ｍｉＲ－１０３通过抑制ＦＢＷ７的表达促进肝癌细胞增殖

摘 要： 【目的】研究ｍｉＲ－１０３对肝癌细胞增殖功能的影响及其作用机制。【方法】Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ方法检测ｍｉＲ－１０３在肝癌组织和细胞中的表达。将ｍｉＲ－１０３ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ转染到肝癌细胞中,分为实验组（转染ｍｉＲ－１０３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）和对照组（转染Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）,通过ＭＴＴ实验检测肝癌细胞的增殖变化。Ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测转染ｍｉＲ－１０３ ｍｉｍｉｃｓ后肝癌细胞中ＦＢＷ７ ｍＲＮＡ和蛋白的表达变化。通过重荧光素酶报告基因实验检测转染ｍｉＲ－１０３ｍｉｍｉｃｓ 或ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ后ＦＢＷ７－３’ＵＴＲ活性的变化。【结果】 Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ结果显示ｍｉＲ－１０３在肝癌组织和ＨｅｐＧ２ 细胞系中均高于癌旁组织和ＬＯ２肝细胞系（Ｐ＜ ０．０５）。ＭＴＴ实验结果显示,转染ｍｉＲ－１０３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ实验组肝癌细胞的存活细胞数低于对照组,差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。 Ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示,转染ｍｉＲ－１０３ ｍｉｍｉｃｓ实验组肝癌细胞中ＦＢＷ７的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平都低于对照组．重荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组相比,转染ｍｉＲ－１０３ｍｉｍｉｃｓ的实验组中ＦＢＷ７－３’ＵＴＲ报告基因活性显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）;与对照组相比,转染ｍｉＲ－１０３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ的实验组中ＦＢＷ７－３’ＵＴＲ活性显著升高（Ｐ＜ ０．０５）。进一步实验发现,转染ＦＢＷ７后能显著下调由ｍｉＲ－１０３ ｍｉｍｉｃｓ所引起的细胞增殖作用。【结论】ｍｉＲ－１０３可以通过抑制ＦＢＷ７的表达来促进肝癌细胞增殖。     

肝动脉灌注化疗联合热疗治疗肝门部胆管癌的临床价值

【目的】 初步评价肝动脉灌注化疗联合局部内生场热疗（热化疗）在肝门部胆管癌治疗的临床应用价值。【方法】对２００３年１０月至２０１３年６月期间３９例接受介入治疗的肝门部胆管癌病人进行回顾性研究,其中热化疗组２０例,于肝动脉置管,灌注吉西他滨后,再行肝动脉持续灌注卡铂及肿瘤区域内生场热疗６０ｍｉｎ,热化疗后连续肝动脉灌注５－Ｆｕ ３ ｄ,第８天静脉应用吉西他滨１次。对照组１９例,肝动脉置管及化疗方案同前,未行热疗。上述治疗每４周为１疗程。化疗期间观察化疗毒副反应、并发症及耐受性,随访期间的疗效评价以无肿瘤进展生存时间（ＰＦＳ）和生存时间（ＯＳ）为主要参考指标,并对两组的生存数据进行生存评估。【结果】热化疗组共行１０７个疗程治疗,ＯＳ为７．２～ ８５．８个月,中位ＯＳ为２３．７个月,ＰＦＳ为７．２～８０．３个月,中位ＰＦＳ为２０．３个月。对照组共行１００个疗程治疗,ＯＳ为６．０ ～ ２２．３个月,中位ＯＳ为１７．５个月,ＰＦＳ为３．５～ １９．５个月,中位ＰＦＳ为１４．２个月。经Ｌｏｇ－ｒａｎｋ检验显示热化疗在延长患者ＯＳ和ＰＦＳ与对照组的治疗有统计学差异（Ｐ ＜ ０．０５）。治疗期间两组均无严重的化疗毒副反应和并发症。【结论】肝动脉灌注化疗联合内生场热疗在治疗肝门部胆管癌具有安全、微创、耐受性良好的特点,有望成为一个新的辅助性治疗。     

