BVDV-1 VLPs的构建及免疫原性研究北大核心CSCD

目的利用C、E0、E1和E2蛋白构建BVDV病毒样颗粒,并评价BVDV-1 VLPs的免疫原性。方法以BVDV-BA株为模板通过反转录得到C、E0、E1和E2基因,再将C、E0、E1和E2基因分别克隆至PEASY-Blunt Simple克隆载体上。提取质粒摇菌扩大培养,将得到的C、E0、E1和E2基因克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Bac HTA中,采用热激法将重组穿梭质粒转化至DH10.Bac大肠埃希菌感受态细胞,通过蓝白斑筛选技术获得重组杆粒rB-C、rB-E0、rB-E1和rB-E2。将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒;再用构建的4种重组杆状病毒同时感染SF9悬浮细胞,72 h后收集细胞沉淀进行超声破碎,利用蔗糖垫超速离心和蔗糖密度梯度离心进行纯化,通过Western blot和透射电镜进行鉴定。将获得的BVDV-1 VLPs联合氢氧化铝佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体水平评价VLPs的免疫原性。结果成功克隆出C、E0、E1和E2基因,并构建C、E0、E1和E2蛋白的杆状病毒。通过纯化和鉴定,在20%~30%蔗糖层获得由C、E0、E1和E2蛋白组成结构完整的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。BVDV-1 VLPs能够显著增加免疫小鼠的特异性抗体表达水平。结论构建并获得了由C、E0、E1和E2蛋白组成,并具备良好免疫原性的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。     

小儿大隐静脉留置针穿刺方法的改进

目的探讨提高小儿大隐静脉留置针穿刺成功的方法。方法选取住院患儿200例,随机分为对照组和观察组,对大隐静脉进行静脉留置针穿刺。对照组采用传统穿刺法,选择内踝下方的大隐静脉可见部分或可触摸部分的最低点为穿刺点,以15~30°角为进针角度;观察组选择内踝上方大隐静脉最凸显部位或能触摸到的最凸处为穿刺点,以≥45°角进针;比较2组穿刺后首次见回血和第2、3次见回血情况及穿刺成功情况。结果 2组首次见回血情况比较,差异无统计学意义(χ2=0.479,P0.05);但第2、3次见回血及穿刺成功情况比较,观察组明显高于对照组(χ2=24.381,P0.01;χ2=30.645,P0.01)。结论小儿大隐静脉留置针采用大隐静脉最凸显部位或能触摸的最凸处为穿刺点,并以≥45°角进行穿刺,穿刺成功率高。     

浅议《伤寒论》之特色

张仲景著《伤寒论》是我国第一部理法方药比较完备的医学专著。他不仅创立了较为完整的六经辩证体系,且为临床各科提供了治疗的一般规律。下面就仲景的治则与临床浅谈几点体会:1 治病求本,以调整阴阳为重要治则 人体是一个有机整体,中医诊治疾病善从整体出发,审查内外,辩证求因,审因论治。仲景的治则突出地体现了这一点。他强调治病求本,且将调整阴阳做为重要治则。     

旋光法测定培哚普利叔丁胺盐及培哚普利片含量

目的:建立培哚普利叔丁胺盐及培哚普利片含量测定方法。方法:以乙醇为溶剂,采用旋光法测定培哚普利叔丁胺盐及培哚普利片含量。结果:培哚普利叔丁胺盐在1.2~15 mg/ml范围内浓度与旋光度呈良好线性关系,回归方程C=0.005 4 1.468 8X,r=1.000 0,平均回收率99.6%,RSD为0.19%(n=9)。结论:本法简便易行,结果准确,可作为培哚普利叔丁胺盐及培哚普利片的质控方法。     

