氧化石墨烯对DNA荧光分子探针FRET效应的研究

研究了氧化石墨烯的浓度、氧化石墨烯与DNA分子荧光探针的反应温度、DNA链长度对FRET效应的影响.研究表明,氧化石墨烯的浓度、氧化石墨烯与DNA分子荧光探针的反应温度、DNA链长度对FRET效应都有着重要的影响.氧化石墨烯浓度越大,其对DNA分子探针的荧光猝灭效率越高;氧化石墨烯与DNA分子荧光探针的反应温度越高,淬灭效率越高;DNA链越长,氧化石墨烯淬灭的效率越低.因此,氧化石墨烯的浓度、氧化石墨烯与DNA分子荧光探针的反应温度、DNA链长度对FRET效应都应该是设计生物传感器时考虑的因素.     

基于OFFGEL预分离二维液质联用技术在大鼠海马膜蛋白中的应用

以大鼠海马膜组分为研究对象,以等电聚焦OFFGEL为研究手段,结合反相液相色谱质谱联用技术,考察对酶切肽段的分离富集性能,同时结合DAVID分析工具对分离富集得到的酸性蛋白质进行的GO分析.结果表明,海马膜组分的酶切肽段经过OFFGEL分离后,得到24个不同馏分,每个馏分经过纳流液相色谱-质谱检测,发现有77% 的肽段专属于一个馏分,在酸性范围内的肽段等电点偏差较小,可以达到良好的聚焦效果;酸性蛋白的GO分析结果显示,质膜和物质的跨膜运输所占比例最大.OFFGEL作为一种预分离手段,可以应用于生物样品的大规模蛋白鉴定,在进一步蛋白质层面的生物功能研究中表现出良好的应用前景.     

基于核酸适配体的荧光分析法定量检测MUC1粘蛋白

MUC1粘蛋白是一种高糖化、高分子量的糖蛋白,其在乳腺癌细胞中高度异常表达,其特异性高于组织多肽抗原,敏感性高于癌胚抗原,因此MUC1在乳腺癌诊断中具有很高的临床应用价值,而建立高灵敏的MUC1蛋白定量检测方法对临床诊断具有重要的意义.该研究建立了基于核酸适配体-滚环扩增（RCA）和氧化石墨烯-荧光共振能量转移（GO-FRET）技术的MUC1黏蛋白定量检测技术,实现了MUC1粘蛋白准确、灵敏的定量检测.结果表明,该方法定量检测线性范围为50~1 000 pg/mL,检测限为28.05 pg/mL,定量限为45.57 pg/mL,在人血样品中的回收率为96%~104%.     

大肠杆菌核酸适配体筛选的研究

由于传统微生物检测存在步骤繁琐、耗费时间、成本较高等缺点,因此研发快速有效检测微生物的新技术新方法显得尤为必要.本文利用whole-cell SELEX技术,进行了大肠杆菌活细胞核酸适配体的筛选,对单链DNA的制备鉴定、每轮筛选核酸文库的检测、核酸适配体的扩增克隆等内容进行了研究,在筛选过程中成功制备了单链DNA,并对整个筛选过程的核酸适配体库进行监测,保证了筛选的顺利进行,并对核酸适配体库进行了扩增和克隆,最终获得靶向大肠杆菌的核酸适配体序列,这将有助于基于核酸适配体的微生物检测新方法的建立.     

铽-钛铁试剂络合物荧光猝灭法测定辅酶Ⅱ

辅酶与酶蛋白组成结合蛋白酶,而结合蛋白酶催化反应的专一性取决于所含的辅酶,因此有必要建立辅酶的灵敏测定方法,并用于结合蛋白酶的催化动力学行为、构象及活性等化学特性的表征.实验表明辅酶II显著猝灭铽钛铁试剂络合物的荧光.本文推导了ΔF与辅酶II初始浓度的线性关系式(ΔF=nk[Q]0 ),并据此建立了辅酶II的高灵敏荧光分析方法.研究了荧光光谱、缓冲液、pH范围、铽离子和钛铁试剂最佳浓度、灵敏度、检测限和干扰等分析化学特性.辅酶II在40. 0nmol/L~1. 0μmol/L浓度范围内呈良好的线性,线性回归方程:ΔF=0. 868C(nmol/L) -13. 1(R2 =0. 994),检测限:1. 63×10-8 mol/L,且牛血清白蛋白及其它生物学中的常见离子在一定范围内均不干扰测定.结果表明,该方法用于测定辅酶II操作简便,测定快速,并预示着该方法可应用于若干含磷酸基的重要辅酶的测定.     

