铅的肾细胞毒性及钙拮抗剂的干预作用

目的 探讨醋酸铅对大鼠肾细胞(NRK)的毒作用及钙拮抗剂的干预作用.方法 用醋酸铅对NRK细胞染毒,观察细胞存活率的变化,测定细胞上清液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和谷氨酰转肽酶(γ-GT)活力的改变.同时利用钙拮抗剂尼莫地平进行干预,并检测上述指标的变化.结果 随着醋酸铅染毒剂量的增加,细胞存活率逐渐降低.0.02、0.10、0.50 mmol/L铅染毒组细胞上清液中NAG活力分别为(8.37±0.19)、(9.13±0.27)和(10.32±0.48)U/L,均明显高于对照组[(7.08±0.24)U/L1,差异有统计学意义(P＜0.05);各染毒组γ-GT的活力分别为(75.22±7.35)、(101.45±8.87)和(117.71±8.35)U/L,而对照组为(67.23±6.64)U/L,其中0.10、0.50mmoL/L染毒组γ-GT的活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).钙拮抗剂干预结果显示,当尼莫地平的剂量为10、20 μmol/L时,细胞存活率分别为96.67%±1.33%、97.48%±2.15%,NAG活力分别为(7.11±0.35)、(7.06±0.23)U/L,γ-GT活力分别为(74.75±3.23)、(72.26±5.59)U/L,均明显低于0.10 mmol/L醋酸铅染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05),与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).而尼莫地平剂量为5 μmol/L时无明显的干预效果.结论 铅对NRK细胞具有明显的细胞毒性,细胞上清液中NAG活力的变化可反映铅对NRK细胞的早期毒性;钙拈抗剂对铅致NRK细胞的毒性具有保护作用,且与剂量有关.     

肿瘤坏死因子-α对肺成纤维细胞内第二信使物质含量的影响

目的观察不同浓度的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于大鼠肺成纤维细胞不同的时间对细胞内信号物质三磷酸肌醇(IP3)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响.从而探讨由G蛋白介导的TNF-α致肺纤维化信号通路.方法应用细胞培养技术对SD大鼠的乳鼠肺成纤维细胞进行原代培养,传至4～5代后,用不同浓度的TNF-α刺激培养不同的时间,用放射免疫技术测定细胞内IP3、cAMP、cGMP的含量.结果①不同时间cAMP、cGMP、cAMP/cGMP并不随着TNF-α作用浓度增加呈现规律性变化;②在60、120 s时,随着TNF-α剂量的增加IP3的每分钟放射活性(cpm)逐渐上升.对照组、5 μg/L组、20 μg/L组IP3cpm值随着作用时间的延长逐渐增大.结论在一定的作用时间,一定的作用剂量范围内,TNF-α可以引起肺成纤维细胞内第二信使物质IP3、cAMP、cGMP含量的变化.     

几种石英粉尘对大鼠肺脏致纤维化作用的研究

人工复制动物实验性矽肺的模型,用于研究矽肺的发病机理,筛选治疗矽肺的有效药物,寻找早期诊断指标等均是不可缺少的手段。但目前国内各单位进行动物实验染尘所用石英粉尘均各异。为探讨几种不同的石英粉尘对大鼠肺脏致纤维化病变程度,观察其发生、发展过程,对比其间的相互关系,选择本实验室今后实验动物染尘用粉尘,特设计本课题。     

铝对体外培养大鼠神经细胞凋亡的研究

目的研究铝对体外培养大鼠神经细胞凋亡的作用。方法体外培养0~3天大鼠单纯神经元、神经胶质细胞及混合培养神经细胞,并用不同浓度AlCl3.6H2O处理,分为对照组、低、中、高剂量组(分别为0、0.5、1.0和2.0mmol/L),做光镜观察、荧光染色及流式细胞检测。结果①在光镜下和荧光染色法观察,可以见到神经元有凋亡细胞的典型形态学改变,但在神经胶质细胞及混合培养细胞中没有观察到凋亡的典型形态学改变。②神经元的流式检测结果显示,铝可以诱导神经元凋亡,且其早期、晚期及总凋亡率与铝的作用剂量有关;而神经胶质细胞的流式检测结果在染毒剂量组中未发现凋亡率的显著升高,其凋亡率在各组间差异均无显著性;混合培养神经细胞的流式检测结果在染毒剂量组中亦有凋亡率的显著升高,但其凋亡率升高的程度远低于神经元。结论低浓度铝可诱导神经元细胞凋亡。     

