草乌与瓜蒌、白及配伍对心肌细胞毒性与增毒机制研究

目的：探讨草乌、草乌与瓜蒌和草乌与白及配伍对大鼠心肌细胞毒性作用与增毒作用机制。方法：体外培养大鼠心肌细胞,给予2％,8％,16％浓度的含药大鼠血清作用于心肌细胞后,采用MTT法测定心肌细胞活力,比较对心肌细胞毒性大小,再利用试剂盒测定细胞外乳酸脱氢酶（LDH）含量、Na＋-K＋-ATP酶活力与含量以及细胞凋亡率,研究增毒机制。结果：与对照组相比,随着大鼠含药血清浓度的升高,心肌细胞存活率下降（ P＜0．05）。给药组LDH含量显著升高（ P＜0．05）;Na＋-K＋-ATP酶活力随着浓度升高而降低（P＜0．05）;Na＋-K＋-ATP酶含量明显降低（P＜0．05）,血清浓度在8％,16％时,细胞凋亡率明显升高（P＜0．05）。结论：草乌对心肌细胞有明显毒害作用,与瓜蒌、白及配伍后毒性增强;其增毒的机制是能显著增大心肌细胞膜通透性,破坏细胞能量系统,诱导细胞自身凋亡,加速细胞死亡。     

基于网络药理学预测补阳还五汤治疗动脉粥样硬化的药效物质与作用机制

目的:预测补阳还五汤治疗动脉粥样硬化的药效物质及作用机制.方法:基于网络药理学理论框架,结合以"OB≥30％,Lipinski五规则"条件下的潜在活性成分筛选、靶点预测、网络构建及KEGG通路富集分析等方法进行补阳还五汤治疗动脉粥样硬化的药效物质与作用机制预测.结果:补阳还五汤满足"OB≥30％,Lipinski五规则"条件的潜在活性成分共有198个活性成分,药物靶标中有30个靶标与动脉粥样硬化相关.此外,对这30个活性靶标进行KEGG通路分析,共获得16条代谢通路,其中有4条通路与动脉粥样硬化相关,分别为HIF-1信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路、花生四烯酸代谢通路.利用Cytoscape 3.7.1软件对补阳还五汤198个药材潜在活性成分与30个抗动脉粥样硬化靶标进行网络拓扑性分析,以度、介数中心度和紧密中心度3项数值均在平均值以上为筛选条件,最终获得66个关键活性成分(黄芩素、阿魏酸、2-甲基苯并唑、壬醛、正丁基苯酞、水杨酸等)及8个关键靶标(PARP1、ESR1、PTGS2、ALOX5、CNR2、NOS2、PPARG、LTA4H).结论:补阳还五汤可通过HIF-1信号通路、TNF信号通路、NF-κB信号通路、花生四烯酸代谢等多条途径发挥抗动脉粥样硬化作用,表现出多成分、多靶点、多通路的特点,与动脉粥样硬化治疗机制相一致.     

金樱子蜜炙工艺优选及其质量控制

目的:优选金樱子蜜炙工艺,建立蜜炙金樱子乙酸乙酯部位的指纹图谱,为该药材的炮制工艺标准化和质量控制提供参考。方法:以总多糖、总黄酮和浸出物含量的综合评分为指标,采用U7(76)均匀设计考察加蜜量、炒制温度、炒制时间和稀释用水量对金樱子蜜炙工艺的影响。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004B版软件进行指纹图谱分析,流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~20 min,5%~9%A;20~30 min,9%~15%A;30~35 min,15%~17%A;35~60 min,17%~27%A;60~75 min,27%~30%A;75~90 min,30%~40%A),检测波长360 nm。结果:最佳蜜炙工艺为加药材量20%炼蜜,用水稀释炼蜜使稀释用水/炼蜜量0.4,炒制温度180℃,炒制时间6 min。10批次蜜炙金樱子乙酸乙酯部位指纹图谱共标定出7个共有峰,各批次样品的指纹图谱相似度均>0.80。结论:采用多指标综合加权评分法优选的金樱子蜜炙工艺稳定可行,建立的指纹图谱研究方法简单、准确、重复性好,可用于蜜炙金樱子的质量控制。     

东北铁线莲中抗肿瘤活性成分的提取工艺优选

目的:建立东北铁线莲中抗肿瘤活性成分W2[3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃核糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸皂苷]的提取工艺.方法:以W2提取量为指标,采用HPLC测定W2含量,通过正交试验和单因素试验考察提取溶媒、提取时间、料液比、提取次数对提取工艺的影响,确定W2最佳提取工艺.结果:最佳提取工艺为30％乙醇提取2.5h,料液比1∶12,提取2次.结论:优选的提取工艺合理、稳定、可行,为东北铁线莲后续研究提供实验依据.     

基于网络药理学葛根生津止渴功效的生物机制研究

目的:基于胰岛素抵抗应用网络药理学技术探索葛根生津止渴的潜在生物机制.方法:基于化学成分数据库检索并筛选葛根活性成分,预测活性成分的潜在作用靶点;GenCLiP3检索胰岛素抵抗的疾病靶点.交叉分析获取疾病与药物共同作用靶点,分析靶点组织分布,构建靶点相互作用网络,富集作用靶点通路,阐述葛根生津止渴功效相关的潜在生物机制.结果:发现葛根活性成分43个,其中多数成分为异黄酮类;潜在靶点主要为EGFR、PTGS2、ESR1等,代谢通路主要为钙离子信号通路、胆汁分泌通路、缺氧诱导因子通路.结论:葛根活性成分可能作用于EGFR、PTGS2、ESR1等靶点,通过钙离子信号、胆汁酸分泌等通路改善胰岛素抵抗,发挥生津止渴的作用.     