荧光体在电场作用下的荧光动力学行为及影响因素研究

1荧光体的荧光动力学曲线 荧光体在电场下的荧光动力学过程一般都包括三个阶段:即初始阶段、荧光变化阶段和结束阶段.在初始阶段,荧光体的荧光强度不发生变化,持续时间为Tb;当加载电场时间到达Tb后,荧光体的荧光强度开始发生变化,直至当加载电场时间到达Te时,荧光变化完全或者结束.Te-Tb即为实际荧光强度变化所需的时间,它反映了荧光体荧光强度变化的速率.不同荧光体在电场作用下的Tb,Te-Tb和Te值存在显著差异,预期这种差异可作为分辨和分别测定的依据.     

17β-雌二醇、壬基酚及其混合物对雄性泥鳅的雌激素效应

以卵黄蛋白原（Vtg）为生物标志物，采用半静水式暴露体系，研究了17β2-雌二醇（E2）、壬基酚（NP）及其混合物对雄性泥鳅的雌激素效应．结果表明，与对照组相比，0.5ug/LE2在2ld之内可诱导雄性泥鳅体内Vtg含量的增加，呈现时间-效应关系；NP也能诱导雄性泥鳅体内产生Vtg，呈明显的时间累积和剂量一效应关系，但其雌激素活性相对较弱；E2与NP混合物对雄性泥鳅体内Vtg的诱导也呈时间和剂量相关，其诱导能力显著性地强于单一化合物，且混合物对Vtg的诱导量高于两种物质分别作用时Vtg诱导量的简单加和．     

铽-钛铁试剂络合物荧光探针研究脱氢酶

报道了Tb3+ - TR络合物探针用于研究脱氢酶,并建立了3种典型脱氢酶的定量测定方法,测定乙醇脱氢酶(ADH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和葡糖- 6 -磷酸脱氢酶(G 6 PDH)的线性范围分别为: 2. 14×10-6 ~5. 50×10-5 g/mL、4. 17×10-6 ~1. 03×10-4 g/mL和5. 02×10-6 ~3. 51×10-5 g/mL;检测限分别为: 1. 02×10-7 g/mL、5. 32×10-7 g/mL和1. 25×10-6 g/mL.研究结果表明,Tb3+ TR络合物除可以作为脱氢酶定量测定的灵敏探针外,还可以用作指示乙醇脱氢酶(ADH)热变性过程的灵敏探针,探测结果显示ADH的热变性过程在50~60℃有一突变,从另一角度阐明了ADH的热变性过程不是长期以来一直认为的“全或无”的过程,而是一个构象渐变的过程.由于ADH分子是由酶蛋白和NAD+组成的全酶,其变性失活过程,除了与酶蛋白有关以外,还与NAD+有关.利用Tb3+ - TR络合物荧光探针可以较灵敏地监测到这一点.     

荧光素钠在电场作用下的荧光动力学行为研究

荧光素钠在氯化钾介质中的电化学行为表现为:①荧光素钠并没有直接呈现荧光衰变,而是出现了显著的荧光增强现象,然后随着施加电压时间的增长,再发生衰变,荧光强度逐渐下降;②整个过程中溶液颜色由黄逐渐变为淡红,然后再慢慢变为无色③荧光光谱红移.因此在这一章中,我们将对荧光素钠的这些行为进行探讨.     

基于适配体的胶体金色谱层析试纸条快速检测肌酸激酶同工酶

研究基于适配体的胶体金色谱层析试纸条快速检测肌酸激酶同工酶,用于揭示长期飞行下航天员潜在的心肌和肌肉损伤.利用SELEX方法筛选得到的肌酸激酶同工酶适配体,并优选出与肌酸激酶同工酶有较强亲和能力的核酸适配体应用于胶体金免疫层析试纸条,通过优化胶体金颗粒大小、缓冲液浓度等条件,成功建立了一种基于适配体的胶体金试纸法用于CK-MB的快速检测.实验结果表明,通过基于磁珠的核酸适配体筛选方法筛选出的与肌酸激酶同工酶有亲和力的核酸适配体,能够用于构建适配体-适配体夹心胶体金免疫层析试纸条并成功应用于82 nM以上的肌酸激酶同工酶的快速、可视化检测,同时,该免疫层析试纸条具有良好的特异性和稳定性,可用于未来空间医学即时检测.