草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM, 以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠, 3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 用ELISA法对杂交瘤进行筛选, 并鉴定mAb的生物学特性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后, 共获得5株抗草鱼IgM的mAbs, 分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6, 它们的细胞上清ELISA效价为1∶ 3 200～1∶ 6 400, 其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶ 6 400和1∶ 256 000, 经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1.交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应, 除mAb 4B3外, 其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应, 而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应.mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应, 而与其他鱼类血清反应很弱.免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链.ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L.结论:制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等, 具有广阔的应用前景.     

苗药白龙须对RA滑膜细胞STAT-3/IL-17炎症通路的影响

目的:观察苗药白龙须对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)增殖及STAT-3相关炎症通路的影响，揭示白龙须对RA滑膜炎症的调控机制。方法:培养3～5代RA-FLS细胞，分为空白组(胎牛血清)、正常组(正常兔血清)、雷公藤多苷(TG)组、来氟米特(LEF)组、白龙须低剂量组、白龙须中剂量组和白龙须高剂量组，按各组剂量加含药血清培养，用CCK8法检测各组RA-FLS增殖抑制率的差异，ELISA法检测RA-FLS与CD4⁺T细胞共培养上清液中炎症细胞因子IL-6、IL-17、IL-23和TNF-α浓度，蛋白印迹法(Wersten Blots)检测RA-FLS中pSTAT-3、SOCS-3的蛋白表达。结果:白龙须能够抑制RA-FLS的增殖，降低共培养体系细胞上清中IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等4种炎症细胞因子的浓度，降低RA-FLS中pSTAT-3的表达量，同时上调SOCS-3蛋白表达。结论:白龙须可能通过抑制STAT-3/IL-17炎症通路的活化发挥抗炎作用，抑制RA-FLS持续性增殖。     

基于网络药理学和实验验证探讨松萝治疗类风湿性关节炎的作用机制

目的：通过网络药理学和实验验证探讨松萝在治疗类风湿性关节炎（RA）中的潜在机制。方法：通过查阅文献和利用药物靶点预测网站检索松萝的化学成分和作用靶点,再利用疾病数据库检索RA的相关靶点,将两者取交集,运用Venny软件构建松萝和RA靶点的韦恩图,并取得共同靶点,构建中药–活性成分–靶点网络图、蛋白质相互作用（PPI）网络,并使用DAVID数据库进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,取KEGG富集分析的前20条信号通路。最后通过实验验证,建立RA成纤维样滑膜细胞（RAFLS）模型,使用松萝干预RAFLS以验证其疗效和作用机制。结果：通过数据库筛选出松萝的主要活性成分11种、靶点308个,RA靶点513个,共同靶点49个。其中松萝的主要活性成分是松萝酸、芹菜素、扁枝衣酸乙酯、黑茶渍素、地弗地衣酸等。松萝治疗RA的核心靶点包括：肿瘤坏死因子（TNF）、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、MMP2、白细胞介素–2(IL–2)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、转化生长因子β1(TGFβ...     

草鱼出血病灭活疫苗上调草鱼脾细胞主要免疫分子的表达

目的探讨草鱼出血病灭活疫苗对草鱼脾脏中Ig M、主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)、1型干扰素(IFN1)、补体3(C3)、白细胞介素1β(IL-1β)、内凝集素(intelectin)相关基因表达的影响。方法用草鱼肾细胞系(CIK)培养草鱼呼肠孤病毒(GCRV),并制备草鱼出血病灭活疫苗,用生理盐水稀释成50倍和100倍,包括未稀释组及生理盐水对照共4组。分别腹腔免疫注射健康草鱼,各组分别于免疫后0、6、12、24、72 h,取脾脏并抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上述6种免疫相关基因mRNA表达。结果与生理盐水对照组相比,免疫注射不同剂量的草鱼出血病灭活疫苗均能刺激草鱼脾脏中6种主要免疫分子不同程度的表达上调,表明疫苗刺激草鱼机体启动了非特异性和特异性免疫应答。在3个疫苗免疫组中,intelectin、MHCⅠ、IL-1β、C3基因的相对表达量都随着时间的推移出现先表达上调,后表达下调;基因IFN1的相对表达量在免疫后6 h达到峰值,之后下降至正常水平;Ig M的相对表达量在所检测时间内呈逐渐上调的趋势。结论草鱼出血病灭活疫苗均能诱导草鱼脾脏中免疫相关分子基因的表达上调。