无创性延迟肢体缺血预适应对抗大鼠脑缺血再灌注损伤的内皮机制

目的:研究无创性延迟肢体缺血预适应(noninvasive delayed limb ischemic preconditioning,NDLIP)对脑缺血再灌注大鼠内皮细胞分泌功能的影响并探讨其作用机制。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌损伤(ischemia-reperfusion injury, I/R)组、早期脑缺血预适应(early cerebral ischemic preconditioning,ECIP)组和NDLIP组,建立大鼠脑缺血再灌注模型,实施1 h缺血/24 h再灌注,ECIP组于缺血前左侧颈总动脉行3次5 min缺血/5 min再灌注,NDLIP组于缺血前3 d每天左后肢实施3次5 min缺血/5 min再灌注。TTC染色法测定脑梗死面积,分别在缺血前及再灌注24 h后测定血清内皮素(endothelin, ET-1)、一氧化氮(nitric oxide, NO)的含量及组织纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator, t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor, PAI-1)的活力。结果:缺血前,与I/R组比较,ECIP组和NDLIP组血清NO浓度升高(P<0.05),ET-1/NO比值降低(P<0.05),再灌注后,与I/R组比较,ECIP组和NDLIP组梗死范围显著减小,血清ET-1降低(P<0.01),NO增加(P<0.01),ET-1/NO比值降低(P<0.05),t-PA活力升高(P<0.01),PAI-1活力降低(P<0.01)。结论:NDLIP可能是通过调整内皮细胞分泌收缩与舒张、促凝与抗凝物质的平衡,抵抗脑缺血再灌注损伤的作用,其保护程度与ECIP相当。     

BV6诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡定量蛋白组学研究

目的：通过定量蛋白组学技术探讨Smac类似物BV6影响人卵巢癌SKOV3细胞生长的可能机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各浓度梯度BV6干预SKOV3细胞48 h后的生长抑制率,计算抑制率为50%时的药物浓度为半数抑制浓度（IC50）,以0.05、0.1、0.2 μmol/L BV6进行后续实验;光镜下观察对照组与0.05 μmol/L BV6处理组48 h后的细胞形态变化,应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术结合液相串联质谱策略筛选差异蛋白并行生物信息分析;蛋白质印迹（Western blotting）检测对照组、不同浓度BV6处理组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表达。结果：BV6可以抑制SKOV3细胞的生长增殖,且呈剂量依赖性,多组间方差分析及任意组间两两比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。按公式计算BV6作用于SKOV3细胞48 h的IC50为0.40 μmol/L。基于发现错误率（FDR）＜1%,对照组与0.05 μmol/L BV6处理48 h组筛选到349个差异蛋白,其中251个蛋白表达上调、98个蛋白表达下调,经生物信息学分析显示差异蛋白与RNA转录、蛋白质翻译、细胞分裂增殖、凋亡信号调节及肿瘤血管生成密切相关。Western blotting结果显示高、中、低浓度BV6干预SKOV3细胞48 h后与对照组相比,Caspase-3蛋白表达增加,其中高BV6组的Caspase-3蛋白表达最高,组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论：BV6通过抑制RNA转录、蛋白质翻译进程、细胞分裂增殖及肿瘤血管生成,促进Caspase-3凋亡信号活化介导SKOV3细胞死亡。     

长期铅暴露对小鼠胸腺细胞亚群分化的影响

目的探讨铅暴露对小鼠胸腺细胞不同亚群的影响。方法将24只健康初断乳21日龄清洁级雄性KM小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低(200 mg/L)、中(400 mg/L)、高(800 mg/L)剂量乙酸铅染毒组,每组6只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒12周。采用流式细胞技术检测小鼠外周血和胸腺内不同T细胞亚群的百分率。结果与对照组比较,中、高剂量乙酸铅染毒组小鼠外周血和胸腺中αβT细胞百分率和CD4+T细胞百分率明显降低,γδT细胞百分率明显增加(P<0.05),各剂量乙酸铅染毒组小鼠αβT/γδT值和CD4/CD8比例均明显下降(P<0.05);中、高剂量乙酸铅染毒组小鼠外周血中CD8+T细胞明显增加(<0.05),CD4+T细胞百分率明显下降(P<0.05),而在胸腺中CD4+T细胞和CD8+T细胞百分率均明显减少(P<0.05)。且随着乙酸铅染毒剂量的升高,小鼠外周血和胸腺αβT细胞百分率、CD4+T细胞百分率、αβT/γδT值以及胸腺CD4/CD8值均呈现下降,而外周血和胸腺γδT细胞百分率以及外周血CD8+T细胞百分率均呈现上升趋势。结论长期铅暴露可导致小鼠胸腺细胞亚群异常导致免疫损伤。     

