油菜细胞质雄性不育相关基因的筛选

甘蓝型油菜波利马(Brassica napus pol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实,线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中,发现了一个与tAPX基因及其表达的蛋白都具有较高同源性.它是活性氧清除的重要酶类,很可能与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.     

高职生物化学课程项目教学设计探讨

项目教学法是以项目为载体,以学生为主体,教师为主导,采取小组互助的方式,通过教师派发任务,以任务为驱动,以学生完成任务的方式学习,达到学习目的的一种教学方法。本文以高职生物化学课程为例,对项目教学法的教学设计和实施过程进行初探。提出高职生物化学课程项目化教学设计的指导思想、原则和任务,以本课程中的部分为例,对项目化教学进行初步设计,以增强学生的学习兴趣,达到较好的教学效果。     

甘蓝型油菜BnFAD8基因编码序列的克隆和表达谱分析

通过比对拟南芥等同源基因,克隆了甘蓝型油菜FAD8基因中的保守序列.以得到的FAD8（Fatty Acid Desaturase 8）保守序列片段为信息探针,在GenBank的EST数据库中检索高度同源的EST,并通过人工拼接及RTPCR得到油菜该基因的全长为1299 bp的cDNA序列,命名为BnFAD8.序列分析结果中发现该基因符合质体定位的ω3脂肪酸脱饱和酶序列特征.通过比较22 ℃和8 ℃处理的甘蓝型油菜的BnFAD8基因表达谱,发现该基因在常温下仅存在痕量表达;而在低温条件下在叶中表达出现     

甘蓝型油菜细胞质雄性不育相关基因的克隆及其转基因研究

将以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交(Yeast Two Hybrid,Y2H)已筛选到的3′端含有终止密码子的一个片段,通过5′RACE获得该基因全长并,命名为Bn-Zn,其编码氨基酸序列中含有一个RINGv(RINGvariant)结构.通过构建该基因的真核正向表达载体pCAMBIA2301G-Bn-Zn,以农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转入细胞质雄性不育恢复系油菜8410018幼苗下胚轴,经过诱导愈伤和再分化,成功得到了转基因植株.     

甘蓝型油菜抗逆性相关基因‘抗坏血酸过氧化物酶’的克隆与转基因研究

应用酵母双杂交(Yeast Two Hybrid,Y2H)技术,以ATP6作为诱饵蛋白筛选到的3′端含有终止密码子的一个片段,通过比对同源基因设计5′端兼并引物进行PCR扩增,获得全长基因,该基因与BO-tbAPX(登陆号：AB125634.1)具有96%的同源性,与AT-tbAPX(登录号：AK221988.1)具有90%的同源性,这两个基因均属于抗坏血酸过氧化物酶基因家族,与植物抗逆境密切相关.因此,我们获得的基因极可能与植物抗逆性紧密相关.通过构建该基因的真核表达载体pCAMBIA2301G-APX,以根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转入甘蓝性油菜细胞质雄性不育恢复系84100-18无菌苗下胚轴,经过诱导愈伤和再分化,成功得到了转基因植株.     

关于BnTR1基因抑制不同分化程度的肿瘤细胞增殖的初步探讨

为研究耐热基因Bn TR1对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用,构建Bn TR1条件表达载体,瞬时转染4种不同分化程度的肿瘤细胞。Western blot检测结果显示Bn TR1的表达水平在几种肿瘤细胞中相近;MTT检测结果显示HGC和AGS的细胞增殖受到抑制,抑制作用HGCAGS,而HT-29和MCF-7的细胞增殖不受到抑制。推断Bn TR1对于分化程度低的肿瘤细胞增殖有抑制作用,而对于分化程度高的肿瘤细胞的增殖无明显抑制。     

利用酵母双杂交系统筛选油菜ATP6的相互作用因子

甘蓝型油菜波利马(Brassica napus pol.)细胞质雄性不育系是一种很有实用价值的油菜不育类型.目前关于其分子机制的研究已证实，线粒体ATP合成酶的一个亚基ATP6与其雄性不育相关.本实验以ATP6作为诱饵蛋白，应用酵母双杂交共转化的方法筛选与ATP6相互作用的蛋白质.在获得的阳性克隆中，发现了一个与拟南芥中未知基因AT3G47550所编码的蛋白质具有较高同源性的蛋白质.它含有RING HC的结构，可能在泛素-蛋白质降解途径与细胞质雄性不育间建立起了某种联系.     

甘蓝型油菜BnTR1和ATP6之间相互作用的研究

为进一步研究ATP6和BnTR1之间的相互作用及具体作用位点,通过构建含不同长度的BnTR1 cDNA序列的pGADT7融合载体,利用酵母双杂交证明了BnTR1的C端92～202位氨基酸序列与ATP6的氨基酸序列具有相互作用.