肾上腺素能β1受体亚型特异性抗体的制备及鉴定

【目的】制备和鉴定 β1受体亚型特异性抗体。【方法】人工合成 β1受体细胞膜外第二环 197 2 2 2位氨基酸序列作为抗原。连接钥孔冒贝血蓝蛋白 (KLH)增加抗原性后免疫兔获得抗血清。通过凝胶双扩散实验和ELISA法鉴定其效价 ;通过免疫荧光法及ELISA法鉴定其特异性 ;通过离体蛙心灌流实验鉴定其药理活性。【结果】该抗血清效价高 (分别为 1∶6 4和 1∶10 6)、特异性强 ,能和心肌 β1受体发生特异性结合 (1∶10 4 ～ 1∶10 5) ,为异丙肾上腺素的非竞争性拮抗剂。 (pD2 ′ =1 6 2 )。【结论】成功制备的 β1受体亚型特异性抗体可能成为进一步研究 β1受体分布、功能和定量的有力工具。     

人血管生长素的亚细胞定位

已有大量研究表明血管生成素（angiogenin，ANG）与肿瘤的快速生长和转移有密切的关系，肺癌、胰腺癌、乳腺癌等患者的外周血血清中，ANG的水平明显升高，血清ANG的水平与这些肿瘤的发展及转移呈显著正相关，因此，可以检测血清中ANG的水平来预测肿瘤的发生与发展情况。此外，ANG对于创伤、烧伤及血循环较差的股骨头、半月板等损伤的修复具有较大的临床应用价值。在本研究中我们构建了人ANG真核表达质粒，转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行表达，并作了初步的亚细胞定位。     

扩张型心肌病与β1 受体自身抗体关系初探

目的 探讨抗β1受体自身抗体与扩张型心肌病（DCM）之间的关系。方法 以人心脏β1受体细胞外第二环表位肽段作为抗原，应用酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，检测28例DCM患者和32例正常人血清中β1受体的自身抗体。结果 DCM患者血清中有13例（46％）抗β1受体自身抗体阳性，正常人血清中有2例（6％），两组阳性率差异有显著性（P＜0．01）；DCM组自身抗体平均几何滴度为1：92，显著高于正常对照组1：20（P＜0．01）；DCM患者中自身抗体阳性者的抗体滴度在不同心功能间的分布差异有显著性（P＜0．001）。结论 DCM患者存在着β1受体自身抗体且其滴度也明显高于正常对照组。     

LAK细胞治疗恶性肿瘤对T淋巴细胞rDNA转录活性的影响

 我院自1994年起 ,对 35例晚期难治性恶性肿瘤患者采用微量输液泵经外周淋巴管回输LAK细胞的方法进行了治疗 ,对治疗前后外周血T淋巴细胞核仁组成区嗜银 (Ag NORs)蛋白进行了测定 ,取得了一定的疗效 ,现报道如下.     

人癌胚抗原重组痘苗病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫

目的：研究人癌胚抗原重组痘苗病毒（rV-CEA)转染外周血树突状细胞（DC）后在外体诱导的抗CEA分泌性肿瘤免疫。方法：分离晚期结肠癌患者的外周血单核细胞，在体外用人重组粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素4（IL－4）培养成DC，再用rV-CEA转染DC后激发自体T细胞，观察其体外激发自体T细胞的增殖能力及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对自体CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性，并与野生型痘苗病毒（W－VV）及无病毒转染的DC所激发的T细胞进行比较。结果：经rV-CEA转染的DC能显著刺激自体T细胞的增殖，其激活的T细胞对CEA分泌性自体肿瘤细胞具有特异性杀伤作用。结论：rV-CEA转染的DC可以诱导体CEA分泌性肿瘤免疫。     

胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原(CEA)抗体的检测及意义

目的：探讨循环中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）特异性抗体的情况，评价ＣＥＡ及抗体的联合检测在胃肠道癌诊断中的作用。方法：用放免法检测血清中 ＣＥＡ含量，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体，用竞争抑制法检测抗体的特异性。结果：胃肠道癌患者血清 ＣＥＡ含量升高者（≥１５ ｎｇ／ｍｌ）为 ３０．９％（２１／６８），抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为３５．３％（２４／６８），ＣＦＡ及抗 ＣＥＡ抗体的联合检测可使阳性率提高到５４．３％（３７／６８）；胃肠道良性疾病患者（多发性息肉、溃疡、胰腺炎等）血清ＣＥＡ升高者为３．３％（１／３０），抗 ＣＥＡ　ＩｇＧ抗体阳性者为 ３．３％（１／３０）；健康对照组血清 ＣＥＡ升高者为 ０，抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为 ２．５％（１／４０）。结论：胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）抗体的检出率较高，这些抗体可作为胃肠道癌的一种肿瘤标志物。     

钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用

目的研究钙离子载体(CI)能否诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)，并初步探讨其信号转导途径。方法分离健康献血者的PBMC，在体外用CI(A23187)或人重组粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和CI培养40h，或rhGM-CSF和白细胞介素4(IL-4)培养7d，部分PBMC预先用W-7或CsA或K35926处理30min后，再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83等分子的表达，MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果健康献血者的PBMC经CI培养40h，或rhGM—CSF与CI培养40h，或rhGM-CSF与IL-4培养7d，均可获得DC的典型形态和表面分子的表达，包括CD14表达下调、共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用；CI诱导的DC其CD14分子的下调及CD83分子的上调更明显，刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强；rhGM-CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM—CSF及CI处理的PBMC，其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力，均受到W-7或CsA或KT5926不同程度的抑制；而rhGM-CSF及IL-4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。结论CI可快速诱导PBMC向DC分化，其分化过程可能受控于Ca^2 /钙调蛋白及其下游的多个细胞信号转导途径的调节。     

人血管生成素的基因克隆及真核表达

血管生成素 (angiogenin ,ANG)是存在于正常血浆及实体肿瘤组织中的一种属于核糖核酸酶超家族[1] ,分子量为 14 1kD、pI9 5的蛋白质 ,基因定位于染色体 14q11。ANG是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子 ,具有很强的促血管生成作用。因此开展ANG的相关研究在损伤修复及组织工程学中极有意义。本文旨在构建ANG真核表达载体 ,转染人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,研究其在HUVEC中的表达情况 ,为进一步研究ANG对HUVEC生长状况的影响以及ANG在组织工程学中的应用奠定基础。1　材料与方法1 1　材料　EcoRⅠ、BamHⅠ为Promega产品 ,…     

植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞体外抗肿瘤作用的MTT比色法分析

目的　检测植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞（ＰＨＡ－ＬＡＫ）的体外广谱抗肿瘤作用。方法 用ＭＴＴ比色法测定 ＰＨＡ－ＬＡＫ对体外培养的Ｋ５６２、ＭＧｃ８０－３、１４３ＴＫ－、ＨｅＬａ、ＬｏＶｏ等５种肿瘤细胞的杀伤活性。结果ＰＨＡ－ＬＡＫ对５种不 同组织器官来源的肿瘤细胞均有明显杀伤活性,在效靶比为７．５：１．０时,ＰＨＡ－ＬＡＫ对１４３ＴＫ－细胞的杀伤率可高达 ５７．３％,杀伤效应随效靶比增加而升高;但在效靶比为１５：１时,杀伤效应不随效靶比增加而增高数。结论　（１）来自健康献血 员的ＰＨＡ－ＬＡＫ对肿瘤细胞具非特异性杀伤活性,能较好解决传统过继免疫治疗中免疫效应细胞的数量和活性问题; （２）在一定的条件下,ＭＴＴ法用于检测免疫效应细胞的杀瘤作用时才具灵敏、可靠的优点。     

两个抗普通型急性淋巴母细胞性白血细胞抗原(CLLA)的单克隆抗体产生及鉴定

用杂交瘤技术制备了两个J_5样单克隆抗体分泌杂交瘤株55,79。用间接免疫荧光法检查发现,55、79单克隆抗体与15个不同白血病或淋巴瘤细胞系、人外周血单个核细胞、PHA转化人外周血淋巴母细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板及人骨髓细胞的反应性与J_5单克隆抗体的反应性十分相似(见表1)。此二抗体与11例急性白血病患者白血细胞反应性与J_5抗体完