淫羊藿苷促进大鼠骨髓基质细胞成骨性分化过程中对 p-AKT及eNOS、iNOS表达量的影响

目的研究淫羊藿苷(Icariin. ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞（Bone marrow stromal cells . BMSCs)的成骨性分化 机理。方法贴壁分离法培养大鼠骨髓基质细胞并用流式检测细胞纯度。骨髓基质细胞传代至第2代时分别用含有成骨性 诱导剂的 1x10_5 mol/L ICA 和 LY294002 处理 24 h 后用 Real~time RT-PCR 检测 ALP、eNOS 和 iNOS 的 mRNA 表达水平, Western blotting检测ALP、p4KT、eNOS和iNOS的蛋白表达量。结果原代骨髓基质细胞体外培养传代至第2代时纯度可达 95%以上。基因和蛋白质检测均显示ICA可极显著的促进碱性磷酸酶（ALP)的表达（P <0.01), PI3K的特异性抑制剂 LY294002会抑制ICA对ALP的提高,ICA + LY294002组与CON组的表达差别不明显。p^KT的蛋白表达变化与ALP相似。 ICA可以提高eNOS表达(P <0. 01),加抑制剂能使其降低（P <0. 01),而iNOS的ICA组与ICA + LY294002组无明显差别。 结论ICA促进BMSCs成骨性分化过程涉及到PI3K/AKT通路,且AKT位于eNOS的上游;eNOS和iNOS共同作用,但iNOS 起主要作用。     

深海细菌Psychrobacter submarinus 1A01998的次级代谢产物研究

目的 对来自深海沉积物中的海洋细菌Psychrobacter submarinus1 A01998的次级代谢产物进行研究.方法 采用大孑L吸附树脂、硅胶、ODS和Sephadex LH-20凝胶等柱层析色谱分离方法,对海洋细菌Psychrobacter submarinus1 A01998进行次级代谢产物的分离纯化,根据1H NMR、13C NMR和MS等波谱数据分析并结合相关文献对化学结构进行鉴定.结果 从深海细菌Psychrobacter submarinus 1A01998的发酵粗提物中分离得到4个化合物,分别鉴定为环(L-脯氨酸-L-酪氨酸)(1)、环(D-脯氨酸-L-酪氨酸)(2)、3-吲哚甲醛(3)、2'-O-甲氧基尿嘧啶核苷(4).结论 化合物1～4均为首次从该属中分离得到,其中化合物1、2为环二肽类化合物.     

蛇床子素与金雀异黄酮对大鼠峰值骨量影响的比较研究

研究蛇床子素（Osthole,OST）与金雀异黄酮（Genistein,GEN）对大鼠峰值骨密度与骨质量的影响。方法：采用随机分组法将36只1月龄SD雌性大鼠（125±3）g分为3组：对照组（CON,等体积蒸馏水,n=12）,蛇床子素组（OST,9mg·kg^-1d^-1i．g．,n=12）,金雀异黄酮组（GEN,10mg·kg^-1d^-1i．g．;n=12）。每周监测体重,每月用双能x射线骨密度仪（DEXA）检测全身骨密度。3个月后处死所有动物,采用酶联免疫法测定血清骨钙素（Osteocalcin,0C）和抗酒石酸性磷酸酶5b（Tartaficacid phosphatase 5b,TRACP 5b）含量,用DEXA测定股骨骨密度,用μCT分析股骨组织微结构,树脂包埋不脱钙骨组织切片技术做胫骨骨形态分析,用万能材料试验机测定股骨生物力学,称量心、肝、胃、肾、肾上腺和子宫湿重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果：大鼠的体重、器官指数差异无统计学意义（P〉0．05）;病理学观察未见异常发生;第1、2个月全身骨密度无明显差异（P〉0．05）,第3个月后OST组全身骨密度显著高于CON组、GEN组,上述3组中股骨骨密度与全身骨密度的变化呈相同趋势（P〈0．05）。与对照组相比,OST组、GEN组血清OC水平升高,而与CON组、GEN组相比,0ST组的TRACP5b含量下降（P〈0．05）;OST组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组,但骨小梁分离度和模型系数均显著低于CON组（P〈0．05）,OST组与GEN组的上述指标虽未出现统计学差异（P〉0．05）,但平均值OST组高于GEN组;OST组骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组、GEN组,但骨小梁分离度低于CON组、GEN组;OST组股骨最大载荷、弹性模量和屈服强度均明显高于CON组（P〈0．05）,OST组与GEN组虽未出现统计学差异（P〉0．05）,但平均值OST组高于GEN组。结论：口服蛇床子素能有效提高大鼠峰值骨量,从而?     

