大鼠LC3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

微管相关蛋白l轻链3-β (LC3)在哺乳动物细胞中定位于自噬泡上,可作为一种特定的标记用来检测自噬.从SD大鼠脑组织提取总RNA,经RT-PCR扩增得到LC3全长编码基因,并克隆到pMD18-T载体.以测序验证正确的重组子为模板扩增LC3基因,并构建pUC 18-LC3重组质粒,将其转化到E.coli BL21 (DE3)中.SDS-PAGE结果表明,菌体诱导后形成包涵体形式的表达产物,以电泳回收目的蛋白并免疫新西兰白兔,获得大鼠LC3蛋白多克隆抗体.western blot 结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别LC3蛋白.     

数字乳腺摄影的计算机辅助诊断在乳腺癌筛查中的应用

目的:探讨数字钼靶乳腺摄影及计算机辅助诊断(CAD)在乳腺癌筛查诊断中的价值。方法:2010年1月至2011年1月我院数字乳腺钼靶摄片并经手术证实的40例纳入研究,包括乳腺癌35例(其中原位癌6例)和乳腺腺体增生5例。术前分别在普通显示器上读片诊断和工作站上使用CAD软件读片诊断,然后比较分析。结果:使用普通医用显示器的乳腺癌诊断的敏感性为71.4%,准确性75%;使用CAD分析的乳腺癌诊断的敏感性为88.6%,准确性90%。应用CAD对微钙化检出的敏感性明显高于普通医用显示器(P=0.032)。结论:数字乳腺摄影结合CAD有助于乳腺癌筛查诊断。     

弯齿琵甲含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的探讨弯齿琵甲含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其抗肿瘤的作用机制。方法采用血清药理学方法制备不同浓度的弯齿琵甲含药血清,MTT法检测不同浓度含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;显微镜下观察W right＇s-G iem sa染色和吖啶橙-EB染色后细胞的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA断裂情况。结果宫颈癌HeLa细胞经不同剂量的弯齿琵甲含药血清分别作用24、48 h后,细胞增殖明显受到抑制,且呈时效、量效关系;倒置显微镜下观察可见细胞膜皱缩,细胞核固缩,核染色质边缘化,并出现凋亡小体;荧光显微镜下可见早期凋亡细胞呈黄绿色球状,晚期凋亡细胞呈红色球状;凋亡细胞经琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA梯形条带。结论弯齿琵甲含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖具有明显的抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡相关。     

壳寡糖诱导肺癌细胞A549凋亡及其机制初探

目的 研究壳寡糖对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin表达的影响.方法 利用金属配位氧化法制备壳寡糖,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的壳寡糖处理不同时间对A549细胞增殖的抑制作用,Wright's-Giemsa染色后观察壳寡糖处理后的A549的形态学变化,利用免疫组织化学法分析壳寡糖对A549细胞中Bcl-2、Bax、Survivin表达量的影响.结果 5.0 mg/ml壳寡糖处理A549细胞48 h后对细胞增殖的抑制率为56.70％.荧光显微镜下观察Wright's-Giemsa染色后细胞的细胞膜褶皱,细胞核固缩,并出现凋亡小体.免疫组织化学法分析表明,壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Bax的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达.结论 壳寡糖对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,推测其可能通过上调Bax和下调Bcl-2、Survivin的表达诱导细胞凋亡.     

玉米SOD的分离纯化与部分性质研究

目的建立1种高效而简单的玉米SOD分离纯化方法。方法采用初步提取、40%~80%硫酸铵分级沉淀、Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱处理的方法从玉米中提取SOD。结果获得了比活为1.18×104U/mg的SOD-A组分,活力回收率为11.7%;纯化后的SOD-A组分经PAGE和SDS-PAGE均为一条带;等电聚焦结果表明该组分的等电点为7.2;经鉴定,该组分属于Cu/Zn-SOD。稳定性研究表明,该组分对热、酸碱及常见变性剂(如尿素)的稳定性较好。结论利用Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱相结合的方法可以纯化得到高比活、稳定性好的玉米SOD-A组分。     

