人参二醇、三醇皂苷对小鼠骨髓造血干/祖细胞体外增殖的影响

人参总皂苷按单体皂苷皂苷元所含羟基量不同分为人参二醇皂苷(Panaxadiol Saponin;PDS)和人参三醇皂苷(Panaxtrol Saponin;PTS)两大类.有关人参总皂甙对造血方面的研究也已有不少报道[1～3],而PDS和PTS对造血祖细胞作用研究还未见报道.本文采用体外造血祖细胞集落形成技术,通过观察PDS和PTS对小鼠骨髓造血干/祖细胞增殖的作用影响,目的在于探讨人参总皂苷中不同的皂苷成分对造血祖细胞的作用,筛选人参中促造血有效成分,为开发利用天然植物资源提供实验依据.     

急性髓系白血病(AML)中hsa_circ_0000254的实验研究

目的:通过克隆环状RNA hsa_circ_0000254,构建过表达载体并初步鉴定其表达水平,为进一步的功能研究奠定基础。方法:人工合成hsa_circ_0000254的524 bp序列,用pGH克隆载体合成基因,然后酶切目的片段,连接到慢病毒过表达载体pLCDH-ciR中,测序验证。筛选阳性克隆,分别以pLCDH-circ254(C254)、NC(pLCDH-ciR)转染293T细胞,培养40 h后收集细胞进行PCR检测及产物测序验证。结果:pLCDH-circ254表达载体经测序验证,测序峰图正常,且无杂峰或叠带,序列对比吻合,表明hsa_circ_0000254成功插入环状RNA表达载体pLCDHciR,过表达载体构建成功,表达效率高达1万倍。结论:成功构建hsa_circ_0000254表达载体,可高效表达hsa_circ_0000254。     

Effects of Panax notoginseng saponins on proliferation and differentiation in NIH3T3 cells

Objective:To investigate the effects of Panax notoginseng saponins(PNS)on the proliferation and differentiation in NIH3T3 cells.Methods:NIH3T3 cells were treated by various concentrations of PNS 0,0.05, 0.10,0.20,and 0.40 g/L.The vitality and proliferation potential of cells were detected by 3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)assay,the alkaline phosphatase(ALP)activity was measured by p-nitrophenyl phosphate(pNPP)assay,and the mineralization formation ability was tested for the cellular differentiation toward osteoblast,as well as the expression level of phosphorylated extracellular signal-regulated kinasel/2(P-ERK1/2),extracellular signal-regulated kinasel/2(ERK1/2)protein kinase was analyzed by Western blot with total cell lysate of NIH3T3 cells treated by PNS.Results:Both MTT andρNPP assay showed that optical density(OD)values were increased in response to PNS treatment at a dose-dependent pattern. The mineralization formation ability was enhanced in PNS-treated NIH3T3 cells compared with untreated cells. Meanwhile,the expression level of P-ERK1/2 protein kinase was up-regulated in PNS-treated NIH3T3 cells, while,the expression level of ERK1/2 protein kinase revealed no obvious difference with or without PNS treated cells.Conclusion:PNS could pay a role to promote the proliferation and differentiation in NIH3T3 cells by means of up-regulation of P-ERK1/2 protein kinase.     

奥曲肽预防ERCP术后高淀粉酶血症及胰腺炎的临床研究

为探讨奥曲肽对ERCP术后一过性高淀粉酶血症及急性胰腺炎的预防作用,我们观察了奥曲肽对276例ERCP术后患者血清淀粉酶并发胰腺炎的影响,现报告如下:拟施行ERCP患者共276例,男     

人参皂苷诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的研究

目的通过观察人参皂苷（GS）诱导人T淋巴细胞白血病细胞株（Jurkat细胞）凋亡,探讨GS影响T淋巴白血病细胞增生作用的机制。方法选用人T淋巴细胞株（Jurkat细胞）作靶细胞,采用MTT法和半固体集落培养法观察不同浓度的GS对Jurkat细胞增生的抑制效应;用Annexin V—FITC试验法分析Jurkat细胞的凋亡百分率,并进行DNA片段分析（DNA Ladder）。结果MTT法和半固体集落培养法均显示GS在50μg／mL浓度下能够明显抑制Jurkat细胞增生,并随浓度增加抑制作用增强;流式细胞术显示GS在一定浓度和时间范围内可引起细胞凋亡。结论GS在一定浓度范围内可抑制Jurkat细胞增生,并能够诱导其凋亡,为临床应用提供理论依据。     

奥曲肽预防ERCP术后高淀粉酶血症及胰腺炎的临床研究

内镜逆行胰胆管造影 (ＥＲＣＰ)是肝胆胰疾病诊治的重要手段之一 ,开展 2 0年来 ,国内外已广泛应用于临床 ,但ＥＲＣＰ术后引起的并发症 ,仍然是人们关注的一个重要课题 ,尤其ＥＲＣＰ术后一过性高淀粉酶血症 (ｈｙｐｅｒａｍｙｌａｓｅｍｉａ)及急性胰腺炎 ,往往给病人增加痛苦 ,延误诊治 ,增加住院日数及费用 ,甚至危及生命 ,因此 ,如何预防ＥＲＣＰ术后并发症是医学界一个重要的临床研究内容 ,倍受关注。奥曲肽 (善宁 )是人工合成的八肽环化合物 ,有天然生长抑素的药理特性 ,且具有长效的作用和明确的抑制胰腺分泌和消化酶分泌的药理作用…     

