大蒜热激转录因子基因AsHSFB1的克隆、亚细胞定位及其表达分析

热激转录因子(HSF)基因是植物热胁迫响应的重要转录调节基因,在植物胁迫应答和其他抗逆反应过程中起着关键作用。为研究大蒜热激反应的分子机制,本研究基于大蒜转录组数据,以徐蒜6号为试验材料,采用同源克隆方法获得编码HSF的AsHSFB1基因。序列分析结果显示,AsHSFB1含有882 bp的开放阅读框,编码293个氨基酸,其蛋白质含有热激转录因子的特征结构域。在进化关系上,AsHSFB1与拟南芥AT4G11660(AtHSFB2B)同源性最高。亚细胞定位结果表明,AsHSFB1蛋白主要定位在细胞核和细胞质上。本研究采用同源重组技术成功构建pCAMBIA1305-AsHSFB1过表达载体,为进一步研究该转录因子基因的功能,培育耐热大蒜品种奠定基础。RT-PCR分析结果表明,不同大蒜品种中,AsHSFB1基因在叶片中相对表达水平均最高,具有组织表达特异性;38℃高温胁迫处理下,徐蒜6号中的AsHSFB1基因相对表达水平在24 h时明显上调;4℃低温胁迫下,徐蒜815和徐蒜6号中AsHSFB1基因相对表达水平的变化趋势相似,均先上升后下降,在处理4 h时相对表达水平达到峰值。     

利用发根农杆菌体系检测西瓜CRISPR/Cas9系统的靶位点

西瓜遗传转化技术周期长,过程复杂,CRISPR/Cas9基因编辑系统又存在着一定的脱靶效应,为了保障所选择的靶位点的可行性,本研究选择西瓜ClSPO11-1基因(ID:Cla003301)为靶标,利用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建双靶点的基因敲除载体,利用发根农杆菌Ar. Qual菌株侵染西瓜子叶外植体,通过简单的组培过程,使西瓜外植体长出不定根,在不定根中检测到了在靶位点1处发生了不同程度的碱基缺失,经过与野生型氨基酸序列比对分析后发现均造成了翻译提前终止和氨基酸的突变,成功实现了对西瓜不定根的基因编辑,该方法周期短,操作简便,实现了快速鉴定在西瓜中选择的靶位点的靶向效率,为研究西瓜基因功能和遗传改良提供了保障。     

蒜黄种质资源农艺性状的综合评价及聚类分析

通过对15个蒜黄种质资源的12个数量性状进行主成分分析和聚类分析,旨在建立蒜黄品种的综合评价标准.结果表明,不同蒜黄材料间性状变异程度较大,变异系数为7％～29％;性状间存在不同程度的相关性,其中产量与株高、叶长显著相关,与地上部假茎长极显著相关,生长指标与产量间信息重叠.主成分分析法将蒜黄的12个数量性状综合为4个指标,即蒜黄生长因子、产量因子、口感因子和风味因子,集中了原始性状79％以上的信息.依据主成分贡献率大小进行综合评判,选择植株高大、叶片肥大、产量高、纤维素含量高、大蒜素含量高的蒜黄作为优质材料.通过聚类分析将供试材料分为3个类群,对照主成分分析综合评价得分情况可知,类群Ⅰ的综合性状表现相对较好,类群Ⅱ的表现中等,类群Ⅲ的表现则较差.     

大蒜AsPEX7基因的克隆与非生物胁迫响应分析

为了解大蒜PEX7基因及其编码的蛋白质结构特性,分析该基因对不同非生物胁迫的响应情况,从大蒜品种徐紫1号的叶片RNA中克隆获得AsPEX7基因.序列分析结果表明,AsPEX7基因含有1个长度为951 bp的开放阅读框(ORF),编码316个氨基酸,其相对分子质量为35.57 ku,理论等电点为5.55,为亲水性蛋白.氨...     

脱硫菌胞外聚合物提取及分泌量影响因素研究

[目的]选择一种较优的黄单胞杆菌EPS提取方法,并分析环境因素对EPS分泌量的影响。[方法]分别采用离心、加热、超声、硫酸、EDTA和甲醛加碱法提取EPS,测定提取物中多糖、蛋白质及DNA含量,以评价提取效率及对细胞的破坏程度。利用正交试验设计考察温度、培养基pH值等因素对EPS分泌量的影响。[结果]甲醛加碱法和超声法的提取效率较高。通过对不同超声功率的比较,选择在50W下超声4min提取EPS。正交试验结果表明,黄单胞杆菌EPS最大分泌量的环境条件为pH值6.0,温度32℃,菌液比7∶100,金属盐溶液投加量3ml。[结论]黄单胞杆菌EPS提取采用超声法;环境因素中温度对分泌量的影响最大。     

秸秆还田配施钾肥对大蒜生长及抗氧化系统的影响

为推进大蒜产区秸秆资源的合理利用，促进大蒜栽培减肥增效，在大田条件下，以大蒜品种徐蒜918为材料，设置6个处理研究玉米秸秆还田配施钾肥对大蒜生长、抗氧化胁迫能力的影响。结果表明，秸秆还田+1/3钾(S+1/3K)的处理大蒜干重和根系活力显著高于其他处理，分别为27.67 g·株^-1和20.18 mg·g^-1·h^-1,叶片色素含量影响不大。与对照相比，秸秆还田+1/3钾处理显著降低大蒜叶片与根系SOD活性、根系POD活性与叶片CAT活性，降低了根系MDA含量；提高了大蒜叶片可溶性蛋白含量，并降低了大蒜叶片可溶性糖含量。秸秆还田配施适量的钾肥可促进大蒜干物质的积累，提高根系活力，保持大蒜体内良好抗氧化酶活性水平，降低根系MDA含量，促进了大蒜的生长。