基于网络药理学方法研究枸杞子抗癌作用机制

目的:利用网络药理学的技术和方法探索中药枸杞子中发挥抗癌作用的活性成分及其作用机制。方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库检索中药枸杞子中的化学成分和靶点,并用Cytoscape3. 7. 1软件建立"化合物-预测靶点"网络、抗癌靶点间的蛋白蛋白相互作用(PPI)网络、"活性成分-疾病靶点"网络和"活性成分-重要靶点-通路"网络,探究枸杞子的抗癌作用机制。结果:"化合物-预测靶点"网络包含30个化合物123个靶点。PPI网络中有77个靶点,度值排名前5的抗癌靶点有PIK3CA、ITGB1、EGFR、IL2和PIK3CD。"化合物-预测靶点"网络说明枸杞子中发挥抗癌作用的活性化合物有22个,可直接作用的抗癌靶点有6个。京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路共28条,涉及癌症通路、炎症通路和免疫通路等。结论:本研究初步验证了枸杞子的基本药理作用及其机制,并为进一步深入揭示其作用机制奠定了良好基础。     

10种抗精神病药物对多巴胺D2受体占有率的模拟分析

目的 模拟分析10种抗精神病药物氟哌啶醇（haloperidol）、舒必利（sulpiride）、美哌隆（melperone）、氯氮平（clozapine）、喹硫平（quetiapine）、利培酮（risperidone）、齐拉西酮（ziprasidone）、瑞莫必利（remoxipride）、氨磺必利（amisulpride）、雷氯必利（raclopride）口服给药后在人体内对多巴胺D₂受体（DRD₂）占有的时间过程。方法 通过对10种抗精神病药物的口服给药和静脉给药的药动学数据模拟计算获取建模的药动学（PK）参数;通过已发表的文献数据计算获取10种抗精神病药物的结合动力学（BK）参数和细胞内DRD₂受体合成动力学（TK）参数;基于获取的PK、BK、TK参数建立10种抗精神病药物的DRD₂受体占有率数学计算模型（PK-BK-TK模型）。结果 已上市的9种（不包含雷氯必利）抗精神病药物在临床推荐剂量下对DRD₂的最大受体占有率均在65%以上,预测的DRD₂受体占有率曲线与其临床药效持续时间有良好的一致性;雷氯必利的合理给药剂量为2mg。结论 利用PK-BK-TK数学模型能准确预测抗精神病药物口服后在人体内对DRD₂受体的占有过程。该模型可为评估化合物在体内拮抗DRD₂受体的活性与潜在毒性提供一种新的研究思路和方法。     

基于大鼠体内序贯代谢的白芍质控成分遴选研究

目的 基于序贯代谢的研究思路,研究白芍Paeoniae Radix Alba多种成分在体内的代谢情况,遴选白芍潜在质控成分。方法 制备白芍水提物,通过在体动物实验的方法,收集白芍的肠代谢、肝代谢以及综合代谢样品,结合超高效液相色谱-四级杆/静电场高分辨质谱联用技术（UPLC-Q-Exacitve MS）,对各个样品所含成分进行分析与鉴别。结果 白芍水提物中共鉴定出36个化学成分。序贯代谢结果显示,共有17个原型入血成分,其中有14个成分在经肠代谢样品中检测到,有8个成分先经肠代谢、再经肝代谢后可检测到,有11个成分在经ig给药的综合代谢样品中检测到;羟基芍药苷、芍药苷、芍药内酯苷、环五（异）亮氨酸、环六（异）亮氨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸这7个成分在3种代谢部位均可以检测到。结论 共遴选出没食子酸、芍药内酯苷等17个经代谢后仍原型入血的成分,可作为日后白芍质控成分。     

黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶靶点占有率的模拟分析

目的 模拟分析黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶体内靶点占有率。方法 通过体外酶促反应测定非布司他、黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度（IC₅₀）,利用分子对接技术对其结合自由能进行预测,同时,采用表面等离子共振技术测定其结合速率常数（k_on）和解离速率常数（k_off）。基于测定的结合动力学参数和提取的药物代谢动力学数据建立体内靶点占有率模型。结果 非布司他、黄芩素、槲皮素、 高良姜素对黄嘌呤氧化酶的IC₅₀分别为0.002 7,1.63,0.38,1.59 μmol·L^-1,非布司他的IC₅₀与文献报道一致。预测的非布司他体内靶点占有率曲线与其临床药效持续时间相吻合。当大鼠按100 mg·kg^-1单次灌胃给予槲皮素长循环脂质体时,体内靶点占有率>70%的持续时间约3.9 h;当大鼠按200 mg·kg^-1单次口服给予黄芩素和高良姜素时,体内靶点占有率>50%的持续时间分别约为10,1.7 h。结论 利用药靶结合动力学和体内药代动力学曲线建立的黄嘌呤氧化酶靶点占有率预测模型能有效地评估化合物对靶点的体内抑制活性。     

