基于中医方证代谢组学的生脉散干预老年痴呆症大鼠的药效物质基础研究

目的：本实验主要利用中医方证代谢组学技术评价生脉散预防老年痴呆的药效及发现其关键物质基础。方法：首先采用灌胃三氯化铝联合腹腔注射D-半乳糖连续90天建立老年痴呆大鼠模型,并利用UPLC-HDMS技术采集和分析模型大鼠尿液代谢数据,共确定了42个老年痴呆症的生物标记物;同时干预组在造模同时采用连续给与生脉散冻干粉溶液（5.3g·kg^-1）对模型大鼠进行治疗。结果：通过Morris水迷宫、脑组织病理学检测及Aβ免疫组化等方法评价了生脉散的干预作用,发现了生脉散具有抑制Aβ毒性、保护神经元和改善认知障碍的作用;在此基础上利用代谢组学技术评价了干预组对42个老年痴呆生物标志物的调节作用,发现生脉散主要影响了色氨酸代谢和脂质代谢的多个靶点;同时采用血清药物化学方法研究了生脉散的体内直接作用物质,找到30种成分并与生脉散明显回调的生物标志物相关联。结论：本实验发现了五味子木质素类及人参皂苷类的多种成分与色氨酸代谢和脂质代谢极度相关,为生脉散预防老年痴呆的药效物质基础。     

基于代谢组学考察京尼平苷对慢性酒精中毒大鼠的神经保护作用

目的 利用代谢组学技术发现慢性酒精中毒相关的生物标志物，并以标记物为参数评价京尼平苷的神经保护作用，为慢性酒精中毒的诊断和治疗提供参考。方法 采用50%乙醇按8 mL·kg^-1连续灌胃14 d，再递增为12 mL·kg^-1连续灌胃21 d建立慢性酒精中毒大鼠模型；同时，通过连续灌胃给予京尼平苷（15 mg·kg^-1）35 d进行干预治疗。采集大鼠脑及肝组织进行组织病理形态学及生化指标检测。收集尿液并采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间-串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）进行代谢组学分析，色谱条件为ACQUITY UPLC? HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相0.1%甲酸乙腈溶液（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~2.5 min，1%~11%A；2.5~4.5 min，11%~21%A；4.5~7.0 min，21%~40%A；7.0~8.5 min，40%~99%A；8.5~10.5 min，99%A；10.5~10.6 min，99%~1%A；10.6~13.0 min，1%A），流速0.4 mL·min^-1；质谱条件为电喷雾离子源（ESI），正、负离子模式，扫描范围m/z 50~1 200。所得数据利用Progenesis QI 2.0及MassLynx 4.1软件进行分析，通过元素组成及二级碎片与人类代谢组数据库（HMDB）进行匹配来鉴定生物标记物。结果 病理结果显示，在模型复制第35天，与模型组比较，京尼平苷组的脑组织皮层神经元所呈现的排列紊乱、细胞核固缩和深染、细胞膜边界模糊的坏死状态得到明显改善。生化指标结果显示，京尼平苷能提高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性，降低乙酰胆碱酯酶（AChE）活性，降低β-内啡肽（β-EP）和丙二醛（MDA）的水平。代谢组学结果显示，在模型组大鼠尿液中共鉴定48个慢性酒精中毒生物标志物，涉及色氨酸代谢、嘧啶代谢、苯丙氨酸代谢、戊糖和葡萄糖醛酸的相互转换、抗坏血酸和醛酸代谢、甾体激素生物合成、嘌呤代谢7个代谢途径，其中主要为色氨酸代谢的5-羟色胺途径。结论 慢性酒精中毒神经损伤相关的生物标志物主要源于5-羟色胺代谢途径。京尼平苷能够对该途径进行调节，从而改善脑内氧化应激状态发挥神经保护作用。     

基于中医方证代谢组学的开心散干预老年痴呆症大鼠的效应物质动态分析

目的：本研究在开心散干预氯化铝联合D-半乳糖诱导老年痴呆症大鼠模型有效性的基础上,揭示开心散对老年痴呆症（AD）不同阶段干预作用的代谢物靶点,构建开心散体内成分与内源性生物标记物的网络关系,分析开心散对AD发展过程干预作用的效应物质的动态变化。方法：利用行为学指标评价模型复制进程以及开心散的干预作用;运用代谢组学技术和方法分析开心散对AD大鼠模型不同阶段干预作用的靶点;应用UPLC-MS技术和MSE质谱数据采集模式,分别对开心散体外化学成分和口服给药后的血中移行成分进行表征及鉴定;利用PCMS手段,构建复方药效物质基础与内源性生物标记物的数理模型,发掘开心散防治老年痴呆症不同阶段的效应物质。结果：给予AD大鼠开心散溶液治疗后,模型大鼠的认知功能得到改善,其病理学进程得以延缓。代谢组学研究表明,开心散对AD模型不同阶段标记物的异常表达起到恢复作用,体现了开心散干预老年痴呆症多靶点、多途径的特点。结论：基于中医方证代谢组学方法为开心散减缓AD进程研究提供了新的思路。