四季抗病毒合剂治疗小儿新型冠状病毒肺炎的可行性分析

目的:探索四季抗病毒合剂治疗小儿新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的物质基础和潜在机制。方法:本研究以四季抗病毒合剂治疗小儿COVID-19的可行性为切入点,首先对四季抗病毒合剂的临床用药进行meta分析,然后采用网络药理学方法对抗炎成分、靶点和作用机制进行了探索性研究。最后通过分子对接技术,筛选对新型冠状病毒3CL水解酶有抑制作用的活性成分。结果:Meta分析结果显示,四季抗病毒合剂在治疗小儿呼吸系统感染方面具有较好的疗效和安全性,是具有治疗COVID-19潜力的复方。通过构建的"中药-成分-疾病-靶点"网络,筛选得到与干预COVID-19相关的活性成分88个,相关靶点24个。分子对接结果显示,黄酮类成分是四季抗病毒合剂中主要的抗病毒成分。结论:综合结果预测,四季抗病毒合剂可通过调控白介素-17(IL-17)信号通路和花生四烯酸代谢通路,缓解病毒感染诱发的全身免疫反应和炎症效应,达到"治标"作用;还可能通过抑制3CL水解酶,达到干扰病毒复制的"治本"作用。     

基于TCMSP数据库中药成分的新型冠状病毒3CL水解酶抑制剂虚拟筛选

目的运用分子对接技术模拟预测TCMSP数据库中药成分对新型冠状病毒(SARS-Co V-2)3CL水解酶的作用。方法基于SARS-Co V-2 3CL水解酶的PDB晶型结构(6LU7),构建虚拟靶标模型,以TCMSP数据库中的13 143个化合物为配体筛选对象,以6LU7原配体分子为对照,采用薛定谔2018软件,以Glide程序建立6LU7分子对接体系。然后以原配体分子的对接打分结果为阈值,口服生物利用度(OB)≥30%或类药性(DL)≥0.18为标准筛选候选化合物。最后建立"成分-药材-归经-功效"网络,对候选成分的主要药材归属和作用功效进行总结。结果按照对接打分、OB、DL筛选标准,共筛选得到60个化合物。受体-配体相互作用结果显示,候选化合物主要与靶点蛋白的GLU166、GLY143、ASP187、CYS145、GLN189和LEU141等发生氢键作用。网络预测结果显示,所筛选化合物主要归属药材为甘草、桑白皮、满山红、虎杖和车前草等,肺脏是作用的关键靶器官,其作用功效以清热解毒、止咳祛痰、泻肺平喘等为主。结论对TCMSP数据库化合物进行虚拟分子对接得到的结果为SARS-CoV-2 3CL水解酶抑制剂筛选提供了相关数据。     

基于“初生-次生代谢产物”互作途径的大果沙棘和中华沙棘差异性研究

目的 分析大果沙棘Hippophae rhamnoides vat. sp L.与中华沙棘H. rhamnoides初生/次生代谢物的差异,并对其生物合成途径变化进行分析。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）法对2个种属的沙棘进行初生及次生代谢产物表征,基于二水平析因-星点设计法（plackett burman-central composite design,PB-CCD）设计对沙棘UPLC-DAD指纹图谱进行研究,优化液相方法,指认共有峰;以偏最小二乘-判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）、聚类分析及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析对大果沙棘、中华沙棘进行差异初生代谢物筛选及相关代谢通路富集;进一步采用质谱多反应检测（multiple reaction monitoring,MRM）对筛选得到具有差异的初生代谢物和次生代谢物进行定量分析;最后,对2个品种沙棘的差异性成...     

