精氨酸激酶及其底物复合物的结晶和结晶学初步研究

精氨酸激酶是一种存在于无脊椎动物体内的磷酸源激酶,对于无脊椎动物体内能量的代谢、储存和利用具有至关重要的作用.海参体内的精氨酸激酶在磷酸源激酶的进化中具有特殊的地位,氨基酸序列比对的结果表明:它与鲎源单亚基精氨酸激酶的氨基酸序列的同源性为64%,而与双亚基兔肌肌酸激酶的氨基酸序列同源性却达到了75%.为了揭示海参源精氨酸激酶的催化机理,研究其与单亚基精氨酸激酶及肌酸激酶催化机理的异同,实验获得了精氨酸激酶复合物晶体,取得了X射线衍射数据,进行了结晶和结晶学的初步研究.     

硒代甲硫氨酸抗烟毒素蛋白衍生物的制备

为利用硒原子的反常散射获取抗烟毒素蛋白晶体X射线衍射的相位信息，以质粒pQE-30为表达载体，E.coli M15为宿主菌，在含有硒代甲硫氨酸的M9培养基中用IPTG诱导表达硒代甲硫氨酸抗烟毒素蛋白衍生物，通过Ni-NTA金属亲合层析和Mono Q阴离子交换层析纯化目标蛋白，产物经SDS－PAGE检验纯度达95％以上，经MALDI－TOF和SEI－Quadrupole质谱检测证实抗烟毒素蛋白硒代甲硫氨酸标记成功，采用与抗烟毒素蛋白晶体生长类似的条件，获得了衍生物可供衍射的晶体。