四环素调控livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响

目的： 探讨四环素调控（Tet-on）livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统。 方法 : 构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以 Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达,并以四环素腹腔注射诱导处理,了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观 察其抑制肺癌细胞增殖情况。 结果: 经四环素诱导,Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-on- NC组,且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[ （5.31±0.86）vs（8.22±0.63）、 （7.17±0.54）g,P<0.05];提示 该调控系统可显著下调livin的表达,并抑制肺癌皮下移植瘤的生长,且该调控系统毒副作用小,未发现裸鼠死亡。 结论: Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长,具有靶向性、可调控的特点,为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提 供重要的研究工具。     

CXCR4/SDF-1 轴调节人肺腺癌PC-9 细胞对Bends细胞血脑屏障模型功能的影响

目的：通过建立体外血脑屏障（blood brain barrier，BBB）模型，探讨人肺腺癌PC-9 细胞在CXCR4/SDF-1 轴作用下对BBB紧密连接蛋白的影响。方法：利用永生化的小鼠脑微血管内皮细胞Bends 进行单层培养，建立体外BBB模型；通过跨内皮细胞电阻（transendothelial electrical resistance，TEER）测定及荧光素钠通透性实验判定体外BBB模型的功能状态以及观察PC-9细胞对体外BBB 模型功能的影响。Western blotting 检测PC-9 细胞在CXCR4 抑制剂AMD3100、SDF-1 单独或联合（1 μg/ml AMD3100，100 ng/ml SDF-1，AMD3100+SDF-1）作用下对BBB模型功能和内皮细胞紧密连接蛋白表达的影响，Transwell 迁移实验检测CXCR4/SDF-1 轴对PC-9 细胞跨BBB模型细胞层迁移能力的影响。结果：Bends 细胞单层培养可形成紧密连接的“屏障”并产生较高的TEER，第96 h 达到（182.13±5.19）Ω·cm2；同时行荧光色钠通透性实验结果显示，BBB具有良好屏障性能，其通透率低于空白对照组（P<0.05）。PC-9 细胞作用后，BBB模型TEER逐渐降低，第24 h 降至（46.7±4.35）Ω·cm2；同时BBB 通透率较作用前显著提高（P<0.05）。PC-9 细胞在AMD3100 作用下能够上调内皮细胞紧密连接蛋白的表达（P<0.05）；AMD3100 处理组的PC-9 细胞穿过BBB的细胞数较空白组明显减少[ （43±2）vs（81±2）个，P<0.05]。结论：AMD3100 能够减弱PC-9 细胞对Bends 细胞建立的体外BBB模型紧密连接的破坏能力。     

EGFR基因突变型与野生型非小细胞肺癌脑转移预后的病例对照研究

目的：探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突变与非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）伴脑转移患者预后的相关性，为改善NSCLC合并脑转移患者预后、指导个体化治疗提供临床依据。方法：回顾性分析福建省立医院2013年1月1日至2018年9月30日期间收治的88例NSCLC合并脑转移患者的临床资料，随访取得患者的死亡时间，随访截止日期为2019年10月31日。收集和分析的临床资料包括性别、年龄、吸烟史、病理类型、基因检测、治疗情况、无进展生存期（progression free survival，PFS）、总生存期（overall survival，OS）等。运用生存分析（Kaplan-Meier生存时间曲线）评价EGFR突变型患者的预后，以单因素分析（log-rank检验）预测影响EGFR-TKI治疗效果的因素。结果：88例NSCLC脑转移患者有57例为EGFR突变型，其中位PFS（MPFS）为13.0个月（95%CI：11.951~14.049），明显高于EGFR野生型患者（P=0.003），患者中位生存期（median survival time，MST）为29.0个月（95%CI：20.531~37.468），明显高于EGFR野生型（P=0.001）。EGFR突变型中，Exon19-del突变组患者较Exon21 L858R突变组患者OS有延长趋势（P=0.05），Exon19-del+Exon20T790M突变组患者OS较Exon21 L858R突变组有延长趋势（P=0.077）。结论：EGFR突变组较野生型组NSCLC脑转移患者预后相对好些，且携带19外显子单一缺失突变的患者预后最好。     

