Effects of Astragaloside in Treating Myocardial Injury and Myocardial Sarco/Endoplasmic Ca~( 2 )-ATPase of Viral Myocarditis Mice

Effects of Astragaloside in Treating Myocardial Injury and Myocardial Sarco/Endoplasmic Ca~( 2 )-ATPase of Viral Myocarditis Mice@陆曙 @张寄南 @杨笛 @徐晋丹 @陈相健 @方五旺 @马文珠     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的     

T型钙通道在心肌肥厚大鼠心肌细胞钙内流中的作用

目的研究T型钙通道在心肌细胞钙离子内流中的作用及其对心脏兴奋收缩耦联的可能影响。方法测定选择性T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔对培养的SD乳大鼠心室肌细胞和二肾一夹心肌肥厚大鼠心室肌细胞[Ca2+]i的影响。结果血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激使乳大鼠心室肌舒张期细胞[Ca2+]i增高,收缩期细胞[Ca2+]i降低,[Ca2+]i上升和下降的时间延长。米贝拉地尔1.25～5μmol·L-1浓度依赖性降低AngⅡ引起的细胞[Ca2+]i变化。在心肌肥厚模型大鼠,咖啡因刺激后,[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显降低。而米贝拉地尔25mg·kg-1·d-1(灌胃给药7～9周)组加入咖啡因刺激后细胞内[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显增高。结论T型钙通道异常开放可以引起心肌细胞内钙超载。阻断T型钙通道,可能通过改善肌浆网摄取及释放钙的功能而抑制心肌细胞钙超载。     

大鼠心肌组织中高能磷酸化物的含量测定

目的 建立了同步测定大鼠心肌组织中5种高能磷酸化物含量的反相离子对高效液相色谱法,并观察异丙肾上腺素致害大鼠心肌损伤模型中能量代谢的变化。方法 色谱柱:Supelco ODS-C₁₈(250mm×4.6mm,5μm);柱温:23℃～25℃;UV检测波长210nm;流动相:220mmol·L^-1磷酸盐缓冲液(含3mmol·L^-1四丁基氢氧化铵和7%甲醇),pH6.5;流速1.2ml·min^-1和1.3ml·min^-1。结果 5种能量代谢物质ATP、ADP、AMP、CrP和Cr达到良好分离,ATP、ADP、CrP在10～100μmol·L^-1,AMP在100～500μmol·L^-1,Cr在100～1000μmol·L^-1浓度范围,峰面积与浓度呈良好线性关系。日内和日间精密度的RSD均<10%,ATP、ADP、AMP、CrP及Cr的提取回收率(%)平均为:97.86、104.38、100.00、97.64和98.8。与生理盐水组相比,ISO致害大鼠心室组织中ATP含量及能荷(EC)显著下降(P<0.05)、ADP呈下降而AMP呈上升趋势，CrP含量显著上升（P<0.01）。结论 本法操作简便、结果准确，可以用于大鼠心肌组织提取液中高能磷酸化物的测定和能量代谢状况的研究。     

培哚普利对肾血管性高血压大鼠心肌钙调神经磷酸酶及丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的研究两肾一夹高血压大鼠心肌肥厚过程中钙调神经磷酸酶(CaN)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK，包括胞外信号调节激酶、c-Jun NH2-末端激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶)的变化，探讨血管紧张素转换酶抑制剂培哚普利对心肌肥厚和CaN、MAPK的影响。方法制作两肾一夹高血压大鼠模型；以左心室重、左心室重与体重比值、心肌细胞横截面积、左心室后壁和室间隔厚度作为大鼠心肌肥厚指标；应用RT-PCR法测定大鼠心肌CaN和MAPK mRNA表达，采用免疫印迹法检测CaN蛋白表达，以对硝基苯磷酸作底物测定CaN活性。结果两肾一夹术后2个月大鼠已发生心肌肥厚，术后3个月心肌肥厚进一步加重；手术组大鼠左心室心肌CaN mRNA、蛋白表达和CaN活性以及c-Jun NH2-末端激酶mRNA表达均高于同龄假手术组。培哚普利治疗可逆转大鼠心肌肥厚和CaN、c-Jun NH2-末端激酶的变化。结论培哚普利可通过抑制胞内CaN和c-Jun NH2-末端激酶信号通路逆转两肾一夹高血压大鼠心肌肥厚。     

妊娠相关血浆蛋白-A的纯化与鉴定

目的:建立人妊娠血浆相关蛋白A(PAPP-A)的纯化与鉴定方法.方法:利用DEAE-Sephdex CL-6B离子交换和Heparin-sepharose CL-6B亲和层析进行分离纯化,变性SDS-PAGE测定其相对分子质量为200 kD,Western blotting鉴定其特异性.结果:获得相对分子质量为200 kD的蛋白条带,此条带可与妊娠血浆相关蛋白A单克隆抗体发生特异性反应.结论:成功地从孕妇血清中分离得到妊娠血浆相关蛋白A.     

