长春花毛状根再生植株的获得及抗癌生物碱的产生

目的建立长春花转基因毛状根再生植株快速繁育体系,获得生物碱量提高的长春花再生植株。方法研究外源植物生长调节剂对长春花毛状根愈伤组织诱导、不定芽分化、不定根分化和再生植株移栽的影响,采用HPLC法测定长春花再生植株生物碱量,并采用定量PCR技术分析目的基因的表达情况。结果转基因长春花毛状根愈伤组织诱导和不定芽诱导的最佳培养基均是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,不定根分化的最适培养基是1/2 MS+NAA 0.3 mg/L。采用炼苗的改进方法可使长春花再生植株的移栽成活率达90%。HPLC分析结果表明,长春花再生植株中长春碱、长春新碱和阿吗碱量分别比对照提高4.0、5.8、1.8倍,其中,优良单株OG30-3的长春新碱和长春碱量比对照提高7倍和10倍。定量PCR分析结果表明,转基因植株orca3基因和g10h基因的表达量比非转基因植株的高。结论转基因长春花毛状根再生植株可促进抗癌生物碱的产生。     

长春花毛状根再生植株的获得及抗癌生物碱的产生

目的 建立长春花转基因毛状根再生植株快速繁育体系,获得生物碱量提高的长春花再生植株。方法 研究外源植物生长调节剂对长春花毛状根愈伤组织诱导、不定芽分化、不定根分化和再生植株移栽的影响,采用HPLC法测定长春花再生植株生物碱量,并采用定量PCR技术分析目的基因的表达情况。结果 转基因长春花毛状根愈伤组织诱导和不定芽诱导的最佳培养基均是MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.3 mg/L,不定根分化的最适培养基是1/2 MS＋NAA 0.3 mg/L。采用炼苗的改进方法可使长春花再生植株的移栽成活率达90%。HPLC分析结果表明,长春花再生植株中长春碱、长春新碱和阿吗碱量分别比对照提高4.0、5.8、1.8倍,其中,优良单株OG30-3的长春新碱和长春碱量比对照提高7倍和10倍。定量PCR分析结果表明,转基因植株orca3基因和g10h基因的表达量比非转基因植株的高。结论 转基因长春花毛状根再生植株可促进抗癌生物碱的产生。     

共转orca3/g10h双基因长春花毛状根生物碱量及转录差异研究

目的共转orca3/g10h双基因于长春花毛状根,提高抗癌生物碱量。方法通过构建p CAMBIA1304++orca3+g10h表达载体,利用发根农杆菌介导获得双转orca3/g10h基因长春花毛状根。利用RT-q PCR研究共转orca3/g10h基因长春花毛状根萜类吲哚生物碱(TIAs)生物合成途径中相关基因的转录差异。采用HPLC研究共转orca3/g10h基因长春花毛状根TIAs(包括长春碱、长春新碱和阿吗碱)量。结果转基因长春花毛状根中与TIAs生物合成相关基因asα、ggpps、g10h、str、tdc、cpr、sgd和dat转录水平均较非转基因长春花普通根高。HPLC结果表明,转基因长春花毛状根总TIAs量达到58.23 mg/g,是非转基因长春花普通根的27.5倍。长春碱和长春新碱的平均质量分数均较非转基因普通根高。其中,长春碱平均质量分数最高,为51.30 mg/g,是非转基因普通根的197.3倍。结论共转orca3/g10h基因能够有效提高长春花毛状根中TIAs量。     

海洋天然产物对抗阿尔茨海默症的研究进展

阿尔茨海默症（AD）是老年人群发病率最高的神经退行性疾病,在老龄人口日益增多的现代社会引发严重经济和社会问题。但目前尚无治疗AD特效药物,现有药物仅能减轻AD症状,无法对因治疗。海洋生物数量庞大,能产生大量结构独特的天然产物,部分化合物具有神经保护作用,可能用于AD治疗。尤其是藻类来源的甘露寡糖二酸GV971已完成抗AD临床III期实验,是近十年最接近成功的抗AD药物,这一海洋来源的“中国新药”可能为全球AD患者提供新的希望。本文分类综述了从不同海洋生物,包括动物、植物及其他生物中提取的具有抗AD潜力的海洋天然产物的作用机理,以期为抗AD海洋天然药物开发提供参考。     

银杏内酯的生物合成途径及生物技术研究进展

银杏内酯因其特殊的血小板活化因子拮抗作用成为当今天然产物研究的热点。综述了银杏内酯的合成部位、生物合成途径及途径上已知的酶和基因;利用银杏愈伤组织和细胞悬浮培养生产银杏内酯的方法;前体饲喂提高银杏内酯产量和通过银杏遗传转化获取高产量银杏内酯的优质药源等相关研究。最后提出代谢工程策略是可能解决银杏内酯药源缺乏的理想途径。     

银杏内酯的生物合成途径及生物技术研究进展

银杏内酯因其特殊的血小板活化因子拮抗作用成为当今天然产物研究的热点。综述了银杏内酯的合成部位、生物合成途径及途径上已知的酶和基因;利用银杏愈伤组织和细胞悬浮培养生产银杏内酯的方法;前体饲喂提高银杏内酯产量和通过银杏遗传转化获取高产量银杏内酯的优质药源等相关研究。最后提出代谢工程策略是可能解决银杏内酯药源缺乏的理想途径。     

三叶崖爬藤查耳酮异构酶基因克隆与外源诱导表达及酶活性分析

目的 克隆三叶崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum查耳酮异构酶（chalcone isomerase,CHI）基因,探究CHI基因对三叶崖爬藤黄酮合成途径的调控作用。方法 分析三叶崖爬藤转录组,获得三叶崖爬藤CHI基因序列,并进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定三叶崖爬藤根、茎、块茎、老叶、幼叶及吲哚-3-乙酸（3-indoleacetic acid,IAA）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MeJA）、脱落酸（abscisic acid,ABA）、水杨酸（salicylic acid,SA）和酵母提取物（yeast extract,YE）等诱导条件下CHI基因的表达量,利用分光光度法测定黄酮含量和CHI酶活性变化,并对其进行相关性分析。结果 转录组数据分析结果表明,三叶崖爬藤CHI基因全长为1 096 bp(GenBank序号：OQ588006),含有1个长为714 bp的开放阅读框,编码237个氨基酸。三叶崖爬藤CHI蛋白分子式为C1148H1819N285O348S5,等电点（PI）为5.28,相对分子质量为25 340,...     

三角褐指藻岩藻黄素合成关键酶PtHMGR基因的克隆与诱导表达调控研究

目的 研究茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)、硫酸铈铵(ammonium cerous sulfate, ACS)、花生四烯酸(arachidonic acid, AA)、光和促进剂(photosynthetic induction factor, PIF)、光合抑制剂[3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea, DCMU]和不同光质对三角褐指藻3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutarate monoacyl-CoA reductase, HMGR)基因PtHMGR表达的影响，研究不同外源因素处理下PtHMGR基因表达与岩藻黄素含量之间的关系。方法 通过转录组测序获得PtHMGR基因cDNA序列，并对其进行生物信息学分析，有机溶剂提取法测定MeJA、ACS、AA、PIF、DCMU和不同光质处理下三角褐指藻岩藻黄素含量，荧光定量多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测PtHMGR基因表达。结果 PtHMGR基因全长2 161 bp,其O...