人源腺病毒伴随病毒Ⅱ型单克隆抗体Fab段及其全抗体的研制

目的 运用噬菌体表面表达技术，获得基因工程抗腺病毒伴随病毒抗体Fab、IgG。方法 从酶联免疫吸附试验阳性的人外周血中分离淋巴细胞。提取总RNA，逆转录cDNA，聚合酶链反应扩增人IgG Fab轻、重链基因，利用pComb3载体构建噬菌体抗体库。用纯化的腺病毒伴随病毒为固相抗原筛选抗体Fab段，并在E.coli中进行分泌性表达。通过ELISA和间接免疫荧光试验、筛选和鉴定Fab抗体，并进行序列测定。然后将其重链和轻链基因克隆到全抗体表达载体pAC-L-Fc上。转染昆虫sf-9细胞，利用杆状病毒，昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达，免疫沉淀试验鉴定它的抗蛋白。结果 分离到一株Fab克隆AAVs-31，腺病毒伴随病毒抗原和抗Fab抗体直接ELISA检测阳性，间接免疫荧光试验呈阳性，序列分析结果表明是一新的序列，所获得的基因为人源IgG Fab基因。由Gamma链和Kappa链组成。表达的全抗体ELISA反应、免疫荧光反应和间接免疫荧光试验均为阳性，免疫沉淀试验结果显示它结合病毒颗粒，不结合任一VP1、VP2、VP3单独衣鞘蛋白。结论 用噬菌体表面表达技术首次获得了抗腺病毒伴随病毒Ⅱ型单克隆抗体Fab段，并在真核系统中表达了其全抗体，它们识别的可能是衣鞘蛋白组装时形成的表位。     

AD5/F35腺病毒载体对不同来源造血系统恶性细胞转染效率的研究

本研究比较AD5/F35腺病毒载体对不同来源的血液系统恶性细胞系感染效率的差异和细胞毒性反应.用AD5/F35-EGFP以不同MOI（感染复数）感染不同来源的血液恶性细胞系并用AD5-EGFP作为对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,进行荧光显微镜照相并用MTT法检测病毒对感染靶细胞的杀伤作用.结果表明：对于髓系来源的细胞在MOI为30时,AD5/F35载体的感染效率大于99%,AD5载体在MOI为1000时感染效率为26.4%;对于B系来源的细胞在MOI为1 000时,AD5/F35载体感染效率为11.7%,AD5载体为5.7%;AD5/F35和AD5载体都不能有效地感染T系来源细胞,在MOI达到1000也未检测到荧光阳性细胞.在MOI为1 000的情况下AD5/F35载体对感染靶细胞也无明显杀伤作用.结论：AD5/F35载体对不同来源的血液恶性细胞的感染具有一定的选择性,对髓系来源细胞感染能力强,对B系来源细胞有一定感染能力,而且对感染靶细胞毒性小.AD5/F35载体优于常用的5型腺病毒载体,在以髓系细胞为靶细胞的基因治疗中有着较好的应用前景.     

腺相关病毒载体对心肌细胞感染和外源基因表达的作用

目的：为进一步研究肌质网钙ATP酶转基因在心力衰竭中的质粒价值，并观察腺相关病毒对心肌细胞感染的动态过程和对外源基因的表达能力。方法：构建含肌质网钙ATP酶的腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated virus-sarcoplasmic reticulum calcium ATPase 2a．rAAV-SERCA2a)，利用激光共聚焦显微镜观察了活体异硫氰酸荧光素标记的腺相关病毒(fluorescein isothiocyanate-rAAv，FITC-rAAV)进人心肌细胞的过程，利用流式细胞仪检测含绿色荧光蛋白的腺相关病毒rAAV-GFP感染心肌细胞后绿色荧光蛋白表达细胞的百分率。结果：构建、生产的重组病毒rAAV-SERCA2a的滴度为7&;#215;10^14v&;#183;g／L，并可以有效介导肌质网钙ATP酶基因转录；FITC-rAAV感染心肌细胞后，大约15min可见病毒吸附在细胞膜上，30min时可大部分进入细胞内；未加丁酸钠组腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白表达效率最高达33．3％，加用丁酸钠组该数据为48．7％。结论：成功构建了含肌质网钙ATP酶的腺相关病毒载体，该病毒可有效介导目的基因的表达。在体外腺相关病毒能有效感染心肌细胞，感染后的心肌细胞能有效表达外源基因。     

重症监护病房搬进层流病区前后的目标性监测及病原菌构成比变化

目的了解ICU导管相关性感染的现状、分析发展趋势,为干预措施的制定提供参考,同时观察ICU从一般病区搬至层流病区前后病原菌构成的变化,为控制医院感染提供依据。方法 2010年开展多重耐药菌前瞻性病例调查,同时开展重症监护病区的目标性监测,根据卫生部ICU目标性监测要求对于每例研究期间人住ICU>48h及出ICU<48h患者进行监测,计算导管使用率及各类导管相关性感染发病率。结果 2010年4～9月ICU共收住患者76人次,发生院内感染22人42人次,感染历次率为55.26%,感染率为28.96%,患者日感染率59.57‰;ICU总住院天数为705d,呼吸机的平均使用率为51.49%,呼吸机相关性肺炎(VAP)的发病率为49.59‰;中心静脉导管的平均使用率为51.21%、中心静脉导管相关性血流感染(CRBSI)的发病率为8.31‰;导尿管的平均使用率为98.01%、导尿管相关性尿路感染(CAUTI)的发病率为8.68‰。病原菌检出观察设ICU.老病区为对照组,ICU新病区为干预组。阴性杆菌占的比例对照组是74.42%,干预组为67.5%,搬后第二季度为47.62%;阳性球菌对照组占16.28%,干预组15.0%,第二季度28.57%;真菌对照组占23.26%,干预组17.5%,搬后第二季度22.22%。结论 ICU易发生以下呼吸道为主的条件致病菌感染,搬进层流病区后阴性杆菌检出比例减少,3个季度降低近27个点;ICU的院内感染以下呼吸道感染为主,搬迁后由78.95%,降到64.29%,搬后第二季度降至48.57%,三个季度比例降了30个点,说明干预措施有效。     

