免疫抑制小鼠内毒素血症时免疫细胞功能紊乱的实验观察

目的:本研究在建立免疫抑制小鼠内毒素血症模型的基础上,观察机体免疫紊乱状态。方法:选取Blbc/c小鼠,连续3d腹腔内注射甲基强的松龙30mg/kg,建立免疫抑制小鼠模型,3d后静脉注射10mg/kg剂量内毒素,于2,6h时点取血浆,分别采用化学比色法检测一氧化氮(NO)、TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-18等细胞因子水平,以反映TH1、TH2以及巨噬细胞等免疫细胞的功能与状态。在此基础上,50只小鼠分为免疫抑制内毒素血症模型组(模型组)以及甲基强的松龙对照组(激素组)与空白对照组。此外,还观察其肺部病理学改变。结果:在激素组,与正常组小鼠比较,各时点的血浆NO变化不大,TNF-α有降低的趋势,而IL-18则明显降低;INF-γ、IL-2的水平降低明显,IL-4、IL-10的水平则处于正常水平,其中IL-10还稍有升高趋势。在内毒素组的各时点,与正常组比较,模型小鼠肺组织有出血、水肿和炎细胞浸润等急性肺损伤等病理改变,而且INF-γ、IL-2水平明显降低,IL-4水平有升高趋势,IL-10水平升高明显;此外,在注射LPS后2h时点,NO与TNF-α水平明显升高,在注射LPS后6h时点,而NO、TNF-α以及IL-18水平均显著升高。结论:免疫抑制内毒素血症模型小鼠的TH1细胞功能低下,而TH2细胞与巨噬细胞处于活化状态,机体炎症反应则类似MARS的特点。     

脾脏提取DNA与人类白细胞抗原配型实验方法

背景：人类白细胞抗原配型结果报告准确与否,直接影响供受者之间的配对选择,而配型样本的好坏则影响结果的优劣。目的：建立脾脏提取DNA进行人类白细胞抗原配型实验的实验技术平台。方法：通过从脾脏分离淋巴细胞提取DNA进行人类白细胞抗原配型实验,并同正常的和严重溶血的外周血提取DNA进行人类白细胞抗原配型的实验进行比较。结果与结论：通过脾脏和正常外周血提取的DNA经扩增、电泳后均获得了完整的DNA电泳图,脾脏比正常外周血的电泳图更清晰,而严重溶血的标本未能获得清晰完整的DNA电泳图。实验成功建立了脾脏提取DNA进行人类白细胞抗原配型实验的实验技术平台。     

脑死亡供体肺脏病理改变及临床移植应用前景探讨

目的观察脑死亡供体肺病理改变,探讨临床移植应用的可行性。方法对23例脑死亡供体肺进行了病理活检,HE染色、网状纤维染色及PASM染色观察肺脏组织变化,电镜观察超微结构变化。结果气管、支气管及肺泡结构尚完整,仅见局灶肺泡上皮细胞及支气管纤毛上皮细胞脱落,未见肺透明膜形成;肺泡间隔未见明显增宽、血管充血易见,血管内皮细胞未见明显改变,未见纤维化表现。电镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞胞质轻微水肿,但结构尚完整;内质网扩张,基底膜未见明显改变。结论严格限定纳入标准,脑死亡供肺可以实施移植。     

急性移植物抗宿主病细胞因子基因多态性与环孢素A血药浓度的相关性研究

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）中急性移植物抗宿主病细胞因子基因多态性与环孢素A的关系。方法：选取2014年1月至2015年12月行allo-HSCT受者32例作为研究对象,采用聚合酶链式反应（PCR）联合基因测序法检测目的基因特殊SNP位点基因分型,测定术后早期出现aGVHD的重要时期CsA的血药浓度,观察受者术后出现aGVHD的情况,比较TGF-β1+869（C/T）不同基因分型CsA血药浓度的差异,分析TGF-β1+869（C/T）基因多态性与CsA的关系及对aGVHD的影响。结果：本组32例患者的TGF-β+869基因多态性研究结果为16例C/C基因型占50.00%,9例T/T基因型占28.12%,7例C/T基因型占21.88%;C/T型患者中的4例出现重度aGVHD占57.14%,发生率与C/C型、T/T型患者比较有显著性差异（P<0.01）。3种基因型患者的CsA血药谷浓度均能达到200~300 μg·L^-1的目标值,比较3种基因型患者的CsA血谷浓度,C/T型及T/T型患者均高于C/C型患者（P<0.01）。结论：本组患者发生重度aGVHD与CsA血药浓度无明显相关性,TGF-β1+869基因型为C/T杂合子的allo-HSCT受者预防GVHD应调整免疫抑制方案,加用霉酚酸酯或使用其它免疫抑制剂以减少重度aGVHD发生。     

