人canstatin cDNA分泌型真核表达载体的表达及生物学作用研究

目的将人canstatin cDNA分泌型真核表达载体pSecTag2B/canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株。再进一步研究表达产物的生物学作用。方法将人canstatin cDNA的重组1质粒pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞,应用RT-PCR、western-blotting法检测表达产物,再用多种方法进一步研究canstatin的生物学作用。结果成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并鉴定出上清液中有目的蛋白的表达。该细胞培养上清液能抑制鸡胚绒毛尿囊膜中微血管的生成,抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)的生长并诱导其凋亡。结论①成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并获得能稳定表达can-statin蛋白产物的细胞株;②证实含canstatin蛋白产物的细胞培养上清液具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的活性并可在体外抑制HUVEC-12的生长和诱导其凋亡。     

重组血管基膜衍生多功能肽对内皮细胞信号蛋白磷酸化水平的影响

目的:研究重组血管基膜衍生多功能肽(rVMBDMP)对人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)信号蛋白磷酸化水平的影响。方法:体外培养HUVE-12细胞,C57/BL6小鼠皮下基质胶填塞法观察HUVE-12细胞体内管状结构形成;高通量蛋白磷酸化芯片研究rVBMDMP对HUVE-12细胞信号蛋白磷酸化水平改变。结果:C57/BL6小鼠皮下基质胶填塞法证实:rVBMDMP(1.0,10.0μmol/L)能有效抑制血管内皮生长因子激活的内皮细胞体内管状结构形成。蛋白磷酸化芯片检测结果显示:rVBM-DMP(1.0μmol/L)处理HUVE-12细胞后,死亡信号蛋白(caspase-3,death receptor 3,4,5)和整合素亚单位(integrinαv,β1,β3)磷酸化蛋白较对照组增高2倍以上,而EGFR,pEGFR,VEGFR-1和Survivin磷酸化蛋白较对照组降低50%以下。结论:rVBMDMP可能通过抑制血管内皮生长因子激活的内皮细胞生长和诱导凋亡发挥抗血管生成效应。     

TCRP1在口腔鳞癌中介导顺铂耐药的体内实验研究

目的 TCRP1是新近从舌癌耐药细胞系Tca8113/PYM中克隆出来的一个新基因,前期体外实验研究表明TCRP1在口腔鳞癌细胞中能特异地介导对顺铂化疗耐受,本研究将进一步探讨TCRP1在体内实验中介导化疗耐受的作用。方法通过建立TCRP1过/沉默表达裸鼠移植瘤模型,观测TCRP1对化疗药物5-Fu、cDDP的作用敏感性的影响并初步探讨其机制。结果肿瘤生长曲线及肿瘤瘤重结果显示TCRP1能增强裸鼠移植瘤对顺铂的耐药性,而对5-Fu则没有影响。TUNEL检测发现TCRP1高表达的组织中凋亡细胞计数更少。结论 TCRP1是一个新的耐药相关基因,其作用机制与通过增强口腔鳞癌细胞凋亡抗性有关。     

人胃癌细胞高转移亚系的初步筛选及母亚两系生物学特性的比较

目的 筛选高转移胃癌细胞亚系并与其母系进行生物学特性的比较.方法 利用transwell小室筛选高转移力胃癌细胞亚系,通过HE染色比较母亚两系细胞形态改变;流式细胞仪检测母亚两系细胞周期;免疫细胞化学法检测两系细胞中MMP-9蛋白表达;transwell侵袭小室模型比较母亚两系的迁移能力.结果 利用transwell小室从母系MKN-28中成功筛选出高转移力胃癌细胞亚系MKN-28S, 母亚两系细胞形态上无明显差异,亚系增殖指数(PI)高于母系,且亚系中 MMP-9蛋白表达同母系相比显著增高,显微镜下细胞计数示亚系迁移至膜背面的数量较母系明显增多 (P＜0.05),细胞运动能力明显增强.结论 MKN-28S细胞较MKN-28细胞具有更强增殖能力和更高迁移力.     

重组人canstatin真核载体的构建及鉴定

目的 构荧光蛋白和canstatin融合蛋白基因的真核表达载体pEGFP-N1／canstatin，以深化研究血管生成抑制剂canstatin的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性。方法 提取人胚肝总RNA，RT—PCR扩增canstatin基因片断，T—A克隆到pGEM—T中，从pGEM—T／canstatin克隆载体中，将人canstatin cDNA亚克隆入真核表达载体pEGFP-N1，构建含人canstatin cDNA的重组质粒pEGFP-N1／canstatin，通过酶切鉴定出重组体并测序分析。结果 成功构建pEGFP—N1／canstatin真核表达载体，双酶切及测序鉴定显示canstatin基因片断正确插入载体，与Genebank中报道的序列一致。结论 pEGFP—N1／canstatin真核载体的构建为进一步进行canstatin蛋白表达和活性研究以及canstatin用于基因治疗奠定了基础。     