Ｔ１ρ－ＭＲＩ 技术评价腰椎不同内固定方式对相邻节段椎间盘退变的影响

【目的】应用Ｔ１ρ－ＭＲＩ技术定量评价后路腰椎椎间融合固定术（ＰＬＩＦ）与棘突间动态固定术（ｗａｌｌｉｓ）对相邻节段椎间盘退变的影响,并分析退变的相关因素。【方法】 通过前瞻性研究方法,选取Ｌ４／５退变性失稳患者４２例,按随机数字法将患者随机分为ＰＬＩＦ组和Ｗａｌｌｉｓ组,分别为２２例和２０例。通过Ｔ１ρ－ＭＲＩ技术以及拍摄Ｘ线片,测量固定节段上位相邻节段椎间盘髓核Ｔ１ρ值、椎间盘高度、椎间隙动态角度变化,并通过ＪＯＡ评分及腰功能障碍指数（ＯＤＩ）评价临床效果。终末评估时间设为术后２４个月。【结果】４２例患者均获得随访,Ｗａｌｌｉｓ组手术时间及出血量均少于ＰＬＩＦ组,且差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。末次随访,两组ＯＤＩ、ＪＯＡ评分改善率以及Ｌ３／４节段影像学退变率均无显著性差异（Ｐ＞ ０．０５）;但两组Ｌ３／４椎间盘Ｔ１ρ值末次随访均存在下降趋势,且ＰＬＩＦ变化值明显大于Ｗａｌｌｉｓ组,差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 与ＰＬＩＦ术式相比,棘突间动态固定（Ｗａｌｌｉｓ）具有出血少、用时短等优点,且可显著延缓上位相邻节段椎间盘髓核中ＰＧ退变趋势,但两者临床效果无显著性差异。     

ＵＲＳＡ患者蜕膜调节性Ｔ细胞Ｔｏｌｌ受体表达变化的临床意义

【目的】 检测ＵＲＳＡ患者蜕膜ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔｒｅｇ中ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９的表达,探讨ＴＬＲｓ参与ＵＲＳＡ发生的免疫机制。 【方法】选择从２０１３年１月至２０１３年１１月就诊于广州市妇女儿童医疗中心妇产科的ＵＲＳＡ患者,其中Ｂ超确认胚胎已停育３０例为研究对象,同期选择３０例要求人工流产的计划外妊娠的正常早孕妇女为对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ）。收集ＵＲＳＡ患者、对照组清宫手术后的新鲜蜕膜组织,流式细胞仪检测两组蜕膜组织中ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＴｒｅｇ 比例以及ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ方法比较蜕膜组织中ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔｒｅｇ 中ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９表达的差异。【结果】ＵＲＳＡ患者蜕膜ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔ细胞中ＴＬＲ４、ＴＬＲ９的表达在ｍＲＮＡ、蛋白水平均下调,差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０１）,而ＴＬＲ２表达两组间差异无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）。ＵＲＳＡ患者蜕膜中ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔ细胞低于正常早孕妇女蜕膜（Ｐ ＜ ０．０１）,ＴＬＲ４、ＴＬＲ９的表达与ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＴｒｅｇ细胞比例呈显著相关（Ｐ ＜ ０．０１,Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 ＵＲＳＡ患者蜕膜中的ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔｒｅｇ减少与ＴＬＲ４、ＴＬＲ９低表达相关,ＴＬＲｓ异常表达可能参与ＵＲＳＡ的发生。     

