复合ADSCs/β-TCP组织工程骨与PRF修复下颌骨缺损的实验研究

目的:探讨脂肪干细胞/β-磷酸三钙(ADSCs/β-TCP)组织工程骨复合富血小板纤维蛋白(PRF)在修复下颌骨缺损中的作用。方法:新西兰大白兔27只,采用随机对照动物实验,随机分为3组,每组9只,培养家兔自体ADSCs,制备自体PRF。在每只兔子的双侧下颌骨制备下颌骨缺损模型。A组:将单纯的β-磷酸三钙(β-TCP)植入双侧下颌骨缺损区,B组:将ADSCs/β-TCP植入双侧下颌骨缺损区,C组:将ADSCs/β-TCP与PRF植入双侧下颌骨缺损区。分别于术后2、4、8周分别处死9只大白兔,并通过大体观察、X线片、以及组织切片观察下颌骨缺损的修复情况。结果:C组在2、4、8周3个时间点的成骨情况明显优于其他2组(P<0.01)。A组与B组之间的成骨情况差异无显著性(P>0.05)。结论:ADSCs/β-TCP复合物与PRF联合应用可促进下颌骨缺损的修复。     

rhBMP-2和FGF-2对成骨细胞矿化及ENPP1、ANK、TNAP表达的影响

目的:研究重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对成骨细胞(MC3T3-E1 Subclone 14)矿化及焦磷酸合成酶(ENPP1)、跨膜蛋白(ANK)和组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)表达的影响,探讨生长因子影响细胞矿化的机制。方法:将MC3T3-E1 Subclone 14细胞分成3组:成骨细胞诱导液(OS)成骨诱导培养组(对照组),OS与rhBMP-2培养组(rhBMP-2组),OS与FGF-2培养组(FGF-2组)。培养12 d后进行ALP活性检测及茜素红染色,实时荧光定量PCR检测矿化相关基因ENPP1、ANK和TNAP表达的差异。结果:rhBMP-2组ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,ENPP1、ANK和TNAP均高表达;FGF-2组ALP活性以及钙化结节明显低于对照组,ENPP1和ANK呈高表达,TNAP低表达。结论:rhBMP-2和FGF-2通过调节ENPP1、ANK和TNAP的表达变化来影响骨的矿化。     

益气化瘀利水法治疗肝硬变腹水21例

98～ 2 0 0 1年 ,我们采用益气化瘀利水法治疗肝硬变腹水 2 1例 ,取得了较好疗效 ,现报道如下。1　资料与方法1 .1　一般资料　本组 2 1例均为住院患者 ,其中男 1 4例 ,女 7例 ;平均年龄 42岁 ;肝炎性肝硬变1 5例 ,酒精性肝硬变 5例 ,不明原因 1例 ;均伴有腹水 ,伴脾大 1 8例 ,伴贫血 2 0例。1 .2　诊断标准　根据《内科诊断学》[1 ] 确定诊断标准。具有肝功能减退及门脉高压症状 ,Ｘ线腹平片示大量腹水 ,Ｂ超示肝硬变 ,肝功能检验明显异常即可诊断。1 .3　治疗方法　均采用益气化瘀利水法治疗。药物组成 :黄芪 60ｇ ,党参 30ｇ,白术 1 5ｇ …     

延迟性脾破裂26例诊治体会

目的:探讨延迟性脾破裂的诊断和治疗。方法:分析26例延迟性脾破裂患者的临床资料。结果:26例患者大多有典型的腹部外伤、腹部轻度疼痛、腹痛缓解、腹痛加重、失血性休克等临床特点,结合相关辅助检查术前明确诊断,均经手术治疗后痊愈。结论:延迟性脾破裂临床不多见,早期临床症状不典型,易漏诊、误诊,治疗方法以脾切除为主。     

富血小板纤维蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化的研究

目的 :研究富血小板纤维蛋白(PRF)通过Wnt/β-catenin信号通路对骨髓基质干细胞(BMSCs)分化的影响。方法:分离、培养原代兔BMSCs,取第三代细胞进行干细胞鉴定,收集同一只兔耳缘静脉血离心制备PRF,将PRF与BMSCs置于Transwell小室中共培养并进行成骨分化。实验分组:A组为单纯BMSCs对照组;B组为PRF与BMSCs共培养组;C组为加入DKK1的PRF与BMSCs共培养组;D组为加入Wnt3a的PRF与BMSCs共培养组。茜素红染色观察各组钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组ALP活性,定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测成骨成脂相关基因Runx2、OCN、PPARγ2及LPL的m RNA表达,同时检测Wnt/β-catenin信号通路关键因子Cyclin D1及β-catenin的m RNA表达。结果:流式细术检测结果显示,原代培养的BMSCs符合间充质干细胞鉴定标准。茜素红染色结果显示,B组和D组的钙结节数量明显多于A组和C组,A组和C组之间无明显差异。碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,B组与D组的ALP活性较A组和C组明显增加(P<0.05),且两组之间差异无明显统计学意义。q RTPCR结果显示B组与D组中的成骨分化标志基因Runx2、OCN的m RNA表达,较A组和C组显著增加(P<0.05),而成脂分化标志基因PPARγ2、LPL的m RNA表达显著降低(P<0.05)。此外,B组和D组中Wnt/β-catenin信号通路关键因子Cyclin D1及β-catenin的m RNA表达较A组和C组显著增加(P<0.05)。结论:PRF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化而抑制其成脂分化。     

