BVDV-1 VLPs的构建及免疫原性研究北大核心CSCD

目的利用C、E0、E1和E2蛋白构建BVDV病毒样颗粒,并评价BVDV-1 VLPs的免疫原性。方法以BVDV-BA株为模板通过反转录得到C、E0、E1和E2基因,再将C、E0、E1和E2基因分别克隆至PEASY-Blunt Simple克隆载体上。提取质粒摇菌扩大培养,将得到的C、E0、E1和E2基因克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Bac HTA中,采用热激法将重组穿梭质粒转化至DH10.Bac大肠埃希菌感受态细胞,通过蓝白斑筛选技术获得重组杆粒rB-C、rB-E0、rB-E1和rB-E2。将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒;再用构建的4种重组杆状病毒同时感染SF9悬浮细胞,72 h后收集细胞沉淀进行超声破碎,利用蔗糖垫超速离心和蔗糖密度梯度离心进行纯化,通过Western blot和透射电镜进行鉴定。将获得的BVDV-1 VLPs联合氢氧化铝佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体水平评价VLPs的免疫原性。结果成功克隆出C、E0、E1和E2基因,并构建C、E0、E1和E2蛋白的杆状病毒。通过纯化和鉴定,在20%~30%蔗糖层获得由C、E0、E1和E2蛋白组成结构完整的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。BVDV-1 VLPs能够显著增加免疫小鼠的特异性抗体表达水平。结论构建并获得了由C、E0、E1和E2蛋白组成,并具备良好免疫原性的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。     

人胎盘催乳素的纯化与鉴定

以正常产妇的新鲜胎盘为原料，经过盐析、等电点沉淀、离心等粗提，再经ＤＥＡＥ─纤维素阴离子交换层析，Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００凝胶过滤，并首次利用圆盘制备电泳纯化。最后获得人胎盘催乳素纯品，其活性采用１２５Ｉ－ｈＰＬ放免检测药盒测定。     

培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响

目的培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响.方法用含有不同浓度小牛血清的细胞培养液培养人前列腺癌细胞系(PC-3)和人雄激素非依赖型前列腺癌细胞系(PC-3M),培养3天后,进行细胞记数并用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中血管生成素的含量.结果(1)不同浓度的小牛血清对前列腺癌的增殖有不同的影响,浓度越高增殖速度越快;(2)上清中的血管生成素与细胞增殖结果呈正相关.结论培养液中血清含量高细胞的增殖速度快;外源血管生成素的缺乏能够刺激细胞分泌更多的血管生成素来维持细胞的增长.     

贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

目的：探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法：利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果：贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力（P<0.01）,诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞（P<0.01）,降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平（均P<0.01）。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙（0.75 mg/kg）显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织...     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

双特异性溶瘤腺病毒通过调节活性氧引起人肺癌细胞凋亡

目的探讨双特异性溶瘤腺病毒ATV引起人肺癌A549细胞凋亡与活性氧含量之间的关系。方法应用本实验室构建的双特异性溶瘤腺病毒ATV,通过CCK-8法检测ATV对A549细胞增殖的抑制作用;通过Hoechst和Annexin V-FITC/PI流式检测法检测A549细胞的凋亡情况;通过人活性氧Elisa试剂盒测定A549细胞内活性氧水平。结果 CCK-8法检测结果表明,ATV感染剂量为10 MOI和50 MOI作用时间为48 h和72 h时,对A549细胞具有显著性的抑制作用。Hoechst染色结果显示,感染ATV的A549细胞呈现核碎裂典型的浓染和边集现象,具备细胞凋亡的典型特征;Annexin V-FITC/PI流式检测结果表明ATV在12、24、48、72 h均能诱导A549细胞不同程度的凋亡,并且凋亡率随时间增长而提高;胞浆活性氧检测结果表明,ATV感染A549细胞12、24、48、72 h,A549细胞活性氧水平随时间的增长而提高,具有时间效应。结论 ATV对A549细胞有抑制作用且该作用具有明确的时效与剂效关系;ATV通过使A549细胞内活性氧含量增加引起细胞凋亡进而发挥对A549细胞的抑制作用。     

人胎盘催乳素（hPL）免疫小鼠淋巴细胞转化的实验研究

目的；研究ｈＰＬ的两个亚型对小鼠免疫功能的影响。方法：用ＭＴＴ法检测小鼠外周血及脾细胞对ＣｏｎＡ刺激Ｔ细胞增殖的反应性和Ｌｐｓ刺激Ｂ细胞增殖的反应性。结果；两型免疫小鼠后，均使淋巴细胞转化率增加与对照组相比差异显著。结论：表明两型在增强机本细胞免疫方面均起到一定的作用。