3种天然抗突变物对食品致突变性的拮抗作用

食品中存在的抗突变物、抗癌物大体上可以分为两类 ,一类是食物中的某些营养素 ,如氨基酸、维生素和微量元素 ;另一类是食品中的非营养素 ,即在食物中天然存在的 ,含量较少的一类抗突变、抗癌或其他生理活性物质[1 ] 。我们选用了大蒜、叶绿素铜钠及野生植物马尾松松针 ,对 5类有明确致突变性的食品进行了直接拮抗试验 ,现将结果报告如下。材料和方法1　材料　 (1)食品 :市场购入的烤鸡、咸鱼、臭豆腐、霉干菜和霉千层 ,每种样品两件 ,每件 5 0 0g,冷藏 ,备用。(2 )测试用蚕豆 :由华中师大提供的纯种松滋青皮豆。 (3)天然抗突变物 :大蒜 ,市…     

松针提取物毒性研究

松针属于松科植物尾松的针状叶。松针主要含挥发油、黄酮类、树脂,并含有丰富营养成分,具有良好的保健和药用价值。我们对松针提取物的急性毒性和遗传毒性进行了初步研究,结果作如下简要报导。 小鼠急性毒性试验,经口LD_(50)大于10/kg,属于实际无毒类物质。     

腺相关病毒载体对心肌细胞感染和外源基因表达的作用

目的:为进一步研究肌质网钙ATP酶转基因在心力衰竭中的质粒价值,并观察腺相关病毒对心肌细胞感染的动态过程和对外源基因的表达能力。方法:构建含肌质网钙ATP酶的腺相关病毒载体(recombinantade-no-associatedvirus-sarcoplasmicreticulumcalciumATPase2a,rAAV-SERCA2a),利用激光共聚焦显微镜观察了活体异硫氰酸荧光素标记的腺相关病毒(fluoresceinisothiocyanate-rAAV,FITC-rAAV)进入心肌细胞的过程,利用流式细胞仪检测含绿色荧光蛋白的腺相关病毒rAAV-GFP感染心肌细胞后绿色荧光蛋白表达细胞的百分率。结果:构建、生产的重组病毒rAAV-SERCA2a的滴度为7×1014v·g/L,并可以有效介导肌质网钙ATP酶基因转录;FITC-rAAV感染心肌细胞后,大约15min可见病毒吸附在细胞膜上,30min时可大部分进入细胞内;未加丁酸钠组腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白表达效率最高达33.3%,加用丁酸钠组该数据为48.7%。结论:成功构建了含肌质网钙ATP酶的腺相关病毒载体,该病毒可有效介导目的基因的表达。在体外腺相关病毒能有效感染心肌细胞,感染后的心肌细胞能有效表达外源基因。     

应用印度Periyar河淡水藻类进行毒性试验

本研究旨在确定化肥厂排出物对印度Periyar河中两种水藻的可能影响。本实验选用两种人工培养的淡水藻类:谷皮菱形藻(Nitzschia Palea)和卵泡藻(Oocystis Pusilla),从Periyar河上游分离获得。根据标准程序进行培养(Stein,1973),按Ward和Parrish(1982)所述的淡水培养剂对实验藻进行保存和测试。被测排出物过滤后立即分析下列参数:pH、氨、磷酸盐、生化需氧量(COD)和氟化物。排出物的测试浓度:N Palea和O Pusilla分别选择5、     

苦瓜中的抗突变剂

作者首次从菲律宾常用蔬菜——苦瓜(momorbica Charantia)中分离到具有抗突变的成分。抗突变组分的提取和分离:苦瓜用蒸馏酒精匀化,按Kupchan等方法用不同极性的溶剂(乙醇、石油醚和CCl_4)进行分离,此活性提取物再用闪光柱层析法反复和连续分馏,然后加压洗脱,直至薄层层析获得纯组分。层析柱先用己烷随后用己烷-乙酸乙酯,再用纯乙酸乙酯洗脱,最后用高压液相色谱纯化。     

社会经济状况和卫生习惯对健康状况的独立作用

以往的文献中,很少阐明社会经济状况(SES)和健康状况之间的关系。SES是否由受教育、经济收入,职业或其合成指数来衡量的,健康状况是否由死亡率、发病率或健康状况的感觉来衡量,曾是人们探讨的问题。本文研究目的是,确定以往大量的重复发现的社会经济状况和健康状况之间。是否有关系?为此,作者采用1977年国家卫生统计中心卫生访问调查的有关资料,对Alameda县三分之一的15892名