舒肝安乐宁浸膏对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达和细胞外胶原沉积的影响

目的通过研究舒肝安乐宁浸膏对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织TGF-β1mRNA表达和细胞外胶原沉积的影响,探讨舒肝安乐宁复方抗肝纤维化作用机理。方法以皮下注射CCl4花生油溶液建立大鼠肝纤维化模型,观测舒肝安乐宁浸膏不同剂量组对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量以及肝组织TGF-β1mRNA表达的影响。结果舒肝安乐宁浸膏能抑制肝组织中COLⅠ和COLⅢ的含量和TGF-β1mRNA的表达。结论舒肝安乐宁浸膏对CCl4造成的实验性肝纤维化大鼠具有一定的抗肝纤维化作用,其机制与抑制胶原蛋白的形成以及抑制TGF-β1的基因表达有关。     

中药调节核因子-κB信号转导通路的研究进展

就中药调节核因子-κB的最新研究进展进行了综述。核因子-κB(nuc lear factor-κB,NF-κB)不恰当的活化与炎症性疾病密切相关,如类风湿性关节炎、哮喘、感染性休克、肺纤维化、动脉粥样硬化等;同时由于NF-κB参与细胞的增殖与凋亡,越来越多的证据表明,人类一些恶性肿瘤如白血病、淋巴瘤等的发生也与NF-κB活性的失控有关。因此,以NF-κB为治疗靶点的药物研究可能为预防和治疗这些疾病提供新思路。近几年来关于中药调节NF-κB信号通路的研究备受科学界关注。     

胰岛分离纯化过程中细胞凋亡发生的分子基础与解析

目的观察移植前胰岛提取过程中胰岛细胞凋亡情况,以及细胞因子与氧化-抗氧化因素变化,以阐明胰岛细胞凋亡的分子生物学机制,为胰岛保护策略提供实验基础。方法选取15例人胰腺,进行胶原酶灌注、消化以及梯度离心分离胰岛,在此过程中取材,采用TUNEL法进行胰岛细胞凋亡检测,胰腺或胰岛组织中TNF-α、IL-8、IL-1等细胞因子采用ELISA法检测,而组织中SOD与MDA水平采用比色法检测,同时进行HE染色、双硫腙染色观察胰岛及胰岛细胞形态改变。结果在人胰腺灌注与消化过程,形态学观察发现胰岛周围组织疏松以及部分胰岛结构的损害,有TUNEL染色阳性凋亡细胞出现,伴随较高水平的TNF-α、IL-8、IL-1以及MDA出现,在灌注前、灌注后与消化中均显著高于胰岛分离后的水平。结论移植前胰岛提取过程中胶原酶灌注以及消化可引起胰岛细胞凋亡,可能与细胞因子与氧自由基水平升高有关,提示抑制细胞因子的释放与抗氧化可以作为胰岛保护策略切入点。     

脑死亡供体肺脏病理改变及临床移植应用前景探讨

目的观察脑死亡供体肺病理改变,探讨临床移植应用的可行性。方法对23例脑死亡供体肺进行了病理活检,HE染色、网状纤维染色及PASM染色观察肺脏组织变化,电镜观察超微结构变化。结果气管、支气管及肺泡结构尚完整,仅见局灶肺泡上皮细胞及支气管纤毛上皮细胞脱落,未见肺透明膜形成;肺泡间隔未见明显增宽、血管充血易见,血管内皮细胞未见明显改变,未见纤维化表现。电镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞胞质轻微水肿,但结构尚完整;内质网扩张,基底膜未见明显改变。结论严格限定纳入标准,脑死亡供肺可以实施移植。     

玉郎伞多糖对体外BALB/C小鼠淋巴细胞和巨噬细胞分泌细胞因子的影响

目的:探讨玉郎伞多糖（YLSPS）体外对BALB/C小鼠淋巴细胞、巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）及白细胞介素-2（IL-2）的影响及作用机制。方法:分离BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,分为空白对照组、LPS或ConA对照组和各浓度YLSPS组(50,100,200 mg·L^-1),MTT法检测脾淋巴细胞增殖,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的浓度,RT-PCR法检测TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2 mRNA的表达。结果:各浓度YLSPS组能剂量依赖性地促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞增殖和TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的分泌,显著增强这些细胞因子的mRNA的表达（P<0.01或P<0.05）。结论:YLSPS体外能促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-6,其作用机制可能与上调上述细胞因子mRNA表达有关。