实验性胃癌及癌前病变的病理生物学与防治系列研究

本项目通过MNNG诱发大鼠胃腺癌、前胃鳞癌及癌前病变的病理形态学动态观察、组织化学、凝集素亲合组织化学、形态定量、电镜等研究，深入探讨其病理生物学特性，继而研究大蒜、大蒜绿茶合剂、亚硒酸钠抑制MNNG诱发实验性胃癌及癌前病变，以及诱发过程对血脂、免疫功能与外周血淋巴细胞微核率的影响。通过建立人胃癌裸鼠移植模     

鼻咽癌STGC3基因转录调控元件分析与鉴定*

目的：分析并鉴定STGC3基因转录调控元件,探讨鼻咽癌STGC3基因的转录调控分子机制。方法：运用 生物信息学,预测并分析STGC3基因核心启动子区的转录因子结合位点;将相关转录因子结合位点,制备3 种探 针即生物素标记野生型、突变型及未标记野生型;提取CNE2细胞核蛋白,利用电泳迁移率变动分析（ EMSA） 及染色质免疫共沉淀（ ChIP）分析,体内外鉴定转录因子结合位点。结果：在STGC3基因核心启动子区存在21 个转录因子结合位点,其中9 个为Sp1 转录因子结合位点;进一步严格限定参数,STGC3基因核心启动子区域含 有转录因子结合位点5 个,其中Sp1 转录因子结合位点2 个;EMSA和ChIP 实验结果显示,STGC3基因中存在转 录因子Sp1 特异性结合位点,从而鉴定出STGC3基因转录调控元件。结论： STGC3基因核心启动子区含有Sp1 特异性结合位点,为该基因的转录调控元件。     

p33ING1b 基因对SW480细胞生长增殖的影响

背景与目的:p33ING1b基因作为一个新的候选抑瘤基因,具有多种生物学功能.本实验旨在研究p33ING1b基因对人结肠癌细胞SW480生长的影响.方法:经Western印迹和免疫细胞化学鉴定,通过生长曲线绘制、软琼脂集落形成实验和流式细胞仪分析检测p33ING1b基因转入对SW480细胞生长增殖以及细胞周期改变和凋亡率方面的影响,并用Western印迹法,检测3组细胞p53、p21WAF1、Bax及Bc1-2蛋白的表达情况,探讨p33ING1b基因抑瘤的可能分子机制.结果:与未转染组(SW480)和空载体组(pcDNA3.1( )/SW480)相比,p33ING1b蛋白转染组(pcDNA3.1( )/p33ING1b/SW480)细胞生长增殖速度减慢(P＜0.05);软琼脂集落形成率降低(P＜0.01);凋亡率增高(P＜0.05),而对细胞周期的改变不明显(P＞0.05).p33ING1b基因在SW480细胞中高表达,能有效抑制SW480细胞的生长,并促进其凋亡.Western印迹法分析显示SW480细胞中p33ING1b基因高表达,导致Bax蛋白表达水平升高、Bc1-2蛋白质表达水平降低,差异有显著性(P＜0.05):p53及p21WAF1蛋白表达水平稍有升高,但差异无显著性(P＞0.05).结论:高表达外源性p33ING1b基因后,SW480细胞生长增殖速度减慢,凋亡增加,其机制可能与Bax蛋白表达上调、Bc1-2蛋白表达下调有关.     

EB病毒与淋巴瘤关系的研究进展

淋巴瘤是人类常见的恶性肿瘤之一，其病因比较复杂，可能与病毒感染、免疫缺陷、电离辐射和基因突变有关。Epstein—Barr病毒（EBV）已确定是引起人类传染性单核细胞增多症的病因，并与人类恶性肿瘤，如鼻咽癌、淋巴瘤、霍奇金病的关系非常密切，其中Burkitt淋巴瘤和鼻咽癌的密切相关性已被公认。现就淋巴瘤与EBV关系的研究进展，综述如下。     