黄芪总皂苷对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤的保护作用

 目的研究黄芪总皂苷(astragalosides,AS)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)致大鼠心肌损伤的影响及机制。方法用AS(5mg·kg^-1·d^-1×7d,ip)或曲美他嗪(10mg·kg^-1·d^-1×7d,ip)等治疗ISO(5mg·kg^-1·d^-1×2d,sc)心肌损伤大鼠,观察心肌组织病理改变并测定心肌组织乳酸、丙二醛及高能磷酸化物ATP,ADP和AMP含量。结果AS组心肌组织病理分级接近曲美他嗪对照治疗组,心肌乳酸和丙二醛含量较模型组显著降低(分别为P<0.05,P<0.01),ATP含量增加(P<0.05),ADP含量降低(P<0.05),AMP含量有增加趋势,以上治疗指标与曲美他嗪组比较无显著差异(P>0.05)。结论AS可拮抗ISO引起的大鼠心肌损伤,其机制与改善心肌能量代谢、抑制脂质过氧化有关。     

构建检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变的寡核苷酸探针*☆

目的：等位基因特异性寡核苷酸杂交是基于分子杂交原理而建立的经典的突变检测方法，也是DNA芯片技术的重要组成部分，常用于突变筛查。实验拟建立一种适合快速大规模检测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变(C4693T)的方法。 方法：实验于2002-07/2004-06在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所临床生物学诊断与治疗实验室完成。直接测序研究证实的具有cTnⅠ基因Arg145Trp突变的肥厚型心肌病患者2例，正常对照1名，受试者对实验均知情同意。自外周血白细胞抽提DNA，聚合酶链反应扩增心肌肌钙蛋白Ⅰ基因含有突变位点的外显子，点于硝纤膜上，分别在不同的温度条件（48，52，56 ℃）下再与生物素标记的突变及野生探针杂交，摸索最佳杂交条件。根据最佳杂交条件，分别在100倍浓度无关探针条件下行非特异性竞争杂交，在100倍浓度未标记的特异寡核苷酸探针条件下行特异性竞争杂交。 结果：采用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素和NBT/BCIP观察杂交结果：①突变及野生探针在48 ℃ 杂交时，除阴性对照外，2个患者及正常对照样本均见明显阳性信号。②在52 ℃ 及56 ℃ 条件下突变探针正确检出两个突变样本，但以56 ℃ 结果最佳。③100倍浓度无关探针杂交存在时，对生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果没有影响，2个患者样本均见明显阳性信号。100倍浓度未标记的突变寡核苷酸探针存在时杂交，完全抑制生物素标记的突变寡核苷酸探针杂交结果。 结论：所设计的寡核苷酸探针能够检测出肥厚型心肌病患者心肌肌钙蛋白Ⅰ基因Arg145Trp突变（C4693T），适合该突变的快速大规模筛选。     

C-反应蛋白对体外培养乳鼠心肌细胞的影响

目的：应用C-反应蛋白干预体外培养的乳鼠心肌细胞，观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。 方法：实验于2005-05／10在南京医科大学第一附属医院心内科暨心血管病研究所完成。取新生1-3d的SD乳鼠，无菌操作取出心脏，去除大血管和心房后将心脏剪碎，加入适量0．125％胰蛋白酶反复消化至完全。所得消化液中加入含血清的DMEM培养基，离心后弃上清，沉淀用含0．1％Brdu、体积分数为0．15新生牛血清的DMEM培养基混悬。细胞密度稀释至6&;#215;10^8L^-1，接种至六孔板中，放入37℃，体积分数为0．05的CO2孵育箱内培养。24h后换液除去Brdu，取第3天细胞进行研究。采用充氮气孵育4h模拟缺氧造成心肌细胞损伤（缺氧组），以未缺氧组做对照，缺氧组与未缺氧组均加用不同浓度的C-反应蛋白（0，10，55，100mg／L）进行干预，测定细胞培养上清心肌肌钙蛋白Ⅰ的含量及脂质过氧化产物丙二醛与超氧化物歧化酶的含量以观察C-反应蛋白对心肌细胞的影响。并通过免疫组织化学观察C-反应蛋白在细胞的分布情况。 结果：①细胞形态及搏动率的改变：未缺氧组细胞搏动率总体随C-反应蛋白浓度的增加而增加，但在缺氧4h组，细胞搏动率在C-反应蛋白55mg／L时达到最高峰[（132&;#177;9）次／min，P〈0．051。②培养细胞上清肌钙蛋白Ⅰ含量的变化：在未缺氧组和缺氧4h组，肌钙蛋白Ⅰ均随C-反应蛋白浓度的增加而增高，且C-反应蛋白浓度为100mg／L时的增幅最高[C-反应蛋白为0，10，55，100mg／L时的肌钙蛋白Ⅰ浓度：缺氧组分别为（0．789&;#177;0．066），（1．198&;#177;0．101），（1．979&;#177;0．151），（3．714&;#177;0．288）μg／L；未缺氧组分别为（0.332&;#177;0．034），（0．377&;#177;0．054），（0．527&;#177;0．057），（0．867&;#177;0．077）μg／L，P〈0．051。③细胞上清超氧化物歧化酶、丙二醛含量变化：各组丙二醛含量的变化趋势与肌钙蛋白Ⅰ相似，随C-反应蛋白浓度的增加而增加，而超氧化物歧化酶活力则随C-反应蛋白浓度的增加而降低。④免疫组织化学结果显示：随着C-反应蛋白浓度的增高，细胞着色变深，细胞密度变低，体积变小。相同C-反应蛋白浓度下，损伤组细胞的变化比未缺氧组更明显。 结论：C-反应蛋白对心肌细胞具有显著的损伤作用，尤其在已有缺氧损伤的基础上。