不同强度正弦交变电磁场对大鼠骨密度及骨形态计量学的影响

目的 ：研究50 Hz不同强度正弦交变电磁场（sinusoidal electromagnetic fields,SEMFs）对SD大鼠骨密度和骨形态计量学的影响。方法：将30只雌性SD大鼠随机分为3组：A组（正常对照组）,B组（0.1 m T磁场组）和C组（0.6 m T磁场组）。除对照组外,分别给予各磁场组每日3 h的磁场干预。实验8周后处死大鼠,用双能X线骨密度仪检测各组大鼠全身、股骨及椎体骨密度,并对左侧胫骨及椎体L4分别进行骨组织静态和动态分析评价。结果：与A组相比,B组大鼠全身、股骨和椎体骨密度显著增加;股骨和椎体骨小梁面积百分数、骨小梁数量和骨小梁宽度显著增加,骨小梁分离度明显降低;观察双标记有明显变化。C组骨小梁数目与A组相比差异有统计学意义,其余指标差异均无统计学意义。结论：50 Hz 0.1 m T磁场强度的正弦交变电磁场,能够有效增加大鼠骨密度,改善大鼠的骨组织微结构,促进骨形成。     

淫羊藿苷对骨髓间充质成骨性活性强于金雀异黄酮

目的:比较研究金雀异黄酮与淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞(rats bone marrow stromal cell,rBMSC)成骨性分化的影响.方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质细胞,筛选最佳的药物浓度;采用终浓度为1×10-5mol·L-1的金雀异黄酮和淫羊藿苷对体外培养原代大鼠骨髓间充质细胞进行干预;在药物干预后的第3,6,9,12,15天后测定碱性磷酸酶活性(alkaline pbosphatase,ALP)和3,6,9,12,15 d测定钙含量;第12天进行钙化结节茜素红染色;在药物干预后第12,24,48,72,96 h Real-time RT-PCR检测OXS,Runx-2,骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平.结果:浓度为1 ×10-5 mol·L-1金雀异黄酮和淫羊藿苷可提高ALP活性最高,增加Ca含量,调节骨代谢活性Runx-2,OXS,BMP-2和Collagen-Ⅰ mRNA的表达水平,淫羊藿苷比金雀异黄酮的成骨性作用更强一些.结论:在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化作用方面淫羊藿苷较强于金雀异黄酮.     

脉冲电磁场对MC3T3-E1细胞增殖与分化的影响

目的研究不同强度50Hz脉冲电磁场(Pulse electromagnetic fields,PEMFs)对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖与分化的影响。方法 MC3T3-E1传代培养后分成七组,分别采用0.0 m T、0.6 m T、1.2 m T、1.8 m T、2.4 m T、3.0 m T和3.6 m T 50 Hz脉冲电磁场处理,90 min/d。MTT法检测细胞增殖情况,成骨性分化检测处理3 d、6 d、9 d、12 d后ALP活性和首次处理12 h后BMP-2、Runx-2、OPG基因表达情况。结果 6种强度的脉冲电磁场均促进细胞增殖,其中0.6 m T的促增殖效应最强(P<0.01)。在成骨性诱导培养条件下,细胞内ALP活性随电磁场处理时间的延长而逐渐增加,第9 d达到峰值,之后开始回落。0.6 m T、3.0 m T和3.6 m T均能提高ALP活性,其中0.6 m T始终处于最高水平(P<0.01)。三种基因的表达水平在首次处理12 h,在0.6 m T、1.2 m T、3 m T和3.6 m T组均显著提高,但仍然是0.6 m T的增强效应最为明显。结论 0.6 m T 50 Hz脉冲电磁场具有最佳的促进MC3T3-E1细胞增殖和成骨性分化活性,这可能为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了理想的治疗参数。     

