西红花酸合成酶（7，8-二加氧酶）片段的克隆及在大肠杆菌中的表达与检测

根据已发表西红花酸合成酶（7,8-二加氧酶）基因序列设计PCR特异性引物,从西红花柱头总RNA中扩增并克隆到一段长为1.2 kb的片段.测序结果表明该片段含有两个序列.一个与已知西红花酸合成酶基因序列高度同源(同源性99％),命名为CsZCD;另一个的同源性为96%,命名为CsZCD-NEW.将CsZCD-NEW片段克隆到表达载体pQE31上,得到重组质粒CsZCD-NEW-pQE31.经IPTG诱导,重组质粒在E.coli M15中表达.     

大豆11S球蛋白基因Gy1启动子克隆及序列分析

以高蛋白大豆品种南农87C-38总DNA为模板,采用PCR法扩增获得约1100bp大小的DNA片段,回收该片段并克隆到puCm-T载体上,选取阳性克隆进行PCR和酶切检测,再进行测序分析.序列分析显示该片段含1174个核苷酸,采用Vector NTI软件将试验中克隆的序列与GenBank E07850报道的Gy1启动子和GenBank X15121报道的Gy1启动子及信号肽对应序列分别进行比对,同源性分别为99.6%和99.3%.确定该片断为南农87C-38大豆11S球蛋白基因Gy1启动子及信号肽.该启动子的成功克隆,可为今后利用基因工程技术改良大豆种子营养品质研究奠定基础.     

西红花柱头状物再生条件的优化

以西红花(Crocus sativusL.)的花被和花柱为外植体诱导培养花柱柱头状物,以MS+NAA 5mg.L-1+6-BA 5mg.L-1+蔗糖4%+琼脂0.8%和B5+KT 5mg.L-1+IAA 4mg.L-1+2,4-D 1mg.L-1+Pro 0.5mg.L-1+蔗糖6%+琼脂0.8%为诱导培养基,选取不同长度的顶芽,在不同的温度、光照条件,以及蔗糖梯度浓度条件下,对柱头状物再生的条件进行优化.结果表明,在培羊基MS+NAA 5mg.L-1+6-BA 5mg.L-1+蔗糖6%+琼脂0.8%上,18℃,黑暗条件下培养,花被柱头状物再生的诱导率达75.0%.