基于PBPK-TO模型预测CYP3A4调节剂对卡博替尼PK/PD的影响

目的 建立卡博替尼的生理药动学及其主要靶点的靶点占有率联用(PBPK-TO)模型,并预测CYP3A4的调节剂(抑制剂和诱导剂)对其PK/PD的影响。方法 通过运用公式和收集参数,建立卡博替尼的PBPK模型,利用文献实测值进行验证,并联合主要靶点的结合、解离速率常数(k_on、k_off)搭建成PBPK-TO模型;通过结合CYP3A4竞争型抑制剂酮康唑、时间依赖抑制剂地拉韦啶和诱导剂利福平的PBPK模型,研究其对卡博替尼的PK/PD的影响。结果 成功建立了卡博替尼PBPK-TO模型;联合用药时,酮康唑、地拉韦啶和利福平对卡博替尼最大血药浓度(c_max)和激酶靶点的最大靶点占有率(TO_max)均无显著性影响;酮康唑能使卡博替尼血浆药物浓度-时间曲线下面积(AUC_0-t)增加34%,3个主要靶点的靶点占有率大于60%的持续时间(D_TO>60%)均增加30%以上;地拉韦啶能使卡博替尼AUC_0-t增加16%,3个主要靶点的D_{TO >60%}均增加20%以上;利福平能使卡博替尼AUC和靶点的D_{TO >60%}减少70%以上。此外,也研究了联合用药时临床合理的剂量调整方案,当单独使用卡博替尼60 mg作为治疗剂量时,与酮康唑联用剂量需要降低至40 mg;与地拉韦啶联用,不需要调整剂量;与利福平联用时,剂量需要增加到80 mg。结论 建立的PBPK-TO模型能较好地预测CYP3A4抑制剂、诱导剂对卡博替尼PK/PD的影响,为药物相互作用模型研究和临床使用剂量调整提供新思路。     

基于网络药理学探究香砂枳术丸治疗功能性消化不良的作用机制与实验验证

目的:借助网络药理学的研究思路,探寻香砂枳术丸（XSZZW）治疗功能性消化不良（FD）的作用机制,并使用动物实验进行验证。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中药分子机制生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)筛选活性成分和靶点,借助Perl语言与UniProt将靶点进行标准化;通过TTD、DrugBank、OMIM以及GeneCards数据库筛选FD相关靶点;利用Cytoscape构建“中药复方-活性成分-作用靶点”网络;使用STRING数据库分别构建活性成分和疾病相关靶点蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络并导入Cytoscape软件,以度值、接近中心性和介度中心性为条件筛选核心靶点;将核心靶点映射到DAVID数据库,进行基因本体（GO）富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。最后,使用分子对接和动物实验进行结果验证。结果:获得活性成分75个以及靶点292个,FD相关的疾病靶点666个,经筛选最终获得核心靶点90个;GO富集分析主要在同源蛋白结合、酶结合、蛋白结合等生物学调控方面;KEGG富集分析得到信号通路103条,主要涉及癌症、细胞凋亡、炎症通路等方面。结论:香砂枳术丸可通过调控PI3K-AKT、FoxO、核因子κB、神经营养因子信号通路来预防或治疗FD。     

基于多成分药物代谢的枸杞子质控成分遴选研究

目的:基于多成分序贯代谢的研究策略，探讨枸杞子在体内的代谢成分，遴选枸杞子的质控成分。方法:制备枸杞子水提液后，运用在体双向肠灌流技术和灌胃采血技术收集其肠代谢、肝代谢及综合代谢样品，结合超高效液相色谱-四级杆/静电场高分辨质谱联用技术（UPLC-Q-Exactive MS），对枸杞子水提物、肠代谢样品、肝代谢样品及综合代谢样品中的成分进行鉴别，遴选枸杞子的质控成分。结果:枸杞子提取物经LC-MS分析，共鉴定出36个化学成分。序贯代谢研究表明，枸杞子中有20个原形入血成分，其中有17个成分在经过肠代谢后可以检测到，16个成分在经过肝代谢后可以检测到，11个成分经过灌胃给药后，在腹主动脉血中可以检测到。结论:根据序贯代谢的研究结果，可以将这11个成分作为枸杞子药材的候选指标性成分，其分别为咖啡酸己糖偶联物、香豆酸己糖偶联物、N-caffeoyl，N''-dihydrocaffeoyl spermidine dihexose、绿原酸、N1,N10-bis(dihydrocaffeoyl)spermidine hexose、香豆素、槲皮素-O-芸香糖苷、阿魏酸、芦丁、N-乙酰色氨酸、水杨酸。     

基于AQbD的培植牛黄中18种氨基酸含量测定方法的建立与优化

目的 基于分析方法质量源于设计理念，建立与优化同时测定培植牛黄中18种氨基酸含量的分析方法。方法 以峰对的最低分离度为指标，采用Hunter筛选试验设计筛选影响色谱分离的关键色谱参数；然后采用中心复合响应曲面实验设计建立分析方法关键连续变量与5个关键响应指标之间的多变量回归函数，再将5个多变量回归函数整合至1个设计空间中，应用设计空间确定这些关键色谱参数的最优值和控制范围。结果 Hunter筛选试验设计确定色谱参数柱温、pH值和缓冲盐类型对响应值有显著性影响(P<0.05)。同时实验中发现有机相中甲醇和乙腈分别对不同的色谱峰对有不同的分离效果。应用中心复合响应面实验设计确定3个连续色谱变量(柱温、pH值和甲醇-乙腈比例)的最优值和控制范围。柱温接受范围为46~58 ℃，最优值为50 ℃；流动相pH可接受范围为7.7~8.7，最优值为8.2；流动相中甲醇-乙腈比例可接受范围为0.7~1.28，最优值为1.0。结论 所建立的分析方法可靠，可用于同时测定培植牛黄中18种氨基酸的含量。