结直肠癌肝转移患者肠道菌群中肌苷单磷酸脱氢酶1的筛选及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨肠道菌群及其相关代谢物肌苷单磷酸脱氢酶1（inosine monophosphate dehydrogenase 1,IMPDH1）在结直肠癌（colorectal cancer ,CRC）肝转移中的临床意义。［方法］ 选取CRC非肝转移（CRCNLM）及肝转移（CRCLM）患者各9例。采用16S rDNA测序检测患者粪便,采用液质联用技术检测微生物样本中的代谢物,并筛选出与肝转移相关的Inosine 5′-Monophoshpate。分析TCGA数据库CRC资料中IMPDH1的表达及其对临床预后的影响。［结果］与CRCNLM比较,P. Sphingomonas、F. Bacillus、A. Skermanella等在CRCLM患者中明显升高。经非靶向代谢组学和Tax4Fun功能富集分析,Inosine 5′-Monophosphate等在肝转移组中升高,且Inosine 5′-Monophoshpate与F. Bacillus呈正相关（r=0.564,P＜0.05）。IMPDH1是Inosine 5′-Monophoshpate的关键代谢酶,在CRC及其肝转移患者中显著升高。根据ROC曲线的cut-off值（16.454 6）分为IMPDH1高低表达组,IMPDH1表达在CRC患者TNM分期组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。多因素结果显示,TNM分期（HR=1.041,95%CI：1.020～1.063）、IMPDH1表达（HR=1.007,95%CI：1.000～1.014）是影响CRC预后的独立风险因素（P＜0.05）。随访11.69年后,IMPDH1高低表达患者的总生存率分别为15.2%和31.8%（P=0.01）;随访6.86年后,在CRC肝转移患者中,IMPDH1高低表达患者的总生存率及1、3、5年生存率分别为0、59.2%、47.4%、0和12.3%、76.6%、58.5%、24.6%,差异有统计学意义（P=0.03）。［结论］ F. Bacillus及其相关代谢物Inosine 5′-Monophoshpate的增加可能是导致CRC肝转移发生的原因之一,后者的关键酶IMPDH1高表达可能也是导致CRC预后差的风险因子。     

新补骨脂异黄酮通过caspase-3/GSDME通路诱导肝细胞癌Huh-7细胞焦亡

目的：探讨新补骨脂异黄酮（NBIF）对肝细胞癌（HCC）Huh-7细胞焦亡的影响及其分子机制。方法：体外培养Huh-7细胞,用CCK-8法检测不同浓度的NBIF处理48 h时对细胞存活率的影响,光学显微镜下观察NBIF处理后Huh-7细胞的形态变化,乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞的LDH释放量,WB实验检测细胞中GSDME、caspase-3的蛋白水平变化。采用si RNA干扰Huh-7细胞中caspase-3、GSDME表达后,CCK-8法检测NBIF处理对细胞存活率的影响,WB实验检测GSDME蛋白表达水平,观察NBIF处理对细胞形态的影响,并检测细胞LDH释放量。结果：60μmol/L以上的NBIF均能显著抑制Huh-7细胞的增殖（均P<0.01）,光学显微镜下观察到NBIF处理后的细胞出现肿胀、吐泡现象,且LDH释放增加（P<0.01）;WB实验结果表明,NBIF能够激活caspase-3蛋白并切割GSDME蛋白,增加GSDME-N的表达（均P<0.01）。干扰caspase-3、GSDME表达后,NBIF对细胞的抑制作用减弱（均P<0.01）,G...     

以急性上消化道出血为首发表现的25例胃原发淋巴瘤病例分析及治疗经验总结

  目的  总结以急性上消化道出血为首发表现的胃原发淋巴瘤临床特点及治疗经验,为临床治疗提供依据。  方法  回顾性收集2010年1月–2021年3月因急性上消化道出血收入四川大学华西医院消化内科的胃原发淋巴瘤患者的信息。记录并分析患者胃淋巴瘤内镜下形态、肿瘤分期、病理类型、出血严重程度、再出血风险、治疗及住院预后情况。  结果  总共纳入25例患者,平均年龄57.2岁,临床表现均出现黑便（100%）,9例（36%）存在呕血,6例（24%）合并腹痛。以出血为首发表现的胃淋巴瘤患者内镜下20例（80%）表现为肿瘤形成型（八尾分型）,累及胃体中部及下部多见（分别为44%、32%）。经常规药物保守治疗,在院期间4例发生再出血,其中1例需要内镜下止血,2例需要外科切除止血,1例放弃治疗。仅1例患者死于感染,但无出血直接导致的死亡。  结论  胃原发淋巴瘤以急性上消化道出血为唯一临床表现者罕见,内镜下累及范围较广。常规用于治疗急性上消化道出血的药物保守治疗可以控制其出血症状,但容易发生再出血,保守治疗无效可尝试内镜或者外科治疗。     

主动脉夹层生物标志物的研究进展

主动脉夹层是一种病情险、进展快、病死率极高的急性主动脉疾病。发病率为每年3/10万,发病2 d内病死率达50%。临床表现特异性低,主要依赖于影像学检查,但诊断耗时。在行影像学检查之前,将敏感性及特异性高的生物标志物应用于主动脉夹层的早期辅助诊断具有重要意义。     

SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并...