细胞中羟脯氨酸的测定

目的 建立碱式消化的方法测定细胞中的羟脯氨酸。方法 体外培养的成纤维细胞经高压碱式水解后测其羟脯氨酸含量。结果 线性关系良好，细胞浓度与光密度呈正相关，回收率90．3％－92．7％，重复试验相对标准偏差8．35％－9．95％。结论 碱式消化方法操作简便、快速，适于大量样品的测定。     

实验性硅沉着病大鼠血清铜蓝蛋白活性动态观察

目的　观察硅沉着病病变过程中血清铜蓝蛋白 (ceruloplasm in,Cp)的动态变化。方法　通过建立大鼠硅沉着病模型 ,并分别于早期和病后给药治疗 ,测定不同时期血清 Cp活性。结果　血清 Cp活性随病变进展而增高 ,病后治疗到 180 d与开始给药时相近 ,预防治疗组染尘后前 6 0 d升高 ,原因有待研究 ;鼠龄与体重对其未见相关影响。结论　各期硅沉着病血清 Cp含量与病情进展有平行趋向     

铅的肾细胞毒性及钙拮抗剂的干预作用

目的 探讨醋酸铅对大鼠肾细胞(NRK)的毒作用及钙拮抗剂的干预作用.方法 用醋酸铅对NRK细胞染毒,观察细胞存活率的变化,测定细胞上清液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和谷氨酰转肽酶(γ-GT)活力的改变.同时利用钙拮抗剂尼莫地平进行干预,并检测上述指标的变化.结果 随着醋酸铅染毒剂量的增加,细胞存活率逐渐降低.0.02、0.10、0.50 mmol/L铅染毒组细胞上清液中NAG活力分别为(8.37±0.19)、(9.13±0.27)和(10.32±0.48)U/L,均明显高于对照组[(7.08±0.24)U/L1,差异有统计学意义(P＜0.05);各染毒组γ-GT的活力分别为(75.22±7.35)、(101.45±8.87)和(117.71±8.35)U/L,而对照组为(67.23±6.64)U/L,其中0.10、0.50mmoL/L染毒组γ-GT的活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).钙拮抗剂干预结果显示,当尼莫地平的剂量为10、20 μmol/L时,细胞存活率分别为96.67%±1.33%、97.48%±2.15%,NAG活力分别为(7.11±0.35)、(7.06±0.23)U/L,γ-GT活力分别为(74.75±3.23)、(72.26±5.59)U/L,均明显低于0.10 mmol/L醋酸铅染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05),与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).而尼莫地平剂量为5 μmol/L时无明显的干预效果.结论 铅对NRK细胞具有明显的细胞毒性,细胞上清液中NAG活力的变化可反映铅对NRK细胞的早期毒性;钙拈抗剂对铅致NRK细胞的毒性具有保护作用,且与剂量有关.     

水通道蛋白1在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达及其意义

目的 探讨水通道蛋白1(AQP1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺的表达及其意义.方法 将48只雄性SD大鼠随机分为对照组和ANP组,制模后3、6、12、18 h各时间点分别处死6只.记录腹水量,测定血清淀粉酶;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清AQP1含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰腺组织病理改变;伊文思兰染料(EB)血管外渗法检测胰腺组织毛细血管通透性;免疫组织化学和Westem blot法检测胰腺组织AQP1蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测AQP1基因mRNA表达.结果 (1)对照组3、6、12、18 h血清淀粉酶水平分别为(1308±759)、(1077±508)、(1325±761)、(1328±762)U/L,ANP组分别为(9102±2199)、(8799±1634)、(9398±1473)、(9484±862)U/L;对照组胰腺组织EB含量分别为(205.61±32.99)、(141.46±27.18)、(96.94±26.79)、(61.43±24.82)mg/L;ANP组分别为(273.59±23.47)、(253.51±31.68)、(221.15±73.68)、(185.28±42.35)mg/L;血清AQP1含量对照组为(74.08±11.80)、(78.49±9.06)、(75.77±7.37)、(72.75±13.87)mg/L,ANP组为(73.29±9.61)、(62.85±7.28)、(62.07±4.39)、(46.33±11.91)mg/L,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01).(2)对照组3、6、12、18 h免疫组织化学灰度值分别为114.13±7.92、122.39±7.99、145.98±6.48、113.98±6.48,ANP组分别为80.07±14.89、110.54±4.45、103.77±10.48、99.18±6.95;对照组Western blot蛋白含量分别为1.19±0.33、1.02±0.25、0.90±0.33、1.06±0.20,ANP组分别为0.83±0.11、0.96±0.21、0.58±0.28、0.72±0.14.结果 均显示ANP组胰腺AQP1蛋白表达低于对照组(P<0.05);(3)对照组3、6、12、18 h荧光定量PCR检测ANP组胰腺AQP1基因mR-NA表达分别为2.13±0.63、2.02±1.40、2.07±0.86、2.49±2.47,ANP组为0.91±0.22、1.01±0.83、0.48±0.23、0.61±0.51,ANP组较对照组减弱(P<0.01).结论 ANP大鼠胰腺组织AQP1表达明显减弱,这可能在毛细血管渗漏综合征的发生中起重要作用.     