弯齿琵甲粗蛋白诱导Hela细胞凋亡的实验研究

目的研究弯齿琵甲粗蛋白诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其作用机制。方法采用硫酸铵沉淀法提取弯齿琵甲粗蛋白,分别按7.5、10和15μg.mL-1三个浓度作用于Hela细胞48h和72h,吖啶橙-EB染色后倒置荧光显微镜下观察细胞的形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA断裂情况,Annexin V-FITC/PI双染法定量检测细胞的凋亡情况。结果不同浓度的粗蛋白作用于细胞48h后均出现较明显的细胞凋亡形态,10和15μg.mL-1两浓度粗蛋白作用于细胞后使DNA片断化,流式细胞术检测显示加入15μg.mL-1的弯齿琵甲粗蛋白在48h以及72h的凋亡率分别达到了10.95%和28.075%,坏死率也分别达到了2.02%和18.34%。结论弯齿琵甲粗蛋白能够抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,且呈时间剂量依赖关系。     

瓜蒌含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的研究瓜蒌水煎剂含药血清对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用血清药理学方法制备瓜蒌含药血清,MTT法检测含药血清对HeLa细胞生长的抑制作用,Wright’s-Giemsa染色和吖啶橙-EB染色在倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA Ladder。结果 HeLa细胞经不同剂量的瓜蒌含药血清作用24,48 h后,细胞体外抑制作用明显,呈量效、时效关系;倒置显微镜观察可见HeLa细胞膜皱缩,细胞核固缩,核染色质边缘化,并出现凋亡小体;荧光显微镜下可见晚期的凋亡细胞被染成红色,细胞固缩成球状;琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞发生了DNA断裂,呈梯状条带。结论瓜蒌含药血清对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡相关。     

症状性颅内动脉粥样硬化疾病的介入治疗

症状性颅内动脉粥样硬化疾病(SICAD)是药物难控性脑缺血疾病的主要病因之一.随着神经放射学的不断发展和介入新技术应用于临床,特别是Wingspan支架系统在临床的推广使用,球囊扩张及支架成形术已成为治疗SICAD的主要手段.     

输尿管子宫内膜异位症1例

患者45岁,女,体检B超发现左肾重度积水,病人无腰痛发热等症状。①KUB IVP示左肾、左输尿管不显影。②肾脏输尿管膀胱三维CT(附图1)示左侧输尿管人口及膀胱三角区软组织密度占位,致相应左侧输尿管扩张积水,该占位内密度不均匀,增强扫描后可见强化,另见右侧附件区囊性灶。③膀胱镜(附图2)示左输尿管上方1cm处软组织块影,中央有坏死,充血,中央出血处做活检送病理,病理诊断:腺性膀胱炎;插管后行左侧肾盂输尿管逆行造影。④逆行肾盂造影(附图3) 示:左输尿管下段骶1水平迂曲有狭窄,骶髂关节下缘水平输尿管狭窄,管壁外缘毛糙呈锯齿状,其上段输尿管扩张积水,提示左输尿管下端占位,左输尿管下段有浸润可能。⑤术前检查:尿常规:镜下每视野WBC和 RBC均小于3个;血常规:血红蛋白143 g/L(正常值: 110—150g/L),血小板381×109／L ↑(正常100-300×109/ L)。术前诊断:腺性膀胱炎、左输尿管下段梗阻、左肾盂输尿管扩张。逐行左输尿管下段 部分膀胱切除 输尿管再植术。术中扪及增粗的左输尿管内有肿块,但在膀胱左侧后方另触及膀胱外占位,插入双“J”管上至肾盂,下达膀胱。术后病理诊断:(左)输尿管下端子宫内膜异位症。     

生物化学技术2的教学实践

继＂生物化学技术1＂之后,为学生开设了以综合型和研究型实验为主的＂生物化学技术2＂,构建了生物化学实验体系,注重培养学生的综合创新能力。从实验内容选择、教学方式改革、教学效果、存在问题及解决方法等方面,介绍了＂生物化学技术2＂教学实践的一些体会。