超声对肿瘤性肠梗阻的临床诊断价值分析

目的 观察分析超声对肿瘤性肠梗阻的临床诊断方法,总结其临床应用价值.方法 选取我院2009年4月至2011年4月96例肿瘤性肠梗阻患者的临床病历资料进行回顾性分析,分别进行X线及超声检查,以手术病理检查结果作为金标准,观察X线与超声检查的结果,对比其与手术病理检查结果的相符率,进行统计学分析.结果 手术病理检查确诊为肠道恶性肿瘤87例,肠道良性肿瘤9例,在96例肿瘤性肠梗阻患者中,超声检查检出肠梗阻96例,检出率100%,提示有病变部位89例,检出率为92.7%,超声诊断为肠道恶性肿瘤83例,符合率89.7%,诊断为肠道良性肿瘤11例,符合率81.8%;X线检查检出肠梗阻96例,检出率100%,提示有病变部位84例,检出率为97.5%,X线诊断为肠道恶性肿瘤75例,符合率86.2%,诊断为肠道良性肿瘤9例,符合率100%.两组检查定位及定性结果存在显著差异(P<0.05),具有统计学意义.结论 超声对肿瘤性肠梗阻的定位及定性检查能为临床诊断并鉴别良、恶性肿瘤提供科学的影像资料,但X线对于对肿瘤性肠梗阻的表现特性有重要的临床诊断价值,因此,应实际结合两种检查手段,扬长避短,更好地鉴别诊断肿瘤性肠梗阻,为临床诊疗提供可靠的科学的依据.     

乳铁蛋白对胃癌细胞增殖的影响

目的:发现乳铁蛋白具有明显的抗肿瘤作用,观察乳铁蛋白对胃癌MGC-803细胞生长增殖的影响。方法:用不同浓度的重组人乳铁蛋白处理MGC-803细胞,通过MTS法观察乳铁蛋白对MGC-803细胞增殖的影响,计算细胞增殖抑制率。结果:乳铁蛋白能明显抑制MGC-803细胞的生长增殖,并且呈现剂量和时间依赖性。结论:乳铁蛋白能明显抑制MGC-803细胞的生长增殖。     

人类胃癌细胞高侵袭亚系的筛选及其生物学特性研究

目的采用Transwell小室筛选胃癌细胞高侵袭亚系并研究其生物学特性。方法利用Transwell小室筛选高侵袭力胃癌细胞亚系,通过HE染色、Western blotting、Transwell小室模型、免疫组织化学法及生长曲线研究亚系的生物学特性。结果利用Transwell小室反复筛选10次,从MKN-28细胞中筛选出高侵袭力胃癌细胞亚系MKN-28S10。母亚两系细胞形态上无明显差异,但亚系中E—cadherin和TIMP-1蛋白表达同母系相比显著降低（P〈0．05）,显微镜下细胞计数示亚系迁移至膜背面的数量（100．25±0．50／视野）较母系（61．75±2．06／视野）明显增多（P〈0．05）,细胞运动能力明显增强;免疫组织化学结果显示,亚系中NM23-H1的表达明显低于母系（P〈0．05）;亚系体外生长速度快于母系。结论MKN-28S10细胞较MKN-28细胞具有更高侵袭力和更强增生能力。     

CXCR4在肺癌组织芯片中的表达及其临床意义

目的检测趋化因子受体4(CXC chemokinereceptortype4,CXCR4)在各种肺癌组织及相应正常肺组织中的表达并分析其临床病理意义。方法应用组织芯片技术和免疫组化法检测110例肺癌组织和12例相应正常肺组织CXCR4蛋白的表达。结果 CXCR4蛋白主要表达于细胞膜和细胞浆,在相应正常肺组织、肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌中的阳性表达率依次升高,分别为8.3%(1/12)、87.1%(31/36)、65.2%(43/66)、100%(8/8),4组间差异有显著性(P<0.001);在高、中、低分化程度的肺腺癌和肺鳞癌组织中,CXCR4蛋白的阳性表达率分别为9.1%(1/11)、78.1%(50/64)、92.6%(25/27),3组间差异有显著性(P<0.001);CXCR4蛋白在有转移的肿瘤组织和无转移的肺癌组织中的阳性率分别为90.7%(68/75)和42.9%(15/35)。结论 CXCR4在部分肺癌组织中高表达,且与肺癌组织类型及肺癌组织侵袭转移能力密切相关。     

TCRP1通过PI3k-Akt途径介导口腔鳞癌顺铂化学治疗耐受

目的:研究新的耐药相关基因TCRP1在口腔鳞癌组织中的表达及其与顺铂临床疗效的关系,同时对TCRP1的作用机制进行初步探索。方法:采用免疫组织化学法检测TCRP1在舌癌组织中的表达及其与临床顺铂化学治疗疗效之间及体外药敏实验的相关性,Western印迹法及免疫共沉淀甄别TCRP1下游的作用分子。结果:在TCRP1低表达的患者中,缓解率达84.62%,而高表达患者组中缓解率为37.5%。体外药敏结果显示类似的结果。TCRP1表达改变影响Akt信号通路分子的表达,而且TCRP1与Akt存在物理上的相互结合。结论:TCRP1的表达影响口腔鳞癌的顺铂化学治疗疗效。TCRP1介导顺铂耐药的作用机制至少部分与TCRP1对Akt信号通路调节有关。