结直肠癌中FHIT蛋白的异常表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌中脆性组氨酸三联体(FH IT)基因蛋白表达状况与临床病理指标的关系。方法采用半定量免疫印迹(W estern b lot)检测30例结直肠癌及其癌旁正常组织(≥5 cm)FH IT蛋白表达状况。结果30例癌组织有56.7%的FH IT蛋白表达异常,FH IT蛋白表达量与患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小及组织学类型无关(P>0.05)而与肿瘤的组织分化程度、浸润深度、Dukes分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。在浸润深度越深、分化程度越低、Dukes分期越晚和有淋巴结转移的癌组织中,FH IT蛋白低表达越明显。结论FH IT蛋白表达状况可能与结直肠癌组织学分级、浸润程度、Dukes分期及淋巴结转移相关,提示FH IT蛋白表达降低可能对结直肠癌发生、发展具有重要作用。     

siRNA干扰survivin对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨siRNA沉默survivin基因表达对人胃癌SGC-7901细胞用期、增殖、凋亡的影响及其作用机制的初步探讨.方法 针对survivin mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞.MTT法检测SGC-7901细胞增殖;RT-PCR法检测survivin、caspase-3基因表达;Western blot检洲survivin、caspase-3表达;细胞免疫组织化学检测survivin表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况.结果 survivin siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中survivin的表达,与空白对照组比较.survivin siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P＜0.05);survivin在mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05),caspase-3在mRNA水平变化不明显(P＞0.05),而在蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);survivin siRNA组细胞凋亡率增高(P＜0.05).结论 survivinsiRNA可以下调胃癌SGC-7901细胞survivin基因的表达,抑制细胞的生长活性,并促进其凋亡.     

p16蛋白表达与胃癌浸润转移的关系

p16基因是近年来克隆出来的一个新的抑癌基因,定位于9p21,由2个内含子和3个外显子组成,全长8.5kb.3个外显子共同编码分子量为15.84kd、148个氨基酸组成的单链多肽-P16蛋白,参与正常细胞生长调控[1].研究资料表明在人类多种肿瘤细胞系及原发肿瘤中存在p16基因的异常及p16蛋白表达的缺失.本文就p16蛋白表达与胃癌浸润、转移等生物学行为的关系进行了分析,报告如下.     

Runx3基因在胃癌中的表达及其表达下调机制

目的:观察Runx3基因在人胃癌组织及相应正常胃组织中的表达分布特点,并对其表达下调的机制进行初步研究．方法:对25例胃癌标本进行DNA、RNA和蛋白的提取,利用单链构象多态性(SSCP)和微卫星法,检测Runx3基因突变和缺失情况．用 MSP(methylation specific PCR)检测25例胃癌标本及细胞株(MGC803,SGC7901)的甲基化状态．分别以蛋白印迹法(western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测Runx3蛋白质和mRNA水平．结果:在25例胃癌标本中发现一例杂合性缺失,未发现Runx3第三外显子突变．MSP法检测胃癌标本中55％(14/25)发生启动子区域的甲基化,同时在胃癌细胞株MGC803中Runx3 基因发生了部分甲基化．Western blot和RT- PCR发现Runx3在胃癌组织中表达明显低于相应正常胃组织(蛋白:50 178±14 404 vs 95 020±43 136,P<0．01;mRNA:0．66±0．31 vs 1．06±0．34,P<0．01)．结论:Runx3基因在胃癌组织中表达较正常组织明显下调,提示该基因与胃癌的发生和发展有关．Runx3基因表达下调的机制主要是因为启动子区域甲基化．     

胃癌及癌前病变中P16蛋白表达的研究

采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法（Ｓ－Ｐ法），研究Ｐ１６蛋白在胃癌和癌前病变（不典型增生、慢性萎缩性胃炎及慢性消化性胃溃疡）中的表达。结果显示，Ｐ１６蛋白阳性表达：胃癌４７．５４％（５８／１２２），癌前病变９０．００％（７２／８０），正常胃粘膜９６．２５％（７７／８０），高分化腺癌３７．９３％（１１／２９），低分化腺癌５１．２２％（２１／４１），未分化癌５７．６９％（１５／２６），印戒细胞癌６２．５０％（１０／１６），粘液腺癌１０．００％（１／１０）。经统计学处理，胃癌组与正常对照组及癌前病变组间的差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；粘液腺癌与低分化腺癌、未分化腺癌及印戒细胞癌之间的差异也均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。