FGF2对成骨细胞矿化及矿化基因 ENPP1, ANK 和 TNAP 表达的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)对分化不同阶段的成骨细胞(MC3T3-E1)矿化基因 ENPP1,ANK 和 TNAP 表达的影响,从细胞和分子水平上探讨 FGF2对成骨细胞矿化的机制.方法构建不同分化阶段的 MC3T3-E1细胞,诱导前为未分化阶段,矿化诱导后为分化阶段.50μg/L FGF2分别作用于未分化和分化阶段的 MC3T3-E1细胞,测定细胞内碱性磷酸酶表达情况,用茜素红染色法观察 MC3T3-E1细胞矿化结节的变化,实时荧光定量 RT-PCR 检测细胞矿化基因 ENPP1,ANK 和 TNAP 表达的差异并进行统计学分析.结果茜素红染色显示 FGF2抑制 MC3T3-E1细胞的矿化. FGF2作用于未分化的 MC3T3-E1细胞,ENPP1,ANK 基因表达明显上调,TNAP 基因表达明显下调;而 FGF2作用于分化的 MC3T3-E1细胞后基因表达变化不明显.结论体外细胞研究显示,FGF2可能是通过调节焦磷酸盐加工因子 ENPP1,ANK,TNAP 基因表达的变化来抑制 MC3T3-E1细胞的矿化过程.     

PRF及所含三因子对大鼠脂肪干细胞迁移的影响

目的 研究富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)及所含三因子TGF-β1、PDGF-AB、 VEGF对培养的大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cell,ADSCs)迁移的影响,并初步探讨其机制。方法 无菌切除SD大鼠腹股沟处的白色脂肪组织,采用酶消化法原代培养SD大鼠ADSCs,多向诱导分化法鉴定ADSCs,一次离心法提取制备PRF膜。采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR分析迁移相关因子MT1-MMP和MMP-2 mRNA 的表达情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果 Transwell实验显示,PRF组的迁移细胞数显著高于阴性对照组（P＜0.05）和 抑制剂组（P＜0.05）;不同浓度的TGFβ1、PDGF-AB、VEGF组的组内迁移细胞数的差异显著（P﹤0.05）。经PCR检测,PRF组细胞基因MMP2和MT1-MMP较对照组的表达显著上调（P＜0.05）,TGF-β1、 PDGF-AB和 VEGF的细胞基因MMP2和MT1-MMP较对照组表达均上调,组间差异显著（P＜0.05）。结论 PRF促进了ADSCs的迁移,PRF所分泌的三因子均可不同程度地促进ADSCs的迁移,并呈一定的量-效关系,其迁移能力的增加可能与MT1-MMP和MMP-2 mRNA的上调密切相关。     

种植体周围龈沟液高迁移率族蛋白B1的水平

背景：近来研究发现高迁移率族蛋白B1在各种炎症中作为一种重要的炎症因子发挥了明显作用。目的：测定种植体周围黏膜炎患者龈沟液中高迁移率族蛋白B1的水平,探讨高速泳动族蛋白B1与种植体周围黏膜炎的关系。方法：选择健康种植体(n=39)、轻度种植体周围黏膜炎(n=24)和中度种植体周围黏膜炎(n=16)患者,测定种植体周围龈沟液量、龈沟液中高速泳动族蛋白B1总量及浓度;同时检测种植体周围黏膜炎的牙龈指数、菌斑指数、探诊深度和松动度。结果与结论：轻度种植体周围黏膜炎组龈沟液量、高迁移率族蛋白B1总量和浓度高于健康种植体组(P < 0.01),但低于中度种植体周围黏膜炎组(P < 0.01)。牙龈指数与龈沟液量之间存在正相关关系(P < 0.01),牙龈指数、菌斑指数与高迁移率族蛋白B1总量及浓度存在正相关关系(P < 0.01),探诊深度、松动度与高迁移率族蛋白B1浓度及总量间无明显相关性(P > 0.05)。表明种植体周围龈沟液量及龈沟液中高迁移率族蛋白B1水平与种植体周围黏膜炎的病变程度有关,检测龈沟液中高速泳动族蛋白B1水平可作为临床诊断种植体周围黏膜炎的客观指标。     

肝细胞生长因子mRNA在牵张成骨过程中的表达

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)mRNA在兔下颌骨牵张成骨(DO)过程中的表达。方法 选取新西兰大白兔40只分为牵张组与骨折对照组,每组20只,牵张组行两侧下颌骨切开术,经7?d间歇期后以0.5mm/12h的速度牵张,7d后固定,骨折对照组不牵张,分别于术后第1、2、3、5、7周末各处死4只动物。采用HE染色和原位杂交进行组织学分析并检测HGF的表达。结果 HGFmRNA在术后1周开始出现少量表达,位于牵张间隙内炎性细胞的细胞浆,术后3周时阳性表达强度达到峰值,牵张组与骨折对照组之间阳性表达差异有统计学意义(P＜0.05),术后5周时基本检测不到目的基因的阳性表达,牵张组与骨折对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 DO过程中HGFmRNA在机体内出现阳性表达,且牵张力可促进该因子的阳性表达强度。