转染miR-223对HEL细胞增殖和分化的影响

通过在体外将miR-223 duplex转染至红白血病细胞株(HEL),观察其对HEL细胞增殖作用的影响,来探讨miR-223对白血病细胞诱导分化及作用机理。以白血病HEL细胞株为靶细胞,采用MTT法和半固体集落法观察不同浓度的miR-223对HEL细胞增殖的影响;流式细胞术观察红系细胞分化的表面标志(CD71+、GPA+)表达;RT-PCR检测miR-223对LMO2转录因子表达的影响以及用免疫印迹反应观察相应蛋白的表达情况。结果表明:低浓度的miR-223(10nM、20nM)抑制HEL细胞增殖,且随浓度增加(50nM、100nM)时,抑制作用更明显(P<0.05或P<0.01)。半固体集落培养结果显示与MTT结果相一致。流式细胞术检测用不同浓度的miR-223转染HEL细胞中发现红系细胞表面标志GPA+表达随其浓度升高而增加,而CD71+在细胞中表达无显著差异。在miR-223作用前后提取RNA进行RT-PCR检测显示,LMO2基因表达随浓度增加而降低。对LMO2蛋白免疫印迹分析发现,经miR-223处理过的细胞中LMO2蛋白含量随浓度增加逐渐下降。结论:转染一定浓度miR-223至红白血病HEL细胞中,能够抑制细胞增殖,其作用机制有可能通过竞争性抑制LMO2转录因子表达,恢复与分化相关的转录因子的表达,来诱导红白血病细胞向成熟方向分化。     

大黄素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨大黄素对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响;应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡;蛋白印迹法(Western-Blot)检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:在5～20mg/L浓度范围内,大黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用呈时间剂量依赖性20mg/L作用72h后,抑制率分别达到(19.8±2.7)%,(58.8±4.4)%和(73.8±5.7)%;流式细胞术检测发现:大黄素5、10和20mg/L作用24h后,细胞凋亡率分别为(15.5±3.4)%、(56.0±3.4)%和(71.1±5.0)%,与对照组(1.01±0.06)%有显著性差异(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带。大黄素作用24h后,Bcl-2蛋白的表达水平随药物波度增加呈逐渐下降趋势。结论:大黄素能够抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。Bcl-2基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

高白细胞性急性髓系白血病细胞基因表达谱的研究

[目的]综合分析高白细胞性急性髓系白血病不同预后患者祖细胞集落形成及对化疗药物的敏感性以及差异表达的基因。[方法]半固体集落形成法观察不同预后患者骨髓祖细胞集落形成及对化疗药物的敏感性。采用Affymetrix公司人类寡核苷酸表达谱芯片检测患者初诊时骨髓单个核细胞基因表达谱,筛选出差异表达数据。[结果](1)患者骨髓祖细胞集落形成和化疗药物的敏感性与预后密切相关,未缓解者的骨髓祖细胞集落明显高于完全缓解患者,且对化疗药物不敏感。(2)完全缓解患者白血病细胞表达上调2倍以上的基因109条,占0.5%。下调2倍以上的基因134条,占0.6%,其中与预后密切相关的为TRIM16、TM4SF1。CD34和DNMT3B。(3)差异表达的基因按功能分成离子通道运输、细胞周期、细胞骨架运动、细胞凋亡等14类。上调的主要为DNA合成修复、细胞凋亡、细胞周期和应激相关等4类;而下调的主要为蛋白翻译合成、信号传导传递、发育相关和细胞骨架运动等4类。[结论]特定的基因表达模式决定患者预后。     

奥曲肽预防ERCP术后高淀粉酶血症及胰腺炎的疗效

目的探讨奥曲肽对内镜逆行胰胆管造影（ＥＲＣＰ）术后高淀粉酶血症及胰腺炎的预防作用．方法行ＥＲＣＰ患者２７６例，随机分为两组：预防组１６７例，分别于术前３０ｍｉｎ及术后４ｈ内ｓｃ奥曲肽０１ｍｇ；对照组１０９例，ＥＲＣＰ术前后分别予生理盐水１ｍＬｓｃ．两组患者术前后均不用其他任何抑制胰腺分泌及预防胰腺炎药物．并分别于术前、术后２ｈ，２４ｈ作血清淀粉酶测定，同时观察胰腺炎的发生情况．结果预防组ＥＲＣＰ术后２ｈ，２４ｈ血淀粉酶（Ｕ／Ｌ）分别为２４６±２２４和２５２±２９１；明显低于对照组（４９９±５９７和４６６±５５９，Ｐ＜００１）；预防组发生胰腺炎７例（４２％），对照组发生９例（８３％，Ｐ＜００１）．结论小剂量奥曲肽能有效地预防ＥＲＣＰ术后的高淀粉酶血症及胰腺炎