通脉灵片中亚油酸钙的鉴别

通脉灵片中亚油酸钙的鉴别马忠辉，胡淑英，于洲（河北省药检所，石家庄０５００１１；华北制药厂，石家庄０５００１５）ＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＬＩＮＯＬＥＩＣＣＡＬＣＩＵＭＩＮＴＯＮＧＭＡＩＬＮＧＴＡＢＬＥＴＳ￥ＭＡＺｈｏｎｇ－Ｈｕｉ；ＨＵＳｈｕ－...     

人GDNF-TAT真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达

目的：在毕赤酵母中表达带有TAT多肽的人胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotro-phic factor,GDNF）,为探讨GDNF-TAT用于帕金森病的治疗奠定基础。方法：用密码子优化法合成人GDNF基因序列连在pPICZαA,用PCR方法分别在上游引入TAT位点与XbaⅠ酶切位点,下游设计扩增pPICZαA上的α-因子序列。然后插入pPICZαA载体中,转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,对其进行PCR和双酶切并测序鉴定,构建GDNF-TAT在毕赤酵母表达质粒pPICZαA-GDNF-TAT。电击转化毕赤酵母GS115,对阳性克隆进行诱导表达后经SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白。结果：双酶切pPICZαA-GDNF-TAT后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为3.1kb和432bp片段,表明目的片段已插入载体中,经序列测定其含有完整的GDNF-TAT基因片段,Western印迹结果显示含有pPICZαA-GDNF-TAT的毕赤酵母GS115能分泌表达GDNF-TAT。结论：成功构建了毕赤酵母表达载体pPICZαA-GDNF-TAT,并能在毕赤酵母GS115中分泌表达GDNF-TAT。