草乌与(生、法)半夏配伍3个毒性成分毒代动力学变化研究

目的:探讨草乌与(生、法)半夏配伍毒代动力学变化。方法:采用雄性SD大鼠48只,随机分为草乌醇提组、草乌与法半夏醇提组、草乌与生半夏醇提组、草乌水提组、草乌与法半夏水提组、草乌与生半夏水提组,分别单次以《中华人民共和国药典》(2015版)中草乌最大剂量给药(0. 06g/kg),设给药前和给药后共13个采血时间点,采用LC-MS/MS检测血浆样品,血药浓度-时间数据经DAS2. 0软件处理计算毒代动力学参数。结果:3个毒性成分的AUC(0-t)变化:乌头碱:与单用醇提草乌相比,醇提草乌与法半夏配伍明显降低;与单用水提草乌相比,与生半夏配伍后增大明显。新乌头碱:与单用醇提草乌相比,在醇提草乌与法半夏配伍明显降低,但与生半夏配伍明显增大;与单用水提草乌相比,水提草乌与生半夏配伍明显增加。次乌头碱:与单用醇提草乌相比,在醇提草乌与法半夏配伍明显降低,水提物的变化与醇提一致。Cmax变化:乌头碱:与单用水提草乌相比,水提草乌与生半夏配伍后显示增大。新乌头碱:与单用醇提草乌相比,醇提草乌与法半夏配伍降低,但与生半夏配伍后增大;与单用水提草乌相比,水提草乌与生半夏配伍后明显增加。次乌头碱:与单用醇提草乌相比,在醇提草乌与法半夏配伍后明显降低。结论:总体可见生半夏可使草乌中双酯型生物碱的吸收程度与速率增加;法半夏可使草乌中双酯型生物碱的吸收程度与速率减小。     

UV-B诱导对离体阔叶十大功劳叶次生代谢产物累积影响的研究

目的 考察UV-B诱导对于离体阔叶十大功劳叶中3种生物碱为主的次生代谢产物含量的影响。方法 以高效液相色谱法建立UV-B诱导前后叶片中次生代谢产物的色谱图,通过比较分析,得到化合物含量的变化情况。结果 与对照组比较,UV-B诱导组次生代谢产物的含量变化显著,药根碱与巴马汀含量显著增加,均在诱导6 h后达到峰值,其中药根碱增幅410.84%,巴马汀增幅达118.76%,小檗碱诱导后含量则显著降低。结论 UV-B诱导对离体阔叶十大功劳叶中次生代谢产物含量累积有显著影响。     

基于网络药理学的葛根治疗冠心病作用机制研究

目的基于网络药理学方法探究葛根治疗冠心病的作用机制。方法通过化学专业数据库收集葛根化学成分并对其进行类药性分析,预测作用靶点,构建成分-靶点网络;通过CooLGeN检索疾病相关基因,与葛根作用靶点做交叉分析,发现葛根治疗靶点,并进行蛋白质相互作用网络分析;最后进行GO生物学过程富集分析、通路富集分析。结果葛根的成分-靶点网络包含70个成分、180个相应靶点,其中18个靶点为葛根治疗冠心病的靶点。主要生物过程包括氮和氧的代谢与合成及脂肪酸代谢,主要通路包括血小板活化通路、花生四烯酸代谢通路、AGE/RAGE通路、一氧化氮作用通路等。结论葛根通过多靶点、多通路发挥对冠心病的治疗作用,一氧化氮作用通路、AGE/RGAE通路、花生四烯酸通路等可能是葛根治疗冠心病的主要通路。     

HPLC测定草乌与瓜蒌配伍前后6种毒性成分量的变化

目的 研究草乌Aconiti Kusnezoffi Radix与瓜蒌Trichosanthis Fructus按照13个不同比例配伍后,苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌头碱成分量的变化。方法 草乌与瓜蒌的干燥粉末,混匀,分别用10倍量蒸馏水和75%乙醇浸润1 h,提取2次,每次1 h,合并提取液,离心,取上清液。HPLC采用Welch Xtimate C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,乙腈-40 mmol/L乙酸铵（氨水调pH 10.0）梯度洗脱;体积流量1 mL/min,检测波长235 nm。结果 草乌与瓜蒌配伍后,随瓜蒌比例增加,药液pH值逐渐降低,单酯型生物碱总量变化不明显,而双酯型生物碱总量增加。结论 草乌与瓜蒌配伍后,从化学成分来看,双酯型生物碱类成分增加导致毒性增加。     

采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析半夏药材中的化学成分

目的：采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间高分辨率质谱技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）对半夏的化学成分进行定性分析。方法：采用shim-pack xR-ODS Ⅲ色谱柱（2.1 mm×75 mm,1.6 μm）,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,流速0.25 mL·min^-1,采用电喷雾离子化源,正离子全扫描的一级和二级质谱信息。结果：通过一级精确荷质比和二级的碎片数据、参考文献或数据库,质谱裂解规律和标准品的保留时间,发现90个化学成分,初步定性80个化学成分,分别为7个生物碱类,8个醇醚类,12个脂肪酸甘油脂类,5个黄酮类,12个溶血磷脂酰胆碱类,10个醇氨类,11个氨基酸类,11个酰胺类,其他类型4个化合物。结论：通过UPLC-Q-TOF-MS/MS对半夏化学成分时行分析,发现半夏中含有溶血磷脂酰胆碱类物质,其可引起炎症反应及神经元髓鞘脱失和不同程度变性。可推测其可能与半夏的刺激性毒性相关,同时对半夏化学成分全面分析也为半夏药效物质基础研究和质量控制奠定了一定的基础。