多元统计及“成分-靶点-疾病”在线关联分析脑心通胶囊中质量标志物

目的基于质量标志物(Q-marker)概念,通过筛选脑心通胶囊Q-markers,构建活性化合物-靶点网络,建立脑心通的整体质控方法。方法采用多元统计方法找到多批次脑心通胶囊的特异性成分,运用基于BATMAN-TCM网络药理学计算平台构建"Q-markers-靶点-通路-疾病"网络,并进行生物学信息注释。进一步建立超高效液相色谱法(UPLC)同时质控Q-markers的分析方法。结果多元统计分析将桑皮苷A、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、芒柄花素和丹参酮IIA 9种成分初步确定为脑心通胶囊整体质控的Q-markers。通过靶点网络构建和拓扑学分析结果推测,Q-markers主要作用于PTGIS、PTGS2、CHRNA10、ENPP1和ADORA2A 5个关键靶点。针对Q-markers建立的UPLC质控方法,线性关系良好(r0.999),重复性、稳定性、精密度试验RSD均3%。结论基于多元统计,网络药理学和UPLC多成分定量测定技术的Q-markers辨析方法,可以初步建立有效成分群多角度的分析方法,并用于脑心通胶囊的质量控制。     

山栀茶水提物和醇提物的抗抑郁作用研究

目的 以药效学方法研究山栀茶的抗抑郁作用.方法 连续21天给予小鼠一系列慢性不可预见性刺激,建立慢性应激模型,同时采用小鼠强迫游泳实验和小鼠悬尾实验作为山栀茶不同溶剂提取物抗抑郁活性的评价指标.结果 与模型组比较,山栀茶的水提物和醇提物的高、低剂量组均能不同程度地缩短小鼠强迫游泳和小鼠悬尾实验的不动时间,具有统计学意义.结论 山栀茶水提物和醇提物具有一定的抗抑郁作用.     

不同加工方法对贯叶连翘中黄酮类成分的影响

目的:研究不同加工方法对贯叶连翘中5种主要黄酮类成分的影响及变化规律,以寻找适宜的干燥方法和条件。方法:贯叶连翘全草洗净泥土,分别经4、-20、-80℃储存48 h后阴干,直接阴干和晒干方法进行加工后,剪切后得到5组样本。采用超高液相色谱(UPLC-PDA)测定贯叶连翘中5种主要的黄酮类成分含量。将5种不同加工方法处理样品的数据标准化处理,以主成分分析法(PCA)综合评价贯叶连翘经不同加工方法处理后其中的黄酮类成分的含量变化规律,并对不同加工方法进行多元比较。结果:经UPLC分析,贯叶连翘5种黄酮类化合物均可在10 min内出峰,且在各自的线性范围内线性关系良好(r0.999 1),检出限范围为0.020~0.107μg·mL~(-1),定量限范围为0.133~0.667μg·m L-1,平均加样回收率为95.05%~102.47%,相对标准偏差(RSD)值为0.13%~1.99%。PCA结果显示,不同处理方法对贯叶连翘成分含量影响综合评分依次为:晒干-80℃-20℃阴干4℃。结论:建立的UPLC方法快捷、灵敏、准确,适用于5种主要黄酮类成分的同时测定。PCA结果说明,不同加工方法对贯叶连翘中黄酮类活性成分有一定影响,综合主要成分的变化规律,选择-20℃冷冻48 h后晾干作为优化的加工方法。     

秦七风湿方HPLC指纹图谱研究

目的建立秦七风湿方的HPLC指纹图谱,为其质量评价及药效物质基础研究提供依据。方法采用Inert Sustain C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为30℃;体积流量为1 m L/min;测定10批秦七风湿方样品,利用中药色谱相似度评价系统(2004A版)建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认。结果建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,10批样品的相似度均在0.99以上,共标定19个共有峰,8个峰来源于珠子参,8个峰来源于秦艽,5个峰来源于山茱萸(其中1号峰为珠子参、秦艽和山茱萸共有),并通过与对照品比较指认了其中8个色谱峰,分别为马钱苷酸(2号峰)、莫诺苷(3号峰)、龙胆苦苷(5号峰)、马钱苷(6号峰)、人参皂苷Ro(12号峰)、人参皂苷F1(13号峰)、竹节参皂苷IVa(14号峰)、人参皂苷F2(17号峰)。结论所建立的方法稳定、准确、重复性好,可为秦七风湿方的质量控制及药效物质基础研究提供依据。     

HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物

目的建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法。方法采用Waters Sunfire TMC18色谱柱(150 mm×1.5 mm,5μm),以含0.05%甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量。优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响。结果 15种皂苷类化合物在0.000 9~2 952.592 3μg/m L线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003~626.554 ng/m L,定量限为0.075~1 762.150 ng/m L,平均加样回收率在98.15%~101.12%,RSD为0.82%~2.15%。结论该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定。     

基于网络药理和分子对接技术预测热炎宁合剂抗COVID-19作用

目的:探讨热炎宁合剂干预新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的可行性,并对其中具有抗新型冠状病毒(2019-nCoV或SARS-CoV-2)作用的活性成分进行虚拟筛选。方法:首先采用网络药理学方法,根据口服生物利用度(OB)、类药性原则(DL),对热炎宁合剂成分进行初步筛选,构建"中药-成分-靶点-通路"网络,通过靶点的相互作用、生物信息学注释对热炎宁合剂参与的代谢通路进行分析,预测其干预COVID-19的可能性。然后通过分子对接技术,筛选对2019-nCoV 3CL水解酶有抑制作用的活性成分。结果:基于成分筛选原则和方法,热炎宁合剂中有29个成分与35个冠状病毒肺炎及急性呼吸症状的靶点互作。关联网络分析结果显示,热炎宁合剂中的活性成分可通过作用于CD40配体(CD40LG)、C-X-C-趋化因子配体10(CXCL10)、C-X-C-趋化因子配体8(CXCL8)、干扰素γ(IFNG)、白细胞介素10(IL10)、白细胞介素2(IL2)和白细胞介素6(IL6)等15个重要靶点,参与调控细胞因子受体相互作用通路和白细胞介素17(IL17)信号通路,半枝莲和虎杖是作用的主要中药。分子对接结果将芹菜素、白杨素甲醚和儿茶素等7个化合物作为潜在的抗2019-nCoV成分。结论:热炎宁合剂可能通过抗炎、抗病毒复制等过程发挥多成分、多靶点、多途径的干预作用。     

正源方抗肝纤维化的网络药理学预测分析及实验验证

目的:基于网络药理学、分子对接技术预测正源方抗肝纤维化的作用机制,并进行细胞水平实验验证。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及文献检索获得正源方活性成分,通过PubChem、SwissTargetPrediction、Similarity Ensemble Approach数据库筛选活性成分潜在靶点,通过OMIM、GeneCards疾病数据库收集肝纤维化的相关靶点,运用Venny平台获得正源方与肝纤维化交集靶点,利用String数据库建立蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点,利用String数据库进行基因本体功能注释(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,利用Cytoscape软件构建药物-成分-靶点-通路网络,使用AutoDock Vina软件模拟关键候选活性成分与核心基因的结合活性。建立人转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肝星状细胞LX2活化模型,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法(WB)检测磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路相关蛋白表达。结果:网络药理学筛选得到正源方活性成分145个及相关靶点1109个,肝纤维化靶点1573个,正源方抗肝纤维化潜在作用靶点415个,拓扑分析得关键靶点61个;PPI网络分析核心靶点为Akt1、血管内皮生长因子A(VEGFA)、白细胞介素-1β(IL-1β)等,GO富集分析得到1753个条目,其功能主要与细胞凋亡、细胞增殖、酶结合等有关;KEGG富集分析得到174个条目,主要涉及癌症通路、PI3K-Akt通路、细胞凋亡通路等;分子对接显示,槲皮素、木犀草素、熊果酸等与Akt1、VEGFA、Jun原癌基因(JUN)等靶点结合活性较强;细胞实验结果表明,不同剂量的正源方给药后,可以显著抑制TGF-β1诱导的LX2细胞的活化,降低磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)/Akt蛋白表达,且具有质量浓度依赖性。结论:正源方可能通过多靶点、多通路发挥抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化、调控PI3K-Akt信号通路有关。