慢性粒细胞白血病Bcr/Abl基因OD域融合蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化慢性粒细胞白血病(CML)Bcr/Abl基因OD域融合蛋白。方法将TAT、OD和HA基因片段顺次克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pTAT-OD-HA,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL2(lDE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot分析后,用镍离子亲和层析柱纯化。结果所构建的重组质粒pTAT-OD-HA经PCR、双酶切及测序鉴定正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30000,诱导6h蛋白表达量达最高,约为10%;Westernblot分析显示,该蛋白可与鼠抗HA单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度约为95%。结论已成功原核表达并纯化了TAT-OD-HA融合蛋白,为进一步研究其在CML中的作用奠定了基础。     

全帧内可伸缩性视频编码中的快速模式选择算法

最新的视频编码技术H.264/AVC及可伸缩性扩展视频编码(Scalable Video Coding,SVC)通过多模式预测的方法实现了极高的压缩效率,同时也明显提升了编码复杂度。为减少SVC HighIntra Profile中增强层帧内编码模式选择的计算复杂度,本文提出一种快速的帧内模式选择算法:通过对增强层少量帧的编码模式进行全搜索,确定增强层中各种编码模式的分布情况以及增强层与底层的纹理相关性,然后利用模式分布的统计结果,直接跳过出现概率很低的预测模式;同时,本算法利用层间相关性的统计结果,通过查表的形式,省去增强层部分低效预测方向的模式选择过程。实验结果表明,在几乎不影响率失真性能的前提下,本算法能节约50%以上的编码时间。     

嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC重组腺病毒的构建及鉴定

目的构建嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC的重组腺病毒,并检测其表达。方法采用PCR和重叠PCR法构建真核表达质粒Migr1-TrCP-CC-HA和Migr1-△F-CC-HA,以此为模板,通过PCR将其克隆至穿梭质粒pAd-Track-CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-TrCP-CC和pAdTrack-△F-CC,再与骨架载体pAdeasy-1经同源重组得到重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC,转染HEK293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,测定其滴度,并经RT-PCR检测目的基因的转录水平。结果经酶切和测序证实重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC构建正确,经HEK293细胞包装后显微镜下可观察到绿色荧光,病毒滴度分别为2.5×109和1.0×109pfu/L,经RT-PCR检测目的基因可有效表达。结论已成功构建重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步研究其靶向融合蛋白Bcr-Abl泛素化和降解的机制奠定了基础。     

基于单片机的CAN总线系统设计

针对单片机的CAN(Controller Area Network)串行通信,提出了一种由C8051F02X系列单片机、CAN接口控制器以及串行收发器构成的多点通信网络,介绍了通信节点的硬件电路设计和软件处理流程,详细阐述了CAN帧结构、数据流的收发问题,并针对CAN总线网络的同步方式以及CAN接口控制器进行了分析。