CXCR7与肿瘤的生长和转移

CXCR7\[chemokine (C-X-C motif) receptor 7\]是一个近年来新发现的基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor 1, SDF-1)的受体,由 RDC1 基因编码,通过与CXCL11及SDF-1结合发挥其生物学效应。CXCR7在多种肿瘤细胞表面高表达,在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用,促进肿瘤细胞的存活和生长、黏附与侵袭、肿瘤血管新生及癌细胞转移。与其他趋化因子受体不同,CXCR7在与SDF-1结合后,并不引起钙离子内流和趋化反应,而是通过建立合适的趋化因子的梯度,与CXCR4 \[chemokine (C-X-C motif) receptor 4\]相互协调发挥作用。以CXCR7为靶点的肿瘤分子治疗研究不断增加,有望为肿瘤治疗提供新的方法。     

血清SAA、hs-CRP、Cys-C和尿微量白蛋白联合检测在糖尿病肾病早期诊断的临床应用

目的 探讨血清SAA、hs-CRP、Cys-C和尿微量白蛋白联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的临床应用价值.方法 选取2020年6月至2021年5月本院收治的200例糖尿病患者,按尿微量白蛋白排泄率分为单纯糖尿病组(n=57)、早期糖尿病肾病组(n=53)、中期糖尿病肾病组(n=45)和晚期糖尿病肾病组(n=45),同时,选取同期在本院进行健康体检者100名作为对照组,比较各组血清CysC、SAA、hs-CRP及尿mALB检测结果,各项血清指标检测阳性率及四项联合血清指标检测阳性率.结果 对照组SAA、CysC、hs-CRP及尿mALB水平低于单纯糖尿病组,单纯糖尿病组低于早期糖尿病肾病组,早期糖尿病肾病组低于中期糖尿病肾病组,中期糖尿病肾病组低于晚期糖尿病肾病组;四项联合指标检测阳性率为93.00％,高于单项血清指标(P<0.05).结论 血清SAA、CysC、hs-CRP及尿mALB指标水平均可作为糖尿病肾病的生物学指标,四者联合检测可有效提升糖尿病肾病早期诊断准确性,值得临床推广应用.     

CXCR4 特异性拮抗剂 SDF-1P2G54 的构建及活性研究

对SDF-1进行遗传改造，将其第二位氨基酸由脯氨酸（P）突变为甘氨酸（G），且缺失其C-端α螺旋结构，以获得一种CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法 将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+)，并转化BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化，并通过梯度稀释和超滤方法得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54对Jurkat细胞的趋化活性及对SDF-1趋化活性的抑制效应，流式细胞仪检测SDF-1P2G54 诱导 MOLT4 细胞钙内流及细胞表面 CXCR4 内在化的能力。结果 SDF-1P2G54 完全丧失激活 CXCR4、趋化Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力，却保持了与CXCR4的高亲和性，能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化。结论 SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂，具有开发成抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。     

重组腺病毒Ad-P2G-DCN的构建及在HEK-293细胞中的表达

目的制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况。方法以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5’端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN。PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN。荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况。结果构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN。结论成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础。     

CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54的构建及活性评价

摘要：目的对SDF-1进行遗传改造,将其第2位氨基酸由脯氨酸（P）突变为甘氨酸（G）,且缺失其C-端α螺旋结构,以获得一种
CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+),并转化
BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化,并通过梯度稀释和超滤方法
得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54 对Jurkat 细胞的趋化活性及对SDF-1 趋化活性的抑制效应,流式细胞仪检测
SDF-1P2G54 诱导MOLT4 细胞钙内流及细胞表面CXCR4 内在化的能力。结果SDF-1P2G54 完全丧失激活CXCR4、趋化
Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力,却保持了与CXCR4的高亲和性,能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的
趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化。结论SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂,具有开发成
抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。