新疆喀什地区结核分枝杆菌分离株氧氟沙星耐药基因gyrA突变位点分析

目的了解新疆喀什地区、石河子地区及华东地区结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的耐药性,分析耐药相关基因gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变的位置及类型,以比例法药敏试验为参照,评价DNA测序技术检测氧氟沙星耐药的效率。方法采用比例法药敏试验检测191株结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星药物的耐药性;对喹诺酮类药物耐药相关基因gyrA的QRDR区进行扩增与测序,分析耐药相关突变位点。以药敏试验结果为标准,通过Kappa值评价DNA测序和药敏试验在结核分枝杆菌临床分离株氧氟沙星耐药检测的一致性。结果 191株临床分离株结核分枝杆菌中16株为氧氟沙星耐药株,氧氟沙星总耐药率为8.37%。对gyrA基因QRDR区域扩增后测序,共发现4个位点存在突变;分别是第56、74、90、94位密码子。其中,第56位密码子处由CTC→CTG,为同义突变。74位密码子突变均发生在喀什分离株,由GCC→GTA,氨基酸由Ala突变为Val;90位密码子由GCG→GTG,氨基酸由Ala突变为Val;94位密码子突变占临床分离株耐药位点突变的71%,共发现GAC→TAC、GAC→GCC、GAC→GGC3种突变类型,第94位氨基酸Asp分别突变为Thr、Ala、Gly。与药敏试验结果比较,DNA测序对结核分枝杆菌临床分离株氧氟沙星耐药检测具有高度一致性(Kappa=0.895)。结论 gyrA基因第74、90、94位密码子的突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星药耐药有关,喀什分离株存在74位新突变位点。用DNA测序技术分析结核分枝杆菌gyrA基因氧氟沙星耐药相关突变对判断结核分枝杆菌氧氟沙星类药物耐药性具有较高的灵敏度和特异性,可为结核分枝杆菌氟沙星耐药性诊断提供依据。     

结核分枝杆菌Ag85蛋白复合物的原核表达及其在血清学诊断中的应用研究

目的构建结核分枝杆菌Ag85复合物原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,评价该家族蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值。方法以标准株H37Rv基因组为PCR模板扩增fbpA、fbpB及fbpC基因并克隆至原核表达载体,转化至C43(DE3)菌株后经诱导、表达、纯化获得重组蛋白Ag85A、Ag85B、Ag85C。分别以纯化蛋白包被酶标板,采用方阵滴定确定Ag85A、Ag85B、Ag85C蛋白间接ELISA的最佳条件,用优化的ELISA检测367份健康对照组血清及86份痰涂阳性结核病患者血清中的特异IgM、IgG抗体。结果成功构建Ag85复合物基因的重组质粒,经诱导表达获得Ag85A、Ag85B、Ag85C重组蛋白。分别以纯化的Ag85A、Ag85B、Ag85C为包被抗原,采用ELISA检测结核病人血清IgG抗体,灵敏度分别为65.1%、69.8%和41.8%,特异性分别为75.1%、78.1%和64.2%;以Ag85B+Ag85A或Ag85CIgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体的灵敏度为60.4%,特异性为86.1%。结论以Ag85B+Ag85A或Ag85C血清IgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体具有较好的灵敏度与特异性,可作为结核病血清学诊断方法。     

反相高效液相色谱法测定石斛属植物中7种化学成分及主成分与聚类分析

目的 建立石斛7种化学成分反相高效液相色谱-紫外光谱（RP-HPLC-UV）检测方法,探寻21种石斛属植物中的化学成分组成差异联系,为石斛质量控制和资源开发提供参考。方法 采用Agilent 1200高效液相色谱仪,XDB-C₁₈色谱柱,进样量5 μL,根据不同化学成分选择流动相,采用SPSS 20.0软件进行主成分分析和聚类分析。结果 21种石斛中7种化学成分组成及含量差异明显,有10种石斛未检测出毛兰素,其余11种石斛种质中鼓槌石斛的毛兰素量显著高于其他种;12种石斛未检测出槲皮素,11种石斛未检测出没食子酸,4种石斛未检测出香草醛,1种石斛未检测出柚皮素,21种石斛均检测出丁香酸和香豆素成分,其中以尖刀唇石斛香豆素含量显著高于其他种;通过主成分分析显示21种石斛化学成分在三维空间分布散乱,在类间距离为5左右时才能将21种石斛聚为6类,因此不同的石斛种在这7种化学成分组成及含量上存在明显区别,在使用这7种成分表征药理药效功能时不同石斛应当区别对待。结论 建立的RP-HPLC-UV法检测7种化学成分能在石斛质量控制以及不同种质资源开发策略方面提供参考。     