脂多糖对长期铅暴露小鼠致死率及外周血炎症因子的影响

目的探讨48 h半数致死量(LD50)脂多糖对长期铅暴露小鼠致死率及外周血炎症因子的影响。方法将100只健康初断乳21日龄清洁级雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为空白(蒸馏水)组、对照组和低(200 mg/L)、中(400mg/L)、高(800 mg/L)剂量乙酸铅+LPS(LD50,8.6 mg/kg)染毒组,每组20只。采用自由饮水方式进行铅染毒,连续染毒12周;再一次性腹腔注射染毒LPS,染毒容量为2.5 ml/kg,空白组注射等体积的生理盐水。统计48 h的死亡数并计算死亡率;检测外周血白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)及高迁移率组蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)的浓度。结果与对照组比较,400、800mg/L乙酸铅+LPS染毒组小鼠48 h死亡率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着乙酸铅染毒剂量的升高,小鼠48 h死亡率呈上升趋势。与对照组比较,各剂量乙酸铅+LPS染毒组小鼠血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均下降,而HMGB1水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着乙酸铅染毒剂量的升高,小鼠血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平呈下降趋势,HMGB1水平呈上升趋势。结论长期铅暴露可导致小鼠的抗感染能力下降。     

坐骨神经伴梨状肌变异及第2骶神经异常分支1例

在制作1男性标本时,见其右侧坐骨神经伴梨状肌变异及臀上动脉、臀下神经穿梨状肌位置异常及第2骶神经异常分支,此种变异较为少见,为积累国人解剖学数值,现报道如下. 此标本梨状肌为三肌腹两肌腱型:肌束Ⅰ起自骶结节韧带的盆面,长8.38 cm,肌束Ⅱ起自骶骨前面,长 9.96 cm,肌束Ⅲ起自髂骨臀面,长8.60 cm,梨状肌最宽处为5.28 cm;肌束Ⅰ的肌腱为一扁腱,肌束Ⅱ、Ⅲ在末端汇合成一圆形肌腱,两肌腱共同止于股骨大转子上缘后部.坐骨神经在盆腔内即分为胫神经(直径8.84mm)和腓总神经(直径6.80 mm),胫神经从梨状肌下孔穿出,腓总神经从梨状肌上孔穿出,二者向下走行未见汇合.据潘铭紫[1]的分型法,此种变异率为2.20％.     

长期铅暴露对小鼠胸腺细胞移行相关趋化性细胞因子受体的影响

目的探讨铅暴露对小鼠胸腺细胞胸腺内迁移相关趋化性细胞因子受体的影响。方法将48只健康初断乳21日龄清洁级SD小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低(200 mg/L)、中(400 mg/L)、高(800 mg/L)剂量乙酸铅染毒组,每组12只,雌雄各半。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒12周。染毒结束后,采用石墨炉原子吸收法检测血清、胸腺中的铅含量,采用流式细胞技术检测小鼠胸腺细胞趋化因子受体CXCR4、CCR5、CCR9的表达。结果与对照组比较,各剂量乙酸铅染毒组小鼠血清、胸腺铅含量以及小鼠胸腺细胞膜分子CXCR4、CCR5、CCR9的表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着乙酸铅染毒剂量的升高,小鼠血清、胸腺铅含量以及小鼠胸腺细胞膜分子CXCR4、CCR5、CCR9的表达呈上升趋势。结论趋化性细胞因子受体参与长期铅暴露小鼠胸腺的免疫损伤。     

