NF-κB哑铃形诱骗剂ODN对骨髓瘤细胞生长及IL-6表达的抑制作用

目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂对NF-κB转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的IL-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对NF-κB转录活性的抑制效应。将8266细胞随机分为传代培养的8266细胞组;诱骗剂ODN处理组及脂质体处理组。通过阳离子脂质体以2mg/L、4mg/L、8mg/L不同剂量诱骗剂ODN转染8266细胞。转染后8、12、18h,ELISA法检测8266细胞培养上清中IL-6的表达。用MTT比色检查诱骗剂ODN对IL-6刺激的8266细胞生长的影响。结果硫代磷酸的诱骗剂ODN在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;2mg/L、4mg/L、8mg/L等不同浓度的脂质体-ODN复合物对8266细胞表达IL-6的抑制程度不同。脂质体-ODN复合物对8266细胞的生长及IL-6的活性均有抑制作用。结论靶向NF-κB的诱骗剂ODN在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而抑制8266细胞的生长,降低瘤细胞中IL-6的表达。     

SYSMEX XN9000血细胞分析仪PLT-F通道在异常血小板计数中性能评估

目的评估SYSMEX XN9000血细胞分析仪PLT-F通道在异常PLT计数及异常直方图中应用的准确性。方法收集EDTA抗凝全血标本,采用电阻抗法(PLT-I)、荧光法(PLT-F)和手工法(PLT-M)计数血小板,且以PLT-M为标准进行比较,资料分为低值PLT组、小红细胞组、大血小板组,分别使用简单线性回归和差值百分比Bland-Altman图进行比较,结合临床血液学检验常规项目分析质量要求判断2种方法的一致性及优劣性。结果低值PLT在PLT-F通道的检测结果与PLT-M具有更高的相关性和一致性;PLT-F通道在小红细胞组相关性与PLTI接近,但与PLT-M比较系统误差较小;PLT-F通道在大血小板组与PLT-M相关性和一致性均优于PLT-I通道。结论在低值PLT、小红细胞和大血小板出现时,PLT-F通道可以替代PLT-M成为快速准确的复检方法。     

pTracer/mIFN-γ基因修饰对小鼠胚胎干细胞细胞生物学特性的影响

目的: 探讨IFN-γ基因转染对小鼠ES细胞生物特性的影响. 方法: 电穿孔法将pTracer/mIFN-γ共表达载体转入小鼠ES细胞,荧光倒置显微镜下观测绿色荧光,RT-PCR, ELISA检测转基因ES细胞IFN-γ表达. 碱性磷酸酶染色,测定ES/pTracer/mIFN-γ和ES细胞的细胞克隆形成率;无血清培养法诱导ES/pTracer/mIFN-γ细胞定向分化为神经前体细胞(NPCs),免疫组化法检测nestin表达. 结果: 转染共表达载体pTracer/mIFN-γ的ES/pTracer/mIFN-γ细胞发绿色荧光,有IFN-γ表达,转染72 h后的细胞培养液中IFN-γ量为(44.25±12.23) μg/L;ES细胞和ES/PTracer/mIFN-γ细胞的集落形成率分别为73.66%和70.89%,差异无显著性. ES/pTracer/mIFN-γ细胞经诱导可分化为nestin阳性NPCs. 结论: IFN-γ基因转染对ES细胞的未分化特性、增殖能力及向神经系统分化潜能无明显影响.     

抗人宫颈癌单链抗体的表达、结构预测和功能分析

目的扩增、表达抗人宫颈癌单链抗体（ScFv）基因；对ScFv蛋白进行活性鉴定、二级结构、三维结构预测和理化性质分析。方法采用基因重组技术构建抗人宫颈癌ScFv基因，进行TG1和HB2151两个原核体系的表达；SDS-PAGE、Western blotting、竞争抑制实验、免疫组化反应检测ScFv；用Antheprot 4．3软件、Swiss-model、3dpssm进行蛋白理化性质分析和立体结构模拟。结果抗人宫颈癌可溶性ScFv大小为32000左右，与预计蛋白相对分子质量相符；可溶性和展示性ScFv均可与人宫颈癌细胞株细胞膜表面抗原结合。免疫组化显示能与宫颈癌组织特异性结合而不与正常宫颈组织和其他肿瘤组织结合。ScFv蛋白等电点预测值为7．215，属于α＋β蛋白；VH和VL区均有多个蛋白激酶C磷酸化位点和酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。三维结构预测显示linker贴近。使VL和VH形成一个疏水的“口袋”。这一结构有利于抗原的结合。结论经基因工程方法制备的抗人宫颈癌ScFv具有与亲本单克隆抗体相似的抗体活性和特异性。抗人宫颈癌ScFv构建为进一步构建双特异性ScFv和双功能ScFc基因创造了条件；其成功的表达为人宫颈癌的早期诊断和特异性治疗打下了基础。计算机对ScFv蛋白的空间结构的模拟和理化性质的分析为ScFv的进一步政建和抗原、抗体反应的研究提供了宝贵的资料。     

