MUC1/Y基因体外冲击树突状细胞诱导抗瘤免疫反应

目的制备含MUC1/Y cDNA质粒转染的树突状细胞(DC),体外诱导杀伤细胞,研究其治疗消化道肿瘤的效果.方法构建MUC1/Y cDNA真核表达载体pIRES2-EGFP-MUC1/Y、pcDNA3.1-MUC1/Y.以pcDNA3.1-MUC/Y电转染8例HLA-A2(+)消化道肿瘤患者单个核细胞衍生的DC后,与自体T细胞混合培养,诱导CTL(T-pcDAN3.1-MUC1/Y).以SW620细胞[HLA-A2(+)、MUC1/Y(+)]为特异性靶细胞,Raji细胞[HLA-A2(-)、MUC1/Y(-)]和Lovo细胞[HLA-A2(-)、MUC1/Y(+)]为非特异性靶细胞,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放实验测定杀伤活性,ELISA法检测基因修饰后DC刺激自体T细胞产生IFN-γ的能力,并以ANNEXIN V-FITC试剂盒检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡情况.结果pIRES2-EGFP-MUC1/Y转染效率为8%左右.T-pcDAN3.1-MUC1/Y诱导的杀伤作用显著高于T-pcDNA3.1[pcDNA3.1(+)修饰DC诱导的CTL]和T-IL-2(IL-2刺激外周血单个核细胞产生的CTL),P＜0.05.而且T-pcDNA3.1-MUC1/Y对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于对照组.基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平IFN-γ,与未转染的DC相比具有显著差异(P＜0.05).结论成功构建MUC1/Y全长cDNA真核表达载体.pIRES2-EGFP-MUC1/Y可用于真核细胞转染,通过观察转染效率,易于筛选阳性克隆;经pcDNA3.1-MUC1/Y修饰的DC可有效诱导特异性抗肿瘤免疫应答.     

巢式序列特异性引物PCR方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合的临床应用研究

目的探索临床应用巢式序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR-SSP）方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的可行性。方法选取25对拟行HLA单倍体相合造血干细胞移植治疗的实体肿瘤患者及其供者,供受者为母子关系15例,父子关系10例。采集供受者外周血提取基因组DNA,采用巢式PCR-SSP方法检测患者外周血中供者来源的HLA-DRB1位点,并计算母胎微嵌合阳性率。随机选取经巢式PCR-SSP证实嵌合阳性和阴性且供受者性别不同的患者各4例,采用荧光原位杂交（FISH）技术进行重复检测,并与巢式PCR-SSP方法的检测阳性率进行比较,同时采用噻唑蓝法检测这8例患者分别与其亲缘供者和HLA完全不相合无关第3人之间的混合淋巴细胞增殖反应（MLR）,并计算增殖指数（SI）。结果巢式PCR-SSP方法灵敏度可高达0.001%,并具有较好的特异性。巢式PCR-SSP检测显示,在母子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为40%（6/15）,而在父子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为0。巢式PCR-SSP方法的检测灵敏度与FISH技术相比明显增高,其检测阳性率分别为50%（4/8）和12.5%（1/8）。MLR检测显示,嵌合阳性患者对其亲缘供者和无关第3人外周血单个核细胞（PBMC）的SI分别为（0.949±0.023）、（1.320±0.095）,嵌合阴性患者对其亲缘供者和无关第3人PBMC的SI分别为（1.133±0.036）、（1.245±0.069）;嵌合阳性患者对其亲缘供者PBMC的增殖反应强度与嵌合阴性患者相比明显降低（P=0.001）,并且也显著低于其对无关第3人PBMC的增殖反应强度（P=0.003）。结论巢式PCR-SSP方法灵敏度高、特异性好,适用于临床HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的快速检测。     

人胸腺基质淋巴生成素的研究进展

人胸腺基质淋巴生成素(hTSLP)是一种结构类似IL-7的新型细胞因子.正常情况下其mRNA主要表达于基质细胞、上皮细胞和肥大细胞,病理状态下,TSLPmRNA在一些前炎症细胞因子的作用下表达增加.hTSLP直接作用的效应细胞主要是树突状细胞(DC),通过调节DC的成熟来发挥作用.一方面.hTSLP-DC在外周能够诱导初始T细胞向一类特殊的Th2细胞分化,从而启动炎症反应;另一方面,hTSLP-DC能够促进胸腺中CD4+CD25-T细胞分化成CD4+CD25+调节性T细胞,从而在免疫耐受的发生和调控中发挥作用.     

胰腺癌伴多发皮下转移一例

1 病例报告患者女,77岁.主因双下肢疼痛、无力,全身多发皮下结节1个月,于2010年11月29日入院.患者入院前1个月出现双下肢前侧放射性疼痛,伴四肢无力,右侧较重.同时发现左小腿内侧皮下结节,约2 cm×1 cm,质硬、表面光滑、活动度可、无压痛.入院前半个月皮下结节进行性增多,分布于四肢、背腹部、颈部、额面部.入院前3d行PET-CT检查示:双肺、肝、胰腺、双侧肾上腺、腹膜、多发肌肉软组织及骨代谢异常增高,考虑为恶性病变,见图1、2.其余部位末见明显代谢异常.     

MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达

目的：探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法：应用聚合酶链反应（PCR）检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果：86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34.9%（30/86）、60.5%（52/86）和69.8%（60/86）;所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA。结论：MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移。     

重组牛胰蛋白酶抑制剂对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用

目的观察重组牛胰蛋白酶抑制剂(rBPTI)对大鼠慢性肝损伤的保护作用。方法大鼠98只,随机分成7组,分别为正常对照组、模型组、rBPTI3个剂量组(20,40和80MU.kg-1)、抑肽酶组(80MU.kg-1)和促肝细胞生长素组(100mg.kg-1)。除正常对照组外,其余各组皮下注射四氯化碳制备慢性肝损伤模型。8周后每天ip给药,给药4周后测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性、白蛋白(Alb)含量、白蛋白/球蛋白(A/G)比值、唾液酸(SA)含量及肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,并进行组织病理学检测。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血清GPT和GOT活性、SA含量及肝组织Hyp含量明显升高,血清Alb含量和A/G比值明显降低。与模型组比较,rBPTI各剂量组大鼠血清GPT和GOT活性、SA含量及肝组织Hyp含量降低,血清Alb含量和A/G比值明显增高。肝组织病理观察显示,rBPTI明显减轻由四氯化碳所致肝细胞脂肪变性及纤维组织增生等病理改变。结论rBPTI对四氯化碳诱导的大鼠慢性肝损伤具有保护作用和抗纤维化作用,在所观察的剂量范围内作用效果与抑肽酶相当。     

稳定表达突变减毒志贺样毒素Ⅰ的CHO细胞株的建立与鉴定

目的:建立稳定表达突变减毒志贺样毒素Ⅰ(Stx1)的CHO细胞株。方法:用脂质体介导将突变减毒Stx1真核表达载体pcDNA3.1-Stx1D10、pcDNA3.1-Stx1D100转染中国仓鼠卵巢细胞系CHO,G418筛选抗性克隆,PCR、RT-PCR、Western blot等方法检测阳性细胞株,有限稀释法获得稳定表达突变减毒Stx1的CHO细胞株。检测阳性细胞株的培养上清对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用,并使用Stx 1 B亚基抗体对该作用进行阻断。结果:经2次克隆化获得稳定表达突变减毒Stx1的基因工程细胞株,Western blot检测和SKOV3细胞生长抑制实验证实该细胞株可以分泌突变减毒Stx1,该毒素对SKOV3细胞具有生长抑制作用且该作用可以被Stx1 B亚基抗体阻断。结论:成功地建立了分泌性表达突变减毒Stx1的CHO细胞株,命名为CHO/Stx1D10和CHO/Stx1D100。证实Stx1的天然信号肽可以被真核细胞识别从而使其被真核细胞分泌性表达。     

化疗对乳腺癌患者外周血中Treg细胞数目的影响及意义

目的研究化疗药物对乳腺癌患者根治术后外周血中Treg(CD4 CD25 调节性T细胞)的影响及意义.方法采集52例乳腺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD3 、CD4 、CD8 T细胞占T淋巴细胞百分比,采用ELLSA法检测外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ的表达水平.结果化疗后乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞百分比(4.75±1.60)%较化疗前(5.59±1.81)%减少(P＜0.05),且与淋巴结有无转移、转移数量以及绝经状态无关(P＞0.05).化疗前后CD3 细胞占T淋巴细胞比例分别为(64.690±7.469)%,(64.357±9.356)%(P＞0.05).化疗前后CD4 T细胞占T淋巴细胞比例分别为(38.048±10.671)%,(36.536±9.664)%(P＞0.05).化疗后CD8 T细胞占T淋巴细胞比例(28.129±10.900)%较化疗前(24.876±6.631)%升高(P＜0.05).化疗后CD4 /CD8 (1.506±0.691)较化疗前(1.680±0.704)降低(P＜0.05).化疗后乳腺癌患者外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1浓度较化疗前降低,而IFN-γ浓度增高(P均＜0.05).化疗前后Treg细胞比例变化与细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ浓度变化无关(P＞0.05).结论化疗可使乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞比例降低,从而达到治疗肿瘤的效果.     

吉非替尼在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

肺癌是全球癌症导致死亡中最常见的病因,占整个肿瘤引起死亡的1/3。80%肺癌为非小细胞肺癌（NSCLC）,而70%NSCLC确诊时已属晚期,难以通过手术或放疗进行根治性治疗。另外,超过50%的早期患者尽管经过手术、放疗以及辅助化疗等积极治疗后仍最终出现局部复发或远处转移。