无创性延迟肢体缺血预适应促进mitoKATP开放减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的:探讨无创性延迟肢体缺血预适应(noninvasive delayed limb ischemic preconditioning,NDLIP)促进线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_ATP)开放,发挥脑缺血/再灌注(I/R)损伤神经保护作用的相关机制。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为Sham组、I/R组、NDLIP组和NDLIP+5-HD组,每组12只。缺血1h/再灌注24h后进行神经行为评分,TTC染色法测量脑梗死面积。提取缺血皮层线粒体,检测线粒体膜电位和呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ及Ⅳ的活性。Western blot法检测缺血大脑皮层中Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达。结果:与I/R组相比,NDLIP组神经行为评分明显降低,脑梗死面积明显缩小,NDLIP可对抗脑缺血I/R损伤,发挥神经保护作用。NDLIP组缺血皮层线粒体膜电位的降低幅度较小,线粒体复合体活性明显提高,Bax/Bcl-2比值与Caspase 3蛋白的表达均显著降低,NDLIP可改善I/R后脑组织线粒体功能,抑制I/R后线粒体相关凋亡通路。mitoK_ATP抑制剂5-HD可减弱甚至抵消以上保护作用。结论:NDLIP可能通过促进mitoK_ATP开放而减轻大鼠脑I/R损伤。     

内皮细胞在感染性休克炎症性细胞因子释放中的作用

目的 以感染性休克患者血清刺激人原代内皮细胞(HPAEC)和外周血单个核细胞(PBMC),观察内皮细胞在感染性休克细胞因子释放中的作用.方法 采用密度梯度离心法分离健康人PBMC;RT-PCR及免疫印迹检测HPAEC细胞表面标志CD144和血管假性血友病因子(von Will-ebrand factor,vWF)的表达;ELISA检测感染性休克患者和健康对照者血清中的IL-6、TNF-α、MCP-1的水平;两种血清及LPS刺激HPAEC和PBMC后,ELISA检测培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1的水平;流式细胞技术检测休克患者血清和LPS刺激后HPAEC膜表面ICAM-1的表达;S1P1受体激动剂CYM-5442预处理后,休克血清刺激HPAEC培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1的水平.结果 HPAEC表达内皮细胞标志性分子CD144和vWF;感染性休克患者血清中炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1水平明显高于健康对照(P＜0.01);休克血清和LPS处理PBMC和HPAEC后,相对于对照组,均有明显升高(P＜0.01);PBMC的休克组炎症因子与PBMC的LPS组均无明显差异(P＞0.05),而HPAEC的休克组炎症因子相对于HPAEC的LPS组均明显升高(P＜0.01);同样地,LPS刺激两种细胞后,HPAEC的IL-6、TNF-α明显低于PBMC(P＜0.01),MCP-1的水平无明显变化(P＞0.05),但是休克血清刺激后,HPAEC的IL-6、TNF-α与PBMC无明显变化(P＞0.05),MCP-1则明显升高(P＜0.01);休克患者血清刺激S1P1受体特异性激动剂CYM-5442预处理的HPAEC后,培养上清中炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1水平明显降低(P＜0.01).结论 内皮细胞在感染性休克细胞因子释放中起着关键作用.     

云南省2009~2013年流感哨点医院监测结果分析

目的探讨2009-2013年云南省流感的流行特征, 为制定流感防制策略提供科学依据.方法 应用EXCEL软件整理数据,GEODA软件及EXCEL软件对数据进行描述性分析,对2009-2013年云南省流感哨点医院监测的流感样病例(illness like influenza,ILI)监测资料,病毒分离鉴定结果,暴发疫情信息进行分析.结果2009-2013年云南省监测到的流感样病例呈上升趋势,到2013年出现高峰.秋冬季为流感病例高发期.近五年内,保山,怒江和红河的ILI%相对较高.2009年-2013年,全省各哨点医院共采集流感样病例标本49139份,分离出流感毒株1648株,毒株分离率为3.35%,其中优势株为B型Victoria系(527株,31.98%),其次为甲型HlN1亚型(429株,26.03%),B型 Yamagata系(352株,21.36%),A型季节性H3N2亚型(295株,17.90%)和A型季节性H1N1亚型 (45株,3.07%). 结论学龄儿童,青少年及年轻人是流感高发人群,加强学校流感监测和报告是有效控制疫情的关键.