胸腔原位种植与经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的比较

【摘要】目的 分别通过胸腔原位种植与经左心室注射的方法，建立可行的肺癌脑转移动物模型，为下一步研究肺癌脑转移机制提供一种可靠的造模方法。方法 18只Balb/c/nude裸鼠随机分为2组，分别经胸腔原位种植与经左心室注射的方法，接种处于对数期生长的人肺腺癌PC-9细胞(1×106/0.1ml)，接种后观察裸鼠状态，在裸鼠出现严重恶液质时处死。解剖裸鼠，观察肺、脑、肝、肾转移情况；病理取材、HE染色观察。结果 胸腔原位种植组：3周后，第4、6、9号裸鼠可见胸壁瘤结凸起形成，渐增大；裸鼠于第4-6周开始出现体重减轻，并逐渐出现恶液质，分别于第5-7周处死。开胸后见：胸腔广泛灰白色肿瘤结节、团块形成，双侧肋骨、胸膜、脊柱多发种植灶，双肺被侵蚀压缩，颜色苍白，形态改变。HE染色见：肺表面广泛种植瘤形成，与正常肺组织分界清楚；仅6号裸鼠出现脑转移。 经左心室注射组：裸鼠于第3周开始出现体重下降，并逐渐出现恶液质，全部裸鼠于第4周处死。开胸后：除11、18号裸鼠胸壁见2-3个散在瘤结分布（直径约1-3mm），其余胸腔视野正常；肺组织轮廓清楚，未见瘤结生成。HE染色见：9只裸鼠均出现大小不一的多发脑转移灶。胸腔原位种植组：脑转移率为11.1%；经左心室注射组：脑转移率为100%。结论 经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的方法，较胸腔原位种植的方法保证了更高的脑转移率。     

肺腺癌脑转移动物模型的生物发光成像和SPECT/CT的比较

目的 探究环磷酰胺(CY)剂量和检测终点对BALB/c小鼠免疫抑制模型效果的影响.方法 将BALB/c小鼠按照体质量随机分为对照组、CY 40 mg/kg组、CY 60 mg/kg组,此三组均设末次给药后第5日为检测终点,并设CY 60 mg/kg-2组,末次给药后第3日为检测终点,检测终点时进行血液学检查,测定脾脏、胸腺的脏器重量,检测T、B淋巴细胞介导的免疫功能改变.结果 与对照组相比,各模型组上述检测指标均有不同程度的改变;比较各模型组结果,当检测终点相同时,60 mg/kg剂量造模效果更好;固定CY剂量,选择末次给药第3日为检测终点效果更优.结论 CY剂量和检测终点的不同会影响BALB/c小鼠免疫抑制模型效果,选择60 mg/kgCY剂量的造模效果优于40 mg/kg;末次给药后第3日更适合作为免疫评价模型的检测终点.     

裸鼠肺癌脑转移模型中血脑屏障超微结构的观察

【摘要】目的 通过硝酸镧示踪电镜技术观察裸鼠肺癌脑转移模型中血脑屏障的超微结构。方法 从8只Balb/c/nude裸鼠随机选取6只经左心室注射的方法，接种处于对数期生长的人肺腺癌细胞PC-9(1?0^6个/0.1ml)，作为模型组；另2只裸鼠未经任何处理作为空白组。接种后观察裸鼠状态，在第四周行硝酸镧示踪电镜技术观察血脑屏障的超微结构，并留取肺、脑脏器，病理HE染色观察。结果 模型组裸鼠于第3周开始出现体重减轻，并逐渐出现恶液质，全部裸鼠于第4周处死。肉眼取材时，胸廓、肺、脑脏器均为见到转移灶。HE染色示：模型组裸鼠均出现大小不一的多发脑转移灶。硝酸镧示踪电镜示，模型组可见硝酸镧颗粒侵入到血管腔外，稀疏或者弥漫地分布在脑组织中，空白组镧颗粒仅沉积在血管腔内。结论 弥散分布地镧颗粒说明了模型中血脑屏障结构的不完整性，而肺癌脑转移的发生伴随着血脑屏障结构的破坏。