Rv0220蛋白IFN-γ释放试验对结核潜伏感染的诊断价值研究

目的 探讨Rv0220蛋白γ-干扰素(IFN-γ)释放试验(IGRA)在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)潜伏性感染中的诊断价值。方法 使用目前IGRA广泛使用的ESAT-6、CFP-10、TB7.7三种刺激抗原作为参照,用Rv0220蛋白刺激112例新疆喀什结核病防治中心(肺核医院)健康体检外周血样本,分析Rv0220蛋白在IGRA时检测结核潜伏性感染的灵敏性与特异性。结果 Rv0220蛋白在刺激IFN-γ释放水平上与ESAT-6、CFP-10、TB7.7混合抗原刺激无显著性差异,以ESAT-6、CFP-10、TB7.7混合抗原检测结果为参照,Rv0220的蛋白检测临床样本的灵敏性与特异性分别为72.73%、100%,阳性预测值为72.73%,阴性预测值为40%。结论 Rv0220抗原蛋白在人结核病外周血IFN-γ体外释放实验中可作为刺激原,对于结核潜伏性感染具有较高的诊断价值。     

2010－2011年新疆生产建设兵团第八师居民肝癌疾病负担研究

目的：恶性肿瘤已成为发达国家与发展中国家的主要死亡原因之一。我国恶性肿瘤死亡率逐年上升,给社会造成严重的疾病负担。本研究将了解新疆生产建设兵团第八师（简称八师）居民肝癌疾病负担情况,为制定相应防治策略和卫生规划提供科学依据。方法以2010－2011年八师肿瘤登记资料为基础,计算居民死亡率、潜在减寿年（poten-tial years of life lost,PYLL）、伤残调整生命年（disablity adjusted life year,DALY）等指标,评价八师肝癌疾病负担。结果2010－2011年八师肝癌死亡率、中标率和世标率分别为7．57／10万、3．72／10万和4．86／10万,男性死亡率（11．58／10万）高于女性（3．50／10万）。肝癌造成的 PYLL 为969人年,PYLL 率为8．4％;肝癌造成的 DALY 合计为1172．71, DALY 率为1．02／千人健康生命年,伤残损失健康生命年（years lived with disability,YLD）率和死亡损失健康生命年（years lived with disability,YLL）率分别为0．04／千人和0．98／千人,男性 YLL 率（1．56／千人）高于女性（0．40／千人）。PYLL 率与 DALY 率均随年龄增加而上升,45～＜50岁年龄组 PYLL 率及 DALY 率达到最高水平。结论八师居民肝癌疾病负担表现为男性高于女性,女性肝癌负担增加明显,45～＜50岁年龄组肝癌疾病负担最重。应加强肝癌的预防工作,减轻居民的肝癌疾病负担。     

微生物气溶胶的采集方法及研究进展

<正>空气中含有细菌、真菌、病毒、孢子和细胞碎片等生物性粒子的气溶胶称为生物气溶胶,又称微生物气溶胶。生物气溶胶在空气颗粒物中所占比例小,但可通过呼吸道、皮肤和消化道进入人体,引起感染、过敏性疾病和中毒[1,2]。据统计,全球每年因生物气溶胶引起的呼吸道感染发生率达20%,经气     

微量网式雾化器注册技术审评要点分析

微量网式雾化器为一种新型网式雾化器，与传统连续给药的网式雾化器相比，能够实现单次定量、微量的给药，如单次0.1mL，给药方式更加精准。文章从医疗器械技术审评角度对微量网式雾化器的安全性和有效性进行分析，在综述资料、非临床资料、临床评价资料、说明书等方面提出审评建议，以期对该类产品注册申请及技术审评有所帮助。