Egr-1对低氧应激下肝癌细胞BEL-7402黏附和迁移能力的影响

目的探讨显性负性突变（dominant negative）抑制即刻早期蛋白Egr-1转录因子活性对低氧应激下肝癌BEL-7402细胞黏附和迁移能力的影响。方法构建显性负性突变Egr-1腺病毒,感染BEL-7402细胞,同时以空载体和空白细胞做对照。“划痕”实验检测细胞迁移能力的变化;细胞与基质黏附实验,免疫荧光检测Egr-1对黏附能力的影响;Westernblot检测相关蛋白的改变。结果成功构建获得Egr-1转录功能竞争抑制型稳定腺病毒,并感染BEL-7402细胞。与BEL-7402细胞比较,低氧状态下Ad-dnEgr-1/BEL-7402组细胞,迁移,黏附能力显著降低（P<0.01）,细胞中与迁移、粘附相关的微丝所形成的伪足结构明显减少,FAK蛋白磷酸化水平降低。结论抑制Egr-1转录因子功能可以抑制肝癌BEL-7402细胞的迁移和黏附。     

人脐带间充质干细胞来源外体提取方法的比较

目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体(hucMSC-Ex)在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE分析二者的蛋白质组分,western blot检测二者的表面标志蛋白CD9和CD81,免疫荧光法检测二者内化至靶细胞EA.hy926的数量。结果两种方法提取的hucMSC-Ex均为直径约30~100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构;在相同蛋白质总量下,差速离心法提取的hucMSC-Ex高丰度蛋白质含量明显低于蔗糖密度梯度离心法,但其表面标志蛋白CD9和CD81的表达量却明显高于蔗糖密度梯度离心法;在相同蛋白质浓度下,差速离心法提取的hucMSC-Ex被靶细胞EA.hy926细胞内化的数量更多。结论两种方法均能成功提取hucMSC-Ex,差速离心法提取的hucMSC-Ex纯度更高,而高丰度蛋白质含量明显降低。     

外泌体内分子标志物检测及其临床应用

外泌体(exosome)是一类可由多种细胞分泌并包裹了蛋白质、mRNA、微小RNA(microRNA)、非编码RNA(lncRNA)、DNA、脂质等物质的膜性囊泡,研究发现exosome在细胞间通讯、肿瘤免疫、肿瘤治疗、组织损伤修复、疾病诊断中具有重要的意义。对不同来源的exosome携带的内容物进行分析并筛选其特异性的分子标志物,将为相关疾病的诊断及其发生发展的研究提供非常重要的帮助。Exosome可以在血液、尿液、唾液、胸腹水、乳汁、脑脊液、肺泡灌洗液等体液中被检出。随着exosome分离和分析检测技术的发展,越来越多分子标志物被发现,exosome内分子标志物有望为恶性疾病的早期诊断、预后判断提供新的依据。