大鼠脑慢性低灌注模型１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴ／ＣＴ显像及ＳＵＶｍａｘ值变化

【目的】 建立大鼠脑慢性低灌注模型,观察脑组织脱氧葡萄糖１８Ｆ （１８Ｆ－ＦＤＧ） ＰＥＴ／ＣＴ显像及最大标准化摄取值（ＳＵＶｍａｘ）变化情况。【方法】１６只２５０ ～ ３００ ｇ雌性ＳＤ大鼠通过一侧颈外静脉（ ＥＪＶ）和颈总动脉（ＣＣＡ）端侧吻合,同时夹闭双侧颈外动脉（ＥＣＡ） 及对侧横窦引流静脉建立慢性低灌注模型,在模型建立后２４ｈ,第７ 、３０和９０天 ４个时间点分别随机选择４只大鼠进行１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴ／ＣＴ扫描,４只体质量相仿的雌性大鼠作为正常对照,勾画双侧大脑中动脉（ＭＣＡ）供血区皮层感兴趣区（ＲＯＩ）,比较各组ＳＵＶｍａｘ变化及观察双侧大脑半球１８Ｆ－ＦＤＧ摄取是否均一。【结果】模型组大鼠术后２４ ｈ ＳＵＶｍａｘ升高,术后第７天明显降低,第３０天及９０天较第７天升高,但仍低于正常大鼠,组间比较差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０１）。模型组双侧大脑半球１８Ｆ －ＦＤＧ ＰＥＴ／ＣＴ显像及ＳＵＶｍａｘ在各扫描时间点无差别。 【结论】通过一侧ＥＪＶ和ＣＣＡ端侧吻合及双侧ＥＣＡ和对侧横窦引流静脉结扎建立的慢性大鼠低灌注模型,脑组织表现出对１８Ｆ－ＦＤＧ摄取的动态变化;模型建立对双侧大脑半球１８Ｆ－ＦＤＧ摄取影响一致。     

血清胱抑素Ｃ和尿ＮＧＡＬ联合检测在急性肾损伤病情评估及预后中的价值

摘要：【目的】评价血清胱抑素Ｃ（ＣｙｓＣ）及尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（ＮＧＡＬ）联合检测在急性肾功能损伤（ＡＫＩ）病情评估及预后中的临床价值及意义。【方法】选取２０１０年１月至２０１１年１２月我院住院收治的９０例ＡＫＩ患者（ＡＫＩ组）的血液标本,均符合ＡＫＩ诊断标准。根据ＡＫＩ分期标准分为ＡＫＩ１期组（３０例）、ＡＫＩ２期组（３０例）和ＡＫＩ３期组（３０例）,记录其血清ＣｙｓＣ、尿ＮＧＡＬ的变化,并对其进行ＡＰＡＣＨＥⅡ评分,分析ＣｙｓＣ及ＮＧＡＬ与ＡＰＡＣＨＥⅡ的相关性,评价两者联合检测在ＡＫＩ患者中的预后价值。【结果】与其它３组相比,ＡＫＩ３期患者血清ＣｙｓＣ及尿ＮＧＡＬ水平显著升高,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;ＡＫＩ患者血清ＣｙｓＣ、尿ＮＧＡＬ与ＡＰＡＣＨＥⅡ成明显线性相关（ｒ值分别为０．８７７、０．７１７,Ｐ＜０．０５）;ＡＫＩ患者死亡率为２８．８９％（２６／９０）,血清ＣｙｓＣ及尿ＮＧＡＬ水平随ＡＰＡＣＨＥⅡ评分增多而升高,存活组与死亡组之间比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;高ＣｙｓＣ＋ＮＧＡＬ组ＡＰＡＣＨＥⅡ评分及病死率明显高于高ＣｙｓＣ及高ＮＧＡＬ组,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。【结论】急性ＡＫＩ患者血清ＣｙｓＣ和尿ＮＧＡＬ均升高,血清ＣｙｓＣ及尿ＮＧＡＬ是反映ＡＫＩ较敏感的生物学标志物,可以作为评价ＡＫＩ患者病情和预后的指标。     