水通道蛋白1在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达及其意义

Objective To study the expression of aquaporin 1 ( AQP1 ) in pancreas and its pathogenic role in rats with experimental acute necrotizing pancreatitis (ANP). Methods Forty-eight male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups : control group ( n = 24 ) and ANP group ( n = 24). Six rats in each group were sacrificed at 3,6,12 and 18 h after induction of experimental models. Quantity of ascites and levels of serum amylases were measured at each time point. Serum AQPI was determined by ELISA. Pathological changes of pancreatic tissues were examined. Capillary permeability in pancreatic tissues was tested by Evans Blue (EB) extravasation method. AQPI expression in pancreatic tissues was detected by immunohistochemieal staining, Western blot and fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR). Results (1) Serum amylase level at 3,6,12, and 18 h in control group was (1308±759) ,(1077±508), (1325±761),(1328±762) U/L,and that in ANP group was (9102± 2199), (8799±1634), (9398±1473), (9484±862) U/L respectively. The concentration of EB in pancreatic tissues at each time point in control group was (205.61±32.99), (141.46±27.18 ), (96.94± 26.79), (61.43±24.82) mg/L, and that in ANP group was ( 273.59±23.47 ), ( 253.51±31.68 ), (221.15±73.68 ), (185.28±42.35) ,respectively. There was significandy difference between two groups. Serum AQP1 level in control group at each point was ( 74.08±11.80), (78.49±9.06 ), (75.77± 7.37 ), ( 72.75±13.87 ) mg/L, and that in AN P group was (73.29±9.61 ), ( 62.85±7.28 ), (62.07± 4.39 ), (46.33±11.91 ) mg/L, respectively ( P < 0.01 ). ( 2 ) Protein expression of AQPI in pancreatic tissues detected by immunohistochemical staining in control group at each time point was 114.13±7.92, 122.39±7.99,145.98±6.48,113.98±6.48, and that in ANP group was 80.07±14.89,110.54± 4.45,103.77±10.48,99.18±6.95;Protein expression of AQP1 in pancreatic tissues detected by Western blot in control group at each time point was 1.19±0.33,1.02±0.25,0.90±0.33,1.06±0.20,and that in ANP group was 0.83±0.11,0.96±0.21,0. 58±0.28,0.72±0.14, respectively ( P < 0.05 ). ( 3 ) The mRNA level of AQP1 gene expressed in pancreas in control group at each time point was 0.91±0.22,1.01±0.83,0.48±0.23,0.61±0.51,and that in ANP group was 2.13±0.63,2.02±1.40, 2.07±0.86,2.49±2.47,respectively (P<0.01).Condusion The expression of AQP1 wasdown-reg-ulated in pancreas in rats with ANP,which might could play an important role in the pathogenesis of capil-lary leak syndrome.     

内质网应激性凋亡途径在粉尘致大鼠肺纤维化过程中作用研究

目的 研究内质网应激性凋亡途径在粉尘致大鼠肺纤维化过程中的作用.方法 36只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组及染尘组.采用非暴露式气管内注入法染尘,染尘组一次性注入含质量浓度为50 g/L粒径＜5μm石英粉尘的生理氯化钠溶液1 ml,对照组注入等体积无菌生理氯化钠溶液,每组分别于染尘结束后14、28、56 d随机处死6只大鼠,进行支气管肺泡灌洗,计算肺系数,羟脯氨酸法检测总胶原蛋白的水平,苏木精-伊红染色法观察肺组织的病理变化;流式细胞术检测肺泡巨噬细胞凋亡率;Western-blot法检测肺泡巨噬细胞Caspase-12的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,染尘组大鼠在染尘后第14天细胞凋亡率和Caspase-12的蛋白表达水平均升高(P＜0.05);染毒后第28天肺系数及肺组织总胶原蛋白水平也升高(P＜0.05),细胞凋亡率和Caspase-12的蛋白表达水平持续升高(P＜0.05);染毒后第56天,以上指标仍进一步升高(P＜0.05).结论 内质网应激性凋亡途径可能参与了粉尘致大鼠肺纤维化的发病机制.