苓桂术甘汤调节Sig1R抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的作用及机制

探讨苓桂术甘汤通过调节sigma-1受体分子(sigma-1 receptor, Sig1R)抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外AngⅡ诱导H9c2心肌细胞肥大模型,将H9c2细胞分为正常组、AngⅡ模型组、20%空白血清组(20%normal rat serum, 20%NSC)、20%苓桂术甘汤含药血清组。按分组将细胞用AngⅡ(1μmol·L^-1)或AngⅡ与血清共孵育72 h后,鬼笔环肽染色检测心肌细胞表面积,微量法检测细胞Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性,流式细胞术检测线粒体Ca²⁺水平,Western blot法检测细胞中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)、Sig1R、肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(inositol ...     

加味小陷胸汤干预Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌MGC803细胞上皮间质转化

目的:研究加味小陷胸汤对人胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)抑制作用及与分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路关系。方法:采用人胃癌MGC803细胞悬液种植法构建BALB/c裸鼠皮下异位移植性肿瘤动物模型。造模成功后随机分为模型组、加味小陷胸汤低、中、高剂量组(16.0,32.0,64.0 g·kg^-1),卡培他滨组(400 mg·kg^-1),每组8只,灌胃给药,每日1次,连续给药28 d,其中卡培他滨组给2周停1周。观察裸鼠一般状态、体质量,测量移植瘤大小,处死后称质量并计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色法观察移植瘤组织病理学变化;用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Wnt1,β-catenin的基因和蛋白表达水平及Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),血管内皮生长因子(VEGF),N-钙黏蛋白(N-cadherin),E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),锌指蛋白(Snail)蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测环氧合酶2(COX2),前列腺素E;(PGE;)的表达水平。结果:各组移植瘤体积随时间呈现不同的增长趋势,模型组增长趋势最为明显,与模型组比较,加味小陷胸汤低、中、高剂量组、卡培他滨组瘤体积呈现不同程度的生长抑制、增长趋势降低,且随时间延长作用明显,给药7,14,21,28 d加味小陷胸汤低、高剂量组、卡培他滨组移植瘤体积明显降低(P<0.05,P<0.01),给药14,21,28 d加味小陷胸汤中剂量组移植瘤体积显著降低(P<0.01)。与模型组比较,给药7,14,21,28 d,加味小陷胸汤高剂量组、卡培他滨组裸鼠移植瘤相对肿瘤体积显著降低(P<0.01),给药14,21,28 d,加味小陷胸汤低、中剂量组移植瘤相对肿瘤体积明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,加味小陷胸汤低、中、高剂量组、卡培他滨组移植瘤抑瘤率显著升高(P<0.01)。与模型组比较,加味小陷胸汤中低、中、高剂量组、卡培他滨组均能下调瘤组织Wnt1,β-catenin m RNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)及MMP-9,VEGF,N-cadherin,Vimentin,Snail的蛋白表达(P<0.05,P<0.01),上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.05,P<0.01);降低COX;,PGE;含量(P<0.05,P<0.01)。结论:加味小陷胸汤对人胃癌MGC803细胞移植瘤EMT具有抑制作用,其机制可能与Wnt/β-catenin通路有关。     

小陷胸汤中抗肿瘤作用有效成分及其机制研究进展

肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一,如何有效治疗该疾病是当今医学领域中亟需解决的重要问题之一。目前,针对肿瘤的治疗大多采用放射性治疗及化学药物治疗方法,虽疗效明显但副作用较大,而中医药以其独特的辨证论治体系与整体观念,在治疗肿瘤方面具有多途径、多层次、多环节、多靶点且毒副作用小等优势,可充分调动机体免疫防疫机制,已成为抗肿瘤药物重点的研发对象。大量研究表明小陷胸汤及其有效成分抗肿瘤疗效明显,众多医家将小陷胸汤及其加减化裁方用于肿瘤的临床治疗,具有广泛的实践基础,且相关药理研究亦证实了该方的有效性,但其抗肿瘤有效成分及其作用机制尚缺乏系统的归纳总结。现以小陷胸汤中生物碱类、酮类、甾醇类及酚类成分为出发点,以抑制肿瘤细胞增殖与侵袭迁移、诱导肿瘤细胞凋亡和自噬、阻滞肿瘤细胞周期、增强肿瘤细胞敏感性、抑制肿瘤血管生成以及调节免疫抑制肿瘤微环境为主要内容,从药物的成分到作用、作用到机制2条途径进行梳理,对小陷胸汤中抗肿瘤作用的有效成分、主要的作用靶点、干预肿瘤发展过程的机制等进行综述,以期为后续小陷胸汤抗肿瘤研究与开发提供新的思路。     

