子宫腺肌病子宫内膜-肌层连接区超微结构研究

目的研究子宫腺肌病子宫内膜-肌层连接区超微结构的改变与子宫腺肌病发病的关系。方法透射电镜下观察子宫腺肌病组子宫内膜-肌层连接区(8例)和对照组子宫内膜-肌层连接区(8例)的超微结构。结果与对照组相比,子宫腺肌病组腺上皮细胞表面微绒毛密集,胞质内线粒体体积增大,功能活跃,未见细胞凋亡;平滑肌细胞排列紊乱,正常带结构扭曲,胞质内细胞器减少,线粒体空泡化;肥大细胞增多,胞质内充满大量电子密度高的颗粒,周围胶原纤维增多,与平滑肌细胞紧密相邻。结论子宫内膜-肌层连接区的结构改变与子宫腺肌病的发生有密切关系。     

自噬与肿瘤

自噬(autophagy)作为程序性细胞死亡的另一种形式近来备受关注,自噬具有独特的形态学改变和特有的调控通路,是正常细胞的功能,自噬异常与肿瘤的发生、发展有关,可从多个层面影响肿瘤的进程,包括细胞周期、凋亡相关因子、血管生成及肿瘤治疗等.凋亡与自噬之间既相互区别又密切联系.自噬不仅揭示了生物自身调控的复杂性和多样性,同时随着自噬与肿瘤之间关系的逐步建立,也为肿瘤基因治疗及克服肿瘤耐药性的研究提供了新的靶点.     

自噬基因Beclin 1在SKOV3细胞中的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达后自噬相关信号调控通路PI3K/PKB途径中ClassⅠPI3K（p110α）、p-PKB和ClassⅢPI3K（hvps34）的表达变化以及对肿瘤细胞的自噬活性的影响.方法将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞;分别用荧光定量RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测用流式细胞仪检测Beclin1、p110α、hvps34和p-PKB的表达;在电镜和荧光显微镜下观察自噬现象,用流式细胞仪检肿瘤细胞自噬情况.结果 pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞Beclin1表达在mRNA和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1和未转染细胞;PcDNA3.1/Beclin1转染后hvps34表达上调,而p110α、p-PKB的表达下调.PcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在在电镜下可见大量自噬囊泡形成.在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC阳性细胞明显增加.流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组.Beclin 1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%.结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可使ClassⅢPI3K（hvps34）表达上调,ClassⅠPI3K（p110α）及其下游的p-PKB表达下调,诱导肿瘤细胞自噬活性增加,抑制SKOV3在体外的增殖.     

自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV感染的关系

目的 探讨自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及对人乳头状瘤病毒(HPV)16 E6、E7感染的影响.方法 采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅱ-Ⅲ级和20例正常宫颈组织中自噬基因Beclin 1的表达,采用PCR扩增法检测宫颈鳞癌组织中HPV16E6、E7的DNA状况.结果 宫颈鳞癌组织中Beclin 1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43.2%(35/81),34.6%(28/81),22.2%(18/81),分别与正常宫颈组15.0%(3/20)、30.0%(6/20)、55.0%(11/20)和宫颈上皮内瘤样病变组20.0%(4/20)、30.0%(6/20)、50.0%(10/20)相比,Beclin 1在宫颈鳞癌中的表达存在显著下调(P=0.009,P=0.033).HPV16E6、E7在宫颈鳞癌中的阳性率分别为66.7%和58.0%,HPV16 E6、E7感染与宫颈鳞癌中Beclin 1蛋白的表达无相关性(r=-0.126,P=0.262;r=-0.125,P=0.270).结论 自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中表达下调,其表达对HPV16E6、E7感染无明显影响.     

子宫腺肌病中增殖细胞核抗原和Livin蛋白的表达及意义

目的探讨子宫腺肌病在位内膜和异位内膜组织中凋亡抑制基因Livin和增殖细胞核抗原(PC-NA)的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测30例子宫腺肌病患者的在位(腺肌病在位内膜组)和异位内膜(腺肌病异位内膜组)及25例正常子宫内膜组织(对照组)中PCNA和Livin蛋白的表达。结果 PCNA蛋白表达在子宫腺肌病在位内膜组低于异位内膜组,高于对照组,三者间差异有统计学意义(P<0.05);Livin蛋白在对照组和子宫腺肌病在位内膜组中无表达,在子宫腺肌病异位内膜组中表达显著(P<0.05)。结论子宫内膜细胞增殖能力增强,细胞凋亡减弱,与子宫腺肌病的发生、发展有关。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

自噬基因Beclin1抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的:研究自噬基因Beclin1对裸鼠宫颈癌细胞株HeLa移植瘤的抑制作用。方法:将自噬基因Beclin1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblot检测其mRNA及蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长抑制率;将HeLa细胞接种于裸鼠右前肢腋下建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分别以重组质粒pcDNA3.1(+)-Bec-lin1、pcDNA3.1(+)和生理盐水200μl每两天1次直接瘤内注射,连用3周后,测量3组肿瘤大小并观察肿瘤组织形态学改变。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1能使HeLa中Bec-lin1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),并显著抑制HeLa细胞的生长,呈现时间依赖性,与其余两组相比,有显著统计学差异(P<0.05);经重组质粒治疗21天后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相对于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.05),病理检查可见,pcD-NA3.1(+)-Beclin1处理组瘤块内细胞坏死减少,结缔组织增生,而对照组中癌细胞分布呈弥漫性。结论:自噬基因Beclin1可以抑制HeLa移植瘤的生长。     

前哨淋巴结与宫颈癌

前哨淋巴结是原发肿瘤区域淋巴引流的第一站,是最早发生肿瘤转移的部位。前哨淋巴结定位有染料法、核素法、联合法3种方法,对前哨淋巴结进行病理连续切片和免疫组织化学染色提高了微小转移灶的检出率,进而能有效判断淋巴结的转移情况。前哨淋巴结在宫颈癌的应用尚处在起步阶段。     

卵巢巨大平滑肌瘤合并胸腹水1例

1 病例报告 患者52岁,绝经1+年,G4P3.因发现下腹包块7+个月伴腹胀1+个月,于2006年5月23日入院.7个月前患者平卧时偶可扪及下腹部包块,未予重视.1+个月前感少量进食即腹胀明显,遂来我院医治.妇科检查:宫颈9点处可见陈旧性裂伤,子宫前位,大小正常,子宫左后方扪及一20cm×16cm×9cm包块,边界清楚,质硬,表面光滑,无压痛,活动好,右附件扪不清.     

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用

目的 构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用.方法 根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响.MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低.结论 成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡.