日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定

目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位，候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸，定向克隆入融合表达载体pET-32c( )，经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达，表达产物以Ni^2 -NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H／HeJ及C57BL／6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞，^3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖，P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。     

我国医学寄生虫学教育应走"土洋结合"之路

文章从我国与发达国家寄生虫感染与医学寄生虫学教育的特点出发,分析了我国医学寄生虫学教育面临的问题,探讨性地提出为了更好地适应我国国情、满足我国新时期培养医学生的需要,进行医学寄生虫学教育改革的几点建议.     

用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位

目的：筛选和鉴定重组的日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白rSj38的表位。方法：用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG，将抗体进一步纯化，获得抗rSj338单特异多克隆抗体IgG。用纯化抗rSj338抗体对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选，挑取克隆。采用Western blot免疫识别，核苷酸序列测定分析其获得的表位并与rSj338/26GST进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠，并采用Western blot及dot-ELISA方法筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗rSj338抗体的阳性克隆，并将阳性噬菌体免疫的小鼠血清对纯化的rSj338/26GST,26GST，日本血吸虫成虫及虫卵抗原进行Western blot识别。结果：经5轮免疫学筛选后挑取的32个克隆，用Western blot方法30个克隆能被抗rSj338抗体识别，核苷酸序列分析发现共有11种表位，与rSj338无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选。共获得4个免疫原性较强的阳性克隆，其免疫鼠血清均可识别rSj338/26GST，日本血吸虫成虫及虫卵抗原。结论：获得了4种日本血吸虫中国大陆株线粒体相关蛋白rSj338的表位，均为模拟表位，这将为日本血吸虫病的疫苗研究开辟新的途径。     

人外周血CD4+CD25+调节性T细胞的分离、鉴定和功能特征

目的： 分离人外周血CD4＋ CD25＋ Treg细胞, 并检测其功能.方法： RT-PCR技术检测CD4＋ CD25＋ Treg细胞中Foxp3的mRNA表达;与CD8＋ T细胞和CD4＋ CD25- T细胞共同培养, 或加入外源性IL-2及IL- 4, 检测其抑制功能;流式细胞术检测IFN-γ、 IL- 4和IL-10.结果： CD4＋ CD25＋ Treg细胞高表达Foxp3, 主要分泌IL-10, 能够抑制CD8＋ T细胞和CD4＋ CD25- T细胞的增殖, 高浓度IL-2能够阻断CD4＋ CD25＋ Treg细胞的抑制功能.结论： CD4＋ CD25＋ Treg细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞, 这种抑制作用能够被高浓度IL-2阻断.     

日本血吸虫病人群同种型抗体应答的特征及其流行病学意义

80年代中期以来,世界防治血吸虫病的中心措施已由控制中间宿主(灭螺)过渡为实施化疗,但影响人群化疗、限制和控制传播效果的主要因素是化疗后发生再感染。在日本血吸虫病,化疗后的再感染率很高。从防治决策的角度,研究可能指示人群易感状态的血清学指标具有重要的重论和实际意义,为构建预测性诊断试验,以指示人群感染和/或免疫状态提供理论依据。     

日本血吸虫22.6kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的大量获得纯化的日本血吸虫22.6kDa重组抗原.方法用PCR方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒pGEx-1λT进行表达.结果得到了融合表达的蛋白抗原.此融合蛋白表达量大,用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组22.6kDa抗原.结论以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验,表明Sj22.6/Sj26GST融合重组蛋白具有与Sj22.6蛋白一样的免疫学活性.     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6ku抗原编码基因的核酸疫苗pCMV／S …

目的 探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋｕ抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因作核酸疫苗的可行性。方法 用新设计的引物以ＰＣＲ法对Ｓｊ２２．６编码基因进行改造,然后亚克隆入真核表达载体ｐＣＭＶ－β并转入大肠杆菌ＪＭ１０９。结果 提前重组质粒经酶切分析,筛选出了含有正向插入片段的阳性重组质粒,结论 此阳性重组质粒可用于核酸疫苗等进一步研究。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

典型国家农村基层卫生人员配置现状和政策研究

通过对典型国家农村卫技人员配置与相关政策特点的分析,结合当前我国农村卫生人力现状,分析农村卫生服务性质和农村卫生人力培养途径,对完善我国农村卫生人力配置和培养提出合理化建议和对策.