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目的分别构建三种启动子调控的大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因表达载体,检测、分析三者的表达差异.方法构建三种启动子调控的PNP基因表达载体.将三个PNP基因载体转染不同细胞株,检测PNP基因在各细胞株中表达,分析三者表达的特点.结果AF 0.3和[HRE]AF调控的PNP基因在AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而且后者在AFP阴性肝癌细胞中也实现了靶向性表达.结论三种PNP基因表达载体的成功构建为利用PNP/MeP-dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗打下坚实的基础. 相似文献
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DNA double-strand breaks (DSBs) are common le-sions that occur in cells. They are caused by exogenous sources such as ionizing radiation, and by endogenous sources such as radicals generated during metabolic processes[1]. In mammalian cells, DSBs are repaired ei-ther by the homologous recombination (HR) pathways or by the non-homologous end joining (NHEJ)[2] pathways to maintain the fidelity of human genome. The basic mechanism and factor requirements of the two pathways are different. V… 相似文献
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近年来,RNA干扰(RNAi)技术已成为癌症基因治疗中令人关注的研究热点,以其高效,特异、应用广泛的特点,展示了诱人的临床应用前景。 相似文献
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锤头状核酶对肝癌突变基因p53的抑制作用 总被引:1,自引:2,他引:1
目的 探讨p53核酶对肝癌细胞突变型抑癌基因p53的抑制作用。方法 应用计算机设计并合成针对突变型p53(249位密码子AGG→AGT)的锤头状核酶RZ,构建其体外转录和真核表达载体,检测核酶对突变型p53(mtp53)的体外切割作用,并在Lipofect AMINE^TM2000的介导下转染肝癌细胞MHCC97,应用逆转录聚合酶联反应(RT—PCR)检测核酶对肝癌细胞突变型p53的抑制作用。结果 测序证实核酶基因被正确克隆人体外转录载体pBSKU6和真核载体pEGFPC1中。体外切割效率为42%,而野生型p53(wtp53)没有被切割。在Lipofect AMINETM2000的介导下成功转染肝癌细胞MHCC97,RT—PCR检测证实突变型p53的mRNA水平明显下降,细胞内的切割效率为69%。结论 p53核酶可成功抑制肝癌细胞中突变型p53的表达,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择。 相似文献
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目的探讨肝泰对实验性脂肪肝的保护作用及其可能机制。方法SD雄性大鼠53只,随机分为4组,即模型组(n=15)、肝泰组(n=15)、易善复对照组(n=15)、正常对照组(n=8)。利用高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型,肝泰组给予肝泰(755mg/kg)干预,易善复对照组给予易善复(550mg/kg)干预,10周后处死所有大鼠。采用光镜及电镜观察肝脏组织学改变,检测大鼠血清总胆同醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及免疫组化法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)在肝组织中表达。结果病理所见:模型组出现重度水变性和脂肪变性及点、灶状坏死;肝泰组未见重度水变性和脂肪变性,可见极少数点状坏死。肝泰组肝组织TNF-α与模型组肝组织TNF-α比较,肝泰组TNF-α蛋白含量显著减少(P〈0.05)。肝泰组血浆TC和肝匀浆GSH与模型组比较,肝泰组血浆TC较模型组显著减低,肝泰组GSH比模型组显著升高,均有显著性差异(P〈0.05)。结论肝泰对实验大鼠脂肪肝有保护作用。 相似文献
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目的:设计以X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)为靶向的shRNA,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制XIAP表达的效应,筛选RNA干扰作用最强的shRNA片段.方法:设计4对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体psiRNA-Hhneo-XIAP,通过脂质体介导的方法将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2细胞中.采用逆转录酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)方法检测XIAP的mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达差异,以判断各shRNA的干扰效应.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒.经质粒测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,XIAP基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应最强.shRNA作用48h后,对HepG2细胞中XIAP mRNA和蛋白的抑制率与3,4号重组质粒相比,均具有显著性差异(mRNA:94.5% vs 81.5%,82.6%,均P<0.01:蛋白:92.6% vs 80.7%,82.9%,均P<0.01).结论:成功构建了携带以XIAP为靶向的shRNA的重组质粒,其对肝癌细胞内XIAP的表达具有显著抑制效应.X染色体连锁凋亡抑制蛋白;;短发夹状RNA;;肝癌;;逆转录聚合酶链式反应;;免疫蛋白印迹 相似文献
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内皮素-1基因TaqⅠ和肿瘤坏死因子α基因多态性与肝硬化门静脉高压的相关性 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨内皮素-1基因Taq Ⅰ多态性和肿瘤坏死因子(TNF)α基因多态性与肝硬化门静脉高压之间的相互关系。 方法 采用病例对照和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性等技术,检测了106例乙型肝炎后肝硬化患者和108名健康对照者内皮素~1基因Taq Ⅰ多态性和TNF α基因启动子-308G→A多态性,比较等位基因及基因型频率,并进行分层分析。 结果 在ET—1基因Taq Ⅰ多态性中,门静脉高压症组(LC )C等位基因频率和CC TC基因型频率分别为25.38%与46.15%,比正常对照组明显升高(16.67%与30.56%,x2=4.26,P<0.05)。在TNF α基因多态性中,LC 组TNF2/1基因型的频率比对照组明显升高(21.54%对10.19%,P<0.05)。分层分析发现由这两个基因多态性组成的不同基因型中,TCF 2基因型频率在LC 组高于正常对照组(P<0.05,OR=2.03)。Logistic多元逻辐回归分析显示,ET-1和TNFα基因多态性是门静脉高压形成的危险因子(P值分别为0.022和0.043)。 结论 ET—1和TNF α基因多态性与肝硬化门静脉高压症相关,是门静脉高压症形成的新的危险因子。TCF2基因型可能是门静脉高压症的易感基因型。 相似文献
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目的 研究乙型肝炎病毒核心蛋白c/el表位处TC标签的基因标记对S和e抗原表达的影响,探索TC标签标记HBV病毒体的可行性.方法 以含有1.3倍HBV基因组的载体为模板,在HBV C基因中插入编码TC标签的碱基序列,得到重组的突变型HBV载体,其编码的核心蛋白的c/el表位处嵌入了TC标签.将野生型和突变型HBV载体分别瞬时转染HepG2细胞,Westernblot检测野生型和各种TC嵌合型核心蛋白的表达,酶联免疫吸附法分析病毒S和e抗原的表达.多组间比较用单因素方差分析.结果 Western blot显示各种嵌合型核心蛋白在细胞内成功表达,并且同野生型蛋白的表达水平无显著差别,酶联免疫吸附法检测表明各组细胞S和e抗原表达水平没有明显差别.结论 HBV核心蛋白c/el表位处TC标签的基因标记不会明显影响突变HBV载体表达病毒蛋白. 相似文献