纳米ＴｉＯ２：Ｃ涂层对口腔常见细菌的抗菌效果观察

摘要：【目的】考察纳米ＴｉＯ２：Ｃ薄膜涂层的抗菌性能,为其在种植体周围炎防治中的应用奠定实验基础。【方法】制备ＴｉＯ２及ＴｉＯ２：Ｃ薄膜涂层,根据贴膜法,每个样品做３个平行样,每个样品重复３次实验,检测其对不同口腔常见细菌的抗菌效果;通过Ｘ射线能谱仪检测牙龈卟啉单胞菌胞膜的离子种类并计算离子含量,从而分析探讨纳米ＴｉＯ２：Ｃ薄膜涂层的抗菌机理。【结果】本研究合成的纳米ＴｉＯ２：Ｃ薄膜涂层厚度均匀,对口腔常见细菌２０ｍｉｎ可见光催化抗菌率均达到９０％以上,具有良好的抗菌效果。Ｘ射线能谱显示牙龈卟啉单胞菌Ｎａ离子、Ｃａ离子含量随着光催化时间的延长而降低,而Ｐ元素变化趋势无规律。【结论】纳米ＴｉＯ２：Ｃ薄膜涂层对口腔细菌有很强的抗菌效果,改善了基体材料的抗菌性能。纳米ＴｉＯ２：Ｃ薄膜涂层的可见光催化抗菌机理之一可能为改变细胞膜的结构,影响细胞膜的通透性。     

外源性硫化氢通过抗氧化应激逆转过氧化氢诱导的 人脐静脉内皮细胞衰老

摘 要： 【目的】探讨硫化氢（Ｈ２Ｓ）对过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）诱导的人脐静脉内皮细胞衰老的影响及其抗氧化机制。【方法】建立Ｈ２Ｏ２诱导的人脐静脉内皮细胞衰老模型,采用不同浓度的硫氢化钠（ＮａＨＳ）预处理内皮细胞,观察其对衰老的作用。【结果】与对照组相比,６０ μｍｏｌ／Ｌ Ｈ２Ｏ２预处理后,能显著提高细胞ＳＡ β－ｇａｌ阳性率和血浆纤溶酶原激活物抑制剂－１（ＰＡＩ－１）的表达,同时增加丙二醛（ＭＤＡ）含量,但减少过氧化物歧化酶１（ＳＯＤ１）的表达。而ＮａＨＳ的预处理可以显著减少细胞ＳＡ β－ｇａｌ阳性率和ＰＡＩ－１的表达,减少ＭＤＡ的含量,增加ＳＯＤ１的表达。【结论】ＮａＨＳ可以逆转Ｈ２Ｏ２诱导的内皮细胞衰老,其机制与抗氧化应激有关。     

运用三色ＦＩＳＨ技术确定自然流产夫妇染色体微小区域倒位

摘要： 【目的】 对２例婚后妻子连续２次流产伴２１号染色体结构改变病例进行多探针荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）,探讨ＦＩＳＨ技术在临床诊断微小区域染色体结构异常的应用价值。【方法】通过染色体常规Ｇ 显带技术初步确定染色体结构异常类型及染色体断裂的区带位置,然后挑选位于２１号染色体长臂位点特异性ＢＡＣ克隆,缺口平移法将其标记为探针,与２１号染色体长臂末端的商品化探针混合,进行三色ＦＩＳＨ。【结果】ＦＩＳＨ结果排除了涉及其它染色体结构异常的可能,确定这２例均为２１号染色体长臂微小区段的臂内倒位,这是首次关于２１号染色体臂内倒位导致自发流产病例的报道。【结论】２１号染色体臂内倒位与自然流产相关;多色ＦＩＳＨ 技术在诊断和确定微小区域染色体结构异常中有非常重要的作用和应用价值。     

海洛因成瘾患者的大脑白质结构网络的拓扑特性

【目的】 探讨海洛因成瘾患者的大脑白质结构网络的拓扑特性。【方法】 采集２０例海洛因成瘾者及１７例健康对照组的扩散张量成像和大脑高分辨率解剖结构像,利用纤维追踪技术和图论模型,构建了每个被试的大脑白质结构网络,计算大脑网络的拓扑特性。【结果】 在全局参数上,海洛因成瘾者的大脑网络的最短路径长度显著低于健康对照组,全局效率高于健康对照组（Ｐ ＜ ０．０５）;在节点参数上,海洛因成瘾者的节点效率显著增加 （Ｐ ＜ ０．０５）,这些显著增加的脑区主要分布在控制系统和感觉运动系统。【结论】 海洛因成瘾患者的大脑结构网络的拓扑属性发生了显著改变。利用图论的方法可以便于我们探测海洛因成瘾所致的大脑结构网络变化,为探索成瘾所致的大脑连接的变化提供了一个有效的工具。