电鳐乙酰胆碱酯酶单链抗体基因的克隆及表达(英文)

目的　欲用计算机模拟及分子对接技术揭示抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体 3F3抑酶的分子基础 ,但 3F3分子远大于乙酰胆碱酯酶 (AChE) ,难以操作 ,故拟用其单链抗体为工具进行研究。本研究旨在设计、克隆并表达抗AChE单链抗体Sc3F3基因 ,推演重组单链抗体的氨基酸顺序 ,并证明纯化的重组单链抗体有抑制AChE的作用。方法　使用分泌抗电鳐AChE单克隆抗体 3F3(3F3Ab)的杂交瘤细胞提取总RNA。用RT PCR技术扩增重链可变区 (VH)cDNA及轻链可变区 (VL)cDNA基因 ,通过连接肽(Gly4 Ser) 3 基因将VH 基因和VL 基因连接 ,制成单链抗体基因 (ScFv)。将ScFv基因插入载体pCANTAB 5E用于表达。在大肠杆菌中表达的 3F3单链抗体(Sc3F3)用SephadexG75凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换层析纯化。AChE与抗体的免疫反应性用ELISA法测定。AChE活性用微量羟胺比色法测定。结果　测序结果证明所克隆的ScFv基因是功能重排基因 ,长度为 72 3bp。重、轻链基因长度分别为 35 7bp和 32 1bp。ScFv基因 (含连接肽基因 )所编码的纯化的重组Sc3F3的分子量为 31.6ku。Sc3F3与AChE反应良好 ,但对AChE活性的抑制明显弱于 3F3Ab。Sc3F3的抑制效力约为 3F3Ab的 1/10。结论　在计算机模拟及分子对接研究中使用本研究设计的单链抗体Sc3F3应是可靠的     

上颌中切牙三维有限元模型的CT扫描建模

目的 研究在计算机上建立上颌中切牙的三维有限元数学模型.方法 利用牙齿的系列薄层CT截面影像、图像处理软件、计算机辅助设计软件、结合Ansys三维有限元专用软件程序,建立三维有限元模型.结果 建立了上颌中切牙的三维有限元模型.结论 探索了一种新的牙齿三维有限元模型建立的方法;建立的牙齿三维有限元模型具有高度的相似性.     

电鳐电器官膜上的高特异性、低亲和力TCP结合部位

本研究对电鳐电器官中的膜受体与神经性毒剂和重活化剂间的作用进行了探讨。发现在电鳐电器官中有一个高特异性、低亲和力的 2 -噻吩基 -哌啶基 -1,1-环己烷 ( TCP)结合位点 ,这个结合位点具有可饱和性。 TCP和苯环利啶 ( PCP)为同类物 ,它们作用于 TCP/ PCP同一位点。 [3H] TCP结合的 Bmax=1.16pmol/ mg protein,KD=16.13nmol/ L。有机磷毒剂能竞争性地抑制标记化合物 [3H] TCP与 TCP结合位点的结合 ,终浓度 10 - 3mol/ L的 Vx,梭曼 ,沙林及塔崩分别可产生 81% ,48% ,41%及38%的抑制。而膦酰化乙酰胆碱脂酶的四种重活化剂 HI-6、LuH6 、2 -PAM及 TMB4也对 [3H] TCP与 TCP受体的结合产生5 3%、48%、30 %及 30 %的抑制