基于Nrf2/BNIP3信号通路探讨苓桂术甘汤含药血清对心肌细胞线粒体氧化应激的影响

探讨苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decotion)含药血清通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路对心肌细胞线粒体氧化应激的影响。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外H₂O₂诱导H9c2心肌细胞氧化应激模型,将H9c2细胞分为正常对照组、H₂O₂模型组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组。H9c2细胞按照分组分别预处理12 h后,加入100μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h, DCFH-DA检测各组细胞内活性氧(ROS)的水平,calcein AM荧光探针检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放程度,Western blot法检测各组细胞中细胞质细胞色素C(CytC)、线粒体CytC、细胞质及细胞核中Nrf2的表达以及BNIP3的变化水平。siRNA-Nrf2转染制备Nrf2沉默的H9c2细胞,观察Nrf2沉默后苓桂术甘汤含药血清...     

苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤

目的 研究苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的关系。方法 采用血清药理学方法，制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞，分为空白组、H₂O₂组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组，给予相应药物处理12 h，再加入100 μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H₂O₂诱导的H9c2细胞增殖活性的影响，荧光探针法检测线粒体活性氧（ROS）水平，比色法检测氧化应激标志物丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt mRNA水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平，PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果 与空白组比较，H₂O₂诱导后细胞活力显著降低（P<0.01），线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加（P<0.01），CAT、GSH-Px水平则显著下降（P<0.01），PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低（P<0.05，P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与H₂O₂组比较，苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力，显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平（P<0.01），并显著提高CAT、GSH-Px水平（P<0.01），促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达（P<0.05，P<0.01），显著减少细胞凋亡率（P<0.01）。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后，逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用（P<0.05，P<0.01）。结论 苓桂术甘汤含药血清保护H₂O₂诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。     

苓桂术甘汤对急性心肌梗死后大鼠肠黏膜屏障损伤的保护作用研究

目的 观察苓桂术甘汤对急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）后大鼠肠道黏膜屏障损伤的保护作用。方法 采用冠状动脉结扎法复制AMI大鼠模型,将模型大鼠随机分别为模型组,苓桂术甘汤低剂量（2.1 g/kg）、中剂量（4.2 g/kg）、高剂量（8.4 g/kg）组,另设假手术组,连续处理4周,采用苏木精-伊红染色法观察心脏和回肠组织病理学变化,ELISA法检测D-乳酸、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）含量,Western blot法和RT-PCR法检测回肠组织闭合蛋白（Occludin）、带状闭合蛋白（zonula occludens-1,ZO-1）及其mRNA表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心脏出现明显的心肌损伤及炎症细胞浸润,回肠组织发生肠黏膜脱落,绒毛和腺体稀疏,炎症细胞浸润等病理学变化,血浆D-乳酸和LPS含量升高,回肠组织Occludin和ZO-1蛋白及mRNA表达水平下调,回肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β及心脏组织TNF-α含量增加（P<0.05）;与模型组比较,苓桂术甘汤各剂量组均可改善AMI后大鼠心肌和肠道组织损伤,降低血浆D-乳酸和LPS含量,上调肠组织Occludin和ZO-1蛋白及其mRNA表达水平,降低回肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β及心脏组织TNF-α的含量（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤改善AMI后大鼠肠黏膜屏障的损伤与调节肠道通透性、降低肠道炎症反应有关。     

基于数据挖掘的张仲景治疗心系疾病用药规律分析

目的分析《伤寒论》及《金匮要略》中治疗心系疾病的方剂，探讨张仲景治疗心系疾病的用药规律。方法使用 Excel 2016将符合标准的方剂建立数据库，对药物药性、药味、药效药物分类等进行频数分析，以 IBM SPSS Modeler 18.0、IBM SPSS Statistics Version 26.0行关联度及聚类分析。结果该研究共纳入 51首方剂，涉及中药 49味，其中高频使用的药物为甘草、桂枝、生姜等；得到关联规则 20条，其中二项关联规则 3条，如“生姜、大枣”三项关联规则 14条，如“生姜、人参 +大枣”、四项关联规则 3条，如大枣 +生姜 +桂枝”聚类分析得到 9组，如“芍药”5个药对聚合组，“甘草、；其中有 4个单味药物组，“瓜蒌”等； 如网络链接关系网状图可见网络链接关系较强的有“生姜 -大枣”“半夏 +黄芩”“茯苓 +白术”等；“桂枝 -甘草”等；高频药对中使用频率最高的药对为“桂枝 -甘草”。结论张仲景治疗心系疾病多注重温通心阳、调理气机、健脾补中、调和营卫。     