抗人肝癌单克隆抗体HCD78的制备及免疫组化定位

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，具有发病隐袭、病死率高的特点，早期诊断对预后的意义重大。单克隆抗体（ｍＡｂ）技术问世后，人们试图通过应用抗肝癌ｍＡｂ提高肝癌的早期诊断率。然而目前获得的抗肝癌ｍＡｂ识别的抗原都不是肝癌特异性抗原，而且由于肿瘤异质性的存在，又使其临床应用受到一定影响。本研究应用自建的人肝癌细胞株ＨＣ１０８免疫小鼠，制备了１株能稳定分泌抗人肝癌ｍＡｂ的杂交瘤细胞。免疫组化证实，该ｍＡｂ具有较好的特异性，其识别的肿瘤抗原主要定位于细胞膜。现将建株过程和初步鉴定的结果报道如下：１…     

人膀胱移行细胞癌细胞株BLZ—211的生物学特性

以膀胱移行细胞癌患者的肿瘤标本为材料建立了１株克隆性膀胱癌细胞株ＢＬＺ－２１１，体外培养３年多，传代１５０次，没有支原体污染。生物学特性鉴定：光镜和超微结构显著该细胞具有膀胱移行细胞细胞特征。     

HLA-B27抗原检测与强直性脊柱炎的关系

强直性脊柱炎 (ankylosingspondylitis ,AS)主要症状是腰、骶及下肢关节疼痛 ;晚期患者脊柱僵硬呈板状 ,活动受限 ,本病致残率高。近年来 ,随着白细胞抗原 (HLA)与疾病关系的研究不断深入 ,其中最具典型意义的当数HLA B2 7抗原与强直性脊柱炎二者之间呈高度相关性。我院自 2 0 0 2年开展HLA B2 7抗原检测 ,现将结果报道如下。1　材料和方法1 1　研究对象来自我院 2 0 0 2年至今病房和门诊的AS患者 ,均符合 1984年纽约修订标准 ,男性 14 5例 ,女性 4 0例 ,年龄 7～ 70岁。1 2　仪器和试剂流式细胞仪为美国Coulter公司生产 ,型号EPIC…     

PI3K抑制剂对食管癌Eca-109细胞株放射增敏作用及机制

目的:研究PI3K抑制剂对食管癌细胞株Eca-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eca-109为实验对象,MTT法观察PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT-PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs mRNA表达;流式细胞技术检测细胞周期.结果:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时即可降低Eca-109细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.58.药物LY294002组DNA-PKcs mRNA表达受抑,但与对照组比较差异无统计学意义;照射组表达较对照组明显升高(P<0.05);药物LY294002+照射组的表达较照射组下降(P<0.05).药物LY294002组G2期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义,照射组较对照组升高(P<0.01),药物LY294002+照射组G2期细胞比例较照射组下降(P<0.05).结论:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有放射增敏作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs及减少G2期细胞...     

应用染色体G显带技术评估辐射剂量和染色体畸变的量效关系

目的：应用染色体G显带技术观察4MV的X线辐射后的染色体畸变情况,分析不同类型的染色体畸变和辐射剂量的关系。方法：以4MV的X线0.5、1、2、4Gy对离体人外周血进行辐照,其淋巴细胞培养后,采用染色体G显带分析不同类型的染色体畸变率。结果：染色体双着丝粒、缺失、易位以及片段畸变和辐射剂量呈线性正相关,其线性趋势线和R~2值依次分别为：Y=24.1X-13.3（R~2=0.975）;Y=10.5X-2.7（R~2=0.887）;Y=30.2X-17.8（R~2=0.913）;Y=53.3X-38.7（R~2=0.976）。结论：染色体G显带技术可以较非显带技术提供更多更准确的畸变信息,为进一步研究提供借鉴。