氧操作时高炉不需喷吹循环煤气就能满足上下部热量平衡;增加喷煤量需要与提高富氧率相对应,不同的喷煤量具有不同的富氧操作区间.模型求得富氧操作条件下鼓风加湿极限值,即鼓风加湿不应超过21.2g/m³,相应的富氧率极大值约为4.6%.     

流式细胞术检测活化血小板及其在Ⅱ型糖尿病中的应用

目的　研究Ⅱ型糖尿病患者活化血小板与正常人群的差异性.方法　应用流式细胞仪检测CD62P,用以反应血小板活化情况.结果　Ⅱ型糖尿病患者外周血小板活化率明显高于正常对照组.结论　检测活化血小板可用于探讨Ⅱ型糖尿病微血管病变的发病机制,预测微血管病变发生的可能性.     

血红铆钉菇多糖分离纯化及抗氧化活性研究

目的探讨血红铆钉菇的多糖分离纯化及抗氧化活性方法.方法应用传统热水浸提法提取粗多糖,进行反复冻融后初步去除蛋白,再用sevage法除蛋白,纯化后苯酚-硫酸法测糖含量,考马斯亮蓝法测蛋白含量,对多糖进行超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH等体外抗氧化能力试验.结果传统热水浸提方法得糖率为4. 19%,除蛋白后蛋白含量为10. 71%,并且血红铆钉菇多糖对超氧阴离子清除效果最好,而对DPPH和羟自由基的清除效果也较为明显.结论血红铆钉菇有较强的体外抗氧化活性,并且清除率随多糖的浓度增大而增加.     

重组金针菇免疫调节蛋白的纯化及生物活性研究

目的研究重组的金针菇免疫调节蛋白(re FIP-fve)对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用、诱导小鼠脾淋巴细胞对白细胞介素-2(IL-2)的促分泌作用及对血细胞的凝集作用.方法采用离子交换色谱法,利用SP Sepharose XL色谱柱纯化重组的免疫调节蛋白;将纯化后的蛋白作用于小鼠脾淋巴细胞和血细胞,用MTT法检测蛋白对脾细胞增殖和血细胞凝集的影响;用ELISA法检测蛋白对淋巴细胞分泌细胞因子的作用.结果经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度为86%的重组蛋白;纯化蛋白浓度在80μg/m L时最大限度促进细胞增殖;蛋白浓度在2μg/m L时开始出现凝血;ELISA检测结果显示:重组的金针菇免疫调节蛋白能明显增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)的水平.结论经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度较高的蛋白;纯化后的蛋白与小鼠脾淋巴细胞共同培养,不仅可以促进脾细胞的增殖,而且能增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2的水平;蛋白与血细胞共同培养能够促进血细胞的凝集.     

猪巨吻棘头虫[Macracanthorhynchus hirudinaceus(pallas,1781) Travassos,1916]组织化学的研究

我们用组织化学的方法,对猪巨吻棘头虫的DNA、RNA、α—氨基酸、糖元和磷酸酶进行研究。结果在虫体体壁的下皮层,有丰富的糖元分布,α—氨基酸在此部位的含量也较多。在其生殖器官和巨核内有明显的DNA。下皮层、肌肉层、吻腺中含有RNA。体壁下皮层、肌肉层、生殖器官显示酸性磷酸酶。角质层、下皮层、卵膜上显示碱性磷酸酶。     

融合聚精氨酸九肽的小热休克蛋白 原核表达及蛋白纯化

目的构建小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,表达纯化融合蛋白.方法在小热休克蛋白表达载体的基础上利用点突变方法引入聚精氨酸九肽对应序列,转入BL21大肠杆菌感受态细胞进行原核表达,利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化.结果成功构建了融合聚精氨酸九肽的HSP16. 5融合蛋白表达载体,并对其在大肠杆菌细胞中的原核表达进行条件优化,研究显示:在诱导剂IPTG浓度为0. 5 mmol、37℃条件下诱导4 h目的蛋白产量较高.结论此实验成功构建了小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,得到了高纯度的小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础.     

中药抗结核分支杆菌研究

目的探讨中药在抗结核分支杆菌中的作用.方法总结目前国内外抗结核分支杆菌的中药种类及研究进展.结果与结论猫爪草等中草药具有明显的抗结核分支杆菌的作用.     

拟黑多刺蚁体外抑瘤作用研究

目的　通过拟黑多刺蚁对体外S180 ,H2 2 ,YAC 1肿瘤细胞DNA合成影响及细胞毒性作用 ,研究该蚁抑瘤效应及机制 .方法　采用3H TdR掺入法和12 5I UdR释放法 .结果　拟黑多刺蚁对S180 ,H2 2 ,YAC 1肿瘤细胞DNA合成均有明显抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,其抑制作用随剂量增加而增强 .以对S180 肿瘤细胞抑制作用最显著 .同时证实 ,该蚁对YAC 1,S180 肿瘤细胞均有毒性作用 .结论　拟黑多刺蚁对肿瘤细胞具有直接杀伤和抑制生长的作用 .