基于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca2+载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

目的 探讨小陷胸汤对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法 通过CB-DOCK在线平台（http： //clab. labshare. cn /cb-dock /）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10 μg·L^-1的TGF-β₁建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组（0.1、0.2、0.4 g·L^-1），为进一步探讨Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组和Wnt5a-OE+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca²⁺浓度变化。结果 分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤（0.1、0.2、0.4 g·L^-1）能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（P<0.05，P<0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca²⁺浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05，P<0.01）。结论 小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-β₁诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。     

针灸在输卵管阻塞性不孕治疗中应用概况

正不孕症是指夫妻双方有正常性生活,未避孕1年未妊娠~([1])。不孕症可由多种原因造成,如子宫内膜异位症、盆腔炎性疾病等,但最主要原因是输卵管因素,其中输卵管阻塞在输卵管性不孕中所占比例最高~([2-3])。现代医学治疗输卵管阻塞性不孕技术手段先进,但存在再次阻塞等问题,针灸作为中医学的重要组成部分,在不孕症治疗中应用广泛,优势独特。现就近年来针灸在输卵管阻塞性不孕治疗中的应用综述如下。针灸治疗沙桂娥等~([4])采用针灸治疗输卵管阻塞性不孕患     

苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰大鼠线粒体分裂-融合及Sirt3/AMPK信号通路的影响

目的 探讨苓桂术甘汤对心肌梗死（MI）后慢性心力衰竭（CHF）大鼠线粒体分裂-融合及沉默信息调节因子3（Sirt3）/单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AMPK）信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组（生理盐水，仅穿线不结扎）、模型组（生理盐水，结扎冠状动脉左前降支近心端）、苓桂术甘汤组（4.2 g·kg^-1）、卡托普利组（0.002 57 g·kg^-1），每组10只，连续给药28 d。彩色多普勒超声成像仪检测大鼠心功能参数变化；苏木素-伊红（HE）染色观察心脏病理学改变；免疫荧光法检测活性氧（ROS）水平；JC-1法检测线粒体膜电位；比色法检测三磷酸腺苷（ATP）水平、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、线粒体呼吸链复合物活性（Ⅰ~Ⅳ）；原位末端标记法（TUNEL）染色检测心肌组织细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Sirt3、磷酸化（p）-AMPK、磷酸化动力相关蛋白1（p-Drp1）、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、线粒体分裂因子（MFF）、视神经萎缩蛋白1（OPA1）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）显著升高（P<0.01），左室短轴缩短率（LVFS）、左室射血分数（LVEF）显著降低（P<0.01）；心肌组织出现炎性细胞浸润，病理损伤明显，ROS、MDA水平与心肌细胞凋亡率显著升高（P<0.01），SOD水平、ATP含量、膜电位显著降低（P<0.01）；线粒体呼吸链复合物活性（Ⅰ~Ⅳ）显著降低（P<0.01）；p-Drp1、Fis1、MFF蛋白水平显著上调（P<0.01），Sirt3、p-AMPK、OPA1蛋白水平显著下调（P<0.01）。与模型组比较，苓桂术甘汤组与卡托普利组LVIDd和LVIDs显著降低（P<0.01），LVEF和LVFS显著升高（P<0.01），心肌组织炎性细胞浸润与病理损伤明显减轻，ROS、MDA水平与心肌细胞凋亡率显著降低（P<0.01），SOD水平、ATP含量、膜电位显著升高（P<0.01）；线粒体呼吸链复合物活性（Ⅰ~Ⅳ）显著升高（P<0.01）；p-Drp1、Fis1、MFF蛋白表达显著下调（P<0.01），Sirt3、p-AMPK、OPA1蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 苓桂术甘汤可缓解心肌细胞氧化应激与细胞凋亡损伤，改善线粒体功能，其作用可能与线粒体分裂-融合、Sirt3/AMPK信号通路有关。