清热解毒类中药单体的体外内抗肝癌作用研究

目的：探讨5种清热解毒中药单体对SMMC-7721肝癌细胞增殖和对H22荷瘤小鼠移植瘤的抑制作用。方法 SMMC-7721人肝癌细胞分别经不同浓度的迷迭香酸、黄芩苷、橙黄决明素、绿原酸和黄连素作用48 h后,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖抑制率并筛选出有效中药单体。采用H22肝癌细胞建立小鼠移植性肝癌模型,给予H22荷瘤小鼠不同浓度的迷迭香酸（300 mg／kg、150 mg／kg、75 mg／kg）和黄芩苷（200 mg／kg、100 mg／kg、50 mg／kg）10 d后,剥取瘤块、胸腺、脾脏称重,并计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数。结果迷迭香酸500 mg／L、250 mg／L、125 mg／L 浓度组和黄芩苷500 mg／L、250 mg／L浓度组吸光度A值均明显低于对照组（ P＜0．05）,且细胞增殖抑制率均达到30％以上;橙黄决明素及黄连素组的细胞增殖抑制率均低于30％,绿原酸组细胞增殖抑制率＜0。各剂量迷迭香酸组的瘤重均较模型组明显下降（P＜0．05）,对H22移植瘤的抑制率分别为48．2％、43．0％和39．0％,迷迭香酸各剂量组的胸腺指数和脾脏指数与模型组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。300 mg／kg黄芩苷组肿瘤重均低于模型组（P＜0．05）,抑瘤率达到55．7％,黄芩苷各剂量组的脾脏、胸腺指数与模型组比较无显著性差异（P＞0．05）。结论迷迭香酸和黄芩苷体外对SMMC-7721肝癌细胞和体内对H22移植瘤均有明显的抑制作用。     

对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡、PI3K/Akt和JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（JNK/p38 MAPK）信号通路的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度（100、150、200、250、300 mg·L^-1）对叶百部总生物碱组。利用噻唑蓝（MTT）比色法、平板克隆实验观察对叶百部总生物碱对A549细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）双染法观察细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）和Bcl-2表达及PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达。结果 与空白组比较,对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞增殖抑制率显著增高（P<0.01）;对叶百部总生物碱组（150、200、250、300 mg·L^-1）细胞克隆抑制率显著升高,细胞克隆形成率显著降低（P<0.01）。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞出现染色质凝聚,荧光反应加强等典型的细胞凋亡特征。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2蛋白表达（P<0.01）;对叶百部总生物碱对PI3K、Akt、JNK、p38 MAPK总蛋白表达无明显影响,对叶百部总生物碱（150、200、250、300 mg·L^-1）能够明显下调PI3K、Akt磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;明显上调p38 MAPK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;对叶百部总生物碱（200、250、300 mg·L^-1）能够明显上调JNK磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱可抑制人肺癌A549细胞的增殖,并能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。     

肝清宁合剂对四氯化碳致肝硬化大鼠的影响

目的研究肝清宁合剂对四氯化碳致大鼠肝硬化的影响。方法造模大鼠灌胃给予肝清宁合剂(5.4、10.8、21.5 g/kg)或复方鳖甲软肝片(0.8 g/kg)连续4周后,HE、Masson染色检查肝组织病理变化,全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、总胆红素(TBIL)水平,ELISA法测定血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)水平,酶标法和紫外分光光度法测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)水平。结果与模型组比较,肝清宁合剂组ALT、AST、TBIL、HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平显著降低(P0.05,P0.01),ALB、TP水平显著升高(P0.05,P0.01),HYP、MDA水平显著降低(P0.01),SOD水平显著升高(P0.05)。同时,肝组织病理损伤减轻,肝纤维化间隔变薄或减少。结论肝清宁合剂对四氯化碳致肝硬化大鼠具有良好的治疗作用,可能与改善肝脏功能和纤维化指标、促进肝组织自愈、增强机体抗氧化能力有关。     

胃乐胶囊对大鼠乙酸型慢性胃溃疡的影响

目的研究胃乐胶囊对乙酸建立大鼠慢性胃溃疡的影响。方法采用胃浆膜下层注射20%乙酸(0.1 mL/只)造模,胃乐胶囊低、中、高剂量分别为189、378、756 mg/kg。给药10 d后,检测胃溃疡面积、溃疡分数、血清和胃组织PGE_2、EGF、SOD、MDA含有量,光镜检查胃溃疡组织病理改变。结果与模型组比较,胃乐胶囊各剂量组大鼠体质量显著增加(P0.05),胃溃疡面积和胃溃疡分数显著降低(P0.01),胃溃疡抑制率分别为84.79%、84.61%、80.98%,血清和胃组织PGE_2含有量、胃组织EGF含有量显著升高(P0.05,P0.01),血清SOD含有量显著升高(P0.05,P0.01),胃黏膜充血和水肿明显减轻。结论胃乐胶囊能显著减轻胃组织病理损伤,其机制可能与增强机体抗氧化能力、增加机体PGE_2含有量、上调EGF表达有关。     