基于cAMP-PKA信号通路的淫羊藿苷促进骨形成研究

目的研究淫羊藿苷是否通过c AMP-PKA信号通路来促进成骨细胞(osteoblast,OB)成熟矿化。方法以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别处理体外培养的大鼠颅骨OB细胞和人类乳腺癌细胞(MCF-7)不同时间后,免疫荧光染色法检测2种细胞内雌激素受体(ERα)的核转位情况。待P1代OB细胞铺满80%皿底后,采用1×10?5 mol·L?1的2’,3’-双脱氧腺苷(2’,3’-dideoxyadenosine,DDA)抑制胞内腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC),同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于正常组和信号阻断组不同时间后,ELISA检测细胞内c AMP的含量。以终浓度为1×10?6 mol·L?1蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂KT5720处理细胞,同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于信号阻断组和正常组,3 d和6 d后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性;药物处理48 h后,Real-time PCR检测I型胶原(collagen I,COL I)、Runx-2、ALP m RNA的表达量;Western blot检测COL I、Runx-2蛋白表达量。结果淫羊藿苷作用于细胞4 h后,MCF-7胞内ERα发生明显的核转位,而OB细胞在所有时间点都未检测到明显核转位现象,结合本课题组前期的淫羊藿苷雌激素比较试验说明,淫羊藿苷促进成骨细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性。淫羊藿苷促OB细胞后,胞内c AMP迅速升高,处理1 h后与对照组相比具有显著性差异。加入DDA阻断AC后,淫羊藿苷促胞内c AMP升高的作用消失。1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷能够显著地促进胞内ALP的活性,成骨性分化相关的因子COL I、Runx-2和ALP的基因表达也相应增高,同时COL I和Runx-2蛋白表达量也显著增加。当采用KT5720抑制PKA的活性之后,ALP活性下降,成骨性分化的指标也随之降低。结论淫羊藿苷促进OB细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性,而是通过迅速提高成骨细胞内c AMP的含量,激活胞内c AMP-PKA信号通路,进而促进成骨性相关因子的表达,来促进OB细胞成熟矿化。     

淫羊藿苷对体外在无地塞米松培养基中诱导培养大鼠骨髓基质细胞成骨性分化的影响

目的：探讨在无地塞米松（dexamethasone）时淫羊藿苷（icariin,ICA）对体外培养大鼠骨髓基质细胞成骨性分化的影响,并试图寻找一种新的或更强的促体外培养骨髓基质细胞成骨性分化的诱导剂。方法用1×10－5 mol·L －1淫羊藿苷或1×10－8 mol·L －1的地塞米松对大鼠骨髓基质细胞分别进行药物干预,细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测细胞增殖,碱性磷酸酶检测试剂盒检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,茜素红染色检测钙化结节数量,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子-κB 受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）、骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）的信使 RNA（mRNA）表达情况。结果1×10－5 mol·L －1淫羊藿苷在无地塞米松的培养基中能显著提高大鼠骨髓基质细胞 ALP 活性;明显增加大鼠骨髓基质细胞钙化结节数目;显著上调BMP、OPG mRNA 水平以及 OPG／RANKL mRNA 比值。结论淫羊藿苷可能是一种潜在的促体外培养大鼠骨髓基质细胞成骨性分化的新诱导剂。     

海洋细菌Halomonas elongate的次级代谢产物研究

目的 对具有抗肿瘤活性的海洋细菌Halomonas elongate进行次级代谢产物的分离、纯化及抗肿瘤活性研究.方法 通过大孔吸附树脂、硅胶、ODS、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等分离纯化手段,对H.elongate的次级代谢产物进行分离纯化;根据1H NMR谱、13C NMR谱及MS分析,并结合文献确定结构:采用MTT法对分离得到的次级代谢产物进行活性检测.结果 从海洋细菌H.elongate的发酵粗提物中分离鉴定3个化合物,分别为胸腺嘧啶-2 '-脱氧核苷(1)、环(L-甘氨酸-L-脯氨酸)二肽(2)、1-(2'-脱氧-β-D-赤式-呋喃戊糖)-1氢-1,2,4-三嗪酮(3),活性检测结果显示3个化合物对人肺癌细胞H1299生长活性均无显著抑制作用(IC50＞20 μμmol/L).结论 化合物1～3均为首次从Halomonas中分离得到.     

中老年人促甲状腺素水平与新发非酒精性脂肪性肝病的相关性研究

目的：分析兰州市社区中老年人群促甲状腺素（thyroid stimulating hormone,TSH）水平与3年随访时新发非酒精性脂肪性肝病（non?alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的相关性。方法：选取兰州市社区2011年基线调研时40~75岁甲状腺功能（甲功）正常（727例）及亚临床甲状腺功能减退症（亚临床甲减,222例）的无脂肪肝人群,于2014年进行随访,采集人体学指标,检测甲状腺激素水平、血糖、血脂、肝酶等,并检查上腹部超声。结果：亚临床甲减3年缓解率为27.93%（62/222）;基线甲功正常人群中亚临床甲减3年新发率为16.64%（121/727）。随着基线TSH水平的升高,总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL?C）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）水平逐渐升高（P均<0.05）。仅在女性中,不同基线TSH水平人群NAFLD 3年发病率差异有统计学意义（P < 0.05）。Logistic回归分析显示,女性中,在模型1未校正及模型2校正年龄、基线体重指数（body mass index,BMI）、基线TG、基线糖化血红蛋白（HbA1c）后,基线TSH与NAFLD 3年发病风险呈正相关（P均<0.05）;在模型3进一步校正BMI差值、HbA1c差值后,二者的相关性无统计学意义。结论：中老年女性中,基线TSH水平是NAFLD 3年发病的影响因素,但二者无独立相关性。