木瓜苦桑片对Ⅱ型糖尿病大鼠的影响

目的:研究木瓜苦桑片对高脂高糖联合低剂量链脲佐菌素诱导的Ⅱ型糖尿病大鼠血糖、血脂、肝肾功能和胰腺组织的影响。方法:雄性SD大鼠给予高脂饲料喂养4周后,链脲佐菌素(45 mg·kg~(-1))给药1次,建立糖尿病大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,二甲双胍组(285 mg·kg~(-1)),木瓜苦桑片高、中、低剂量组(2 600,1 300,650 mg·kg~(-1)),另设正常组,每组10只,每天灌胃给药1次,连续4周,记录每只大鼠24 h的尿量、饮水量、摄食量,分别测定血糖值(FBG),胰岛素(INS),过氧化氢酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),丙氨酸氨基转移酶(AST),天冬氨酸氨基转移酶(ALT),肌酸激酶(CK),肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,取胰腺苏木素-伊红(HE)染色观察组织结构。结果:与正常组比较,模型组的大鼠摄食量,饮水量,尿量,FBG,INS,MDA,NO,LDL-C,TC,TG,AST,ALT,BUN,Cr,CK水平均明显升高,CAT,SOD,HDL-C水平降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,各给药组大鼠摄食量,饮水量,尿量,FBG,INS,MDA,NO,LDL-C,TC,TG,AST,ALT,BUN,Cr,CK水平均明显降低,CAT,SOD,HDLC水平升高(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组大鼠胰岛细胞数目减少,排列紊乱,颜色深,细胞间质和细胞间界限不清晰;与模型组比较,各给药组大鼠胰岛细胞数目增多,排列整齐,细胞形态恢复规则。结论:木瓜苦桑片有明显降血糖及血脂作用,可增强机体抗氧化损伤的能力,对肝肾功能具有明显改善作用,可维持胰岛正常结构和功能。     

金草消毒颗粒对D-GalN/LPS致小鼠急性肝损伤保护的影响

目的:研究金草消毒颗粒(JCG,由肿节风、金钱草、白花蛇舌草、大青叶组成)对D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)所致小鼠肝损伤的保护作用及机制。方法:JCG(1.7,3.4,6.8 g·kg-1)连续给药10 d后,采用腹腔注射给予D-GalN(700 mg·kg-1)和LPS(10μg·kg-1)建立小鼠肝损伤模型。记录8 h小鼠存活率,生化检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),尿素氮(BUN),肌酐(CREA),免疫球蛋白G(Ig G),免疫球蛋白M(Ig M)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织一氧化氮合酶(i NOS),环氧合酶-2(COX-2),磷酸化型核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)的表达,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化。结果:与模型组比较,金草消毒颗粒可提高小鼠存活率,降低血清ALT,AST,TBIL,BUN,CREA,IL-1β,IL-6,TNF-α水平(P0.05,P0.01),显著升高Ig G,Ig M水平(P0.05,P0.01),下调肝组织i NOS,COX-2,p-NF-κB p65表达(P0.05,P0.01),肝组织病理性损伤明显减轻。结论:金草消毒颗粒有很好的护肝作用,其机制可能是通过改善肝肾功能,减少促炎症因子水平,增强机体免疫功能,抑制肝组织i NOS,COX-2,p-NF-κB p65细胞因子的表达水平,达到保护肝细胞作用。     

对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2，Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L^-1,另设置仅添加10%胎牛血清作为空白组。采用噻唑蓝（MTT）比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3种凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3的表达。结果 对叶百部总生物碱可抑制SMMC-7721细胞增殖,与空白组比较,细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）,作用24,48,72 h的50%细胞抑制浓度（IC₅₀）分别为（173.36±8.75）,（112.14±16.50）,（96.41±2.60） mg·L^-1,细胞集落形成抑制率显著升高（P<0.01）,存在浓度依赖性。与空白组比较,对叶百部总生物碱可促进细胞凋亡,SMMC-7721细胞凋亡数目和凋亡率显著增加（P<0.01）,在荧光正置显微镜下可观察到典型细胞凋亡形态,如亮蓝色细胞核染色,细胞质浓缩和细胞核固缩等。与空白组比较,抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调（P<0.01）;与空白组比较,对叶百部总生物碱75,112,167,250 mg·L^-1促凋亡蛋白Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱有很好的抑制SMMC-7721细胞增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达和促进Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

针刺对海洛因精神依赖小鼠稽延性戒断症状作用机制的研究

目的:研究针刺对海洛因精神依赖小鼠核苷酸代谢及大脑和脾脏病理形态的影响,为针刺改善稽延性戒断症状提供理论依据.方法:将经行为学筛选后的昆明种小鼠随机分为空白组、空白针刺组、模型组、针刺组和药物对照组.按剂量逐日递增原则复制海洛因精神依赖小鼠模型,针刺"内关"、"三阴交"及"四神聪"进行治疗,观察黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氧酶(ADA)活性、及大脑和脾脏的病理形态变化.结果:针刺能降低海洛因精神依赖小鼠脾脏ADA及大脑XOD、ADA活性;针刺可减轻大脑、脾脏的病理损害.结论:针刺改善海洛因精神依赖小鼠的稽延性戒断症状与改善其核苷酸代谢、减轻大脑的病理损害有密切关系.     

捧兴保健酒抗疲劳作用功能研究

目的:探讨捧兴保健酒对KM小鼠的抗疲劳作用。方法:将雄性KM小鼠随机分为空白对照组、基质对照组及5、10、20mL·kg~(-1)·BW捧兴保健酒剂量组,灌胃给药30d后,分别对负重游泳时间、血尿素氮、肝糖原、血乳糖进行测定。结果:10、20mL·kg~(-1)·BW剂量捧兴保健酒能显著延长KM小鼠负重游泳时间(P0.01),提高肝糖原含量(P0.01),同时明显抑制运动过程中血尿素氮及乳酸堆积(P0.01)。结论:捧兴保健酒对KM小鼠具有抗疲劳作用。