水蛭ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的 建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据.方法 使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择.结果 在25 μL总体积中,其中包括10×PCR缓冲液2.5 μL、Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTP0.25 mmol/L、引物0.8 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2.0 ng/μL,最佳退火温度为49.7℃.结论 所建立的最佳ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于水蛭遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析.     

水蛭对血瘀证家兔血脂代谢及相关基因表达的影响

目的 观察水蛭对实验性血瘀证家兔血脂代谢及其相关基因表达的影响。方法 采用复合因素(饥饿+高脂饲料+注射肾上腺素)建立血瘀证模型,造模结束后将实验动物随机分成5组,高中低水蛭剂量组、模型对照组、空白对照组,三个剂量组分别按0.30,0.15,0.075g·kg^-1给血瘀证家兔灌胃30 d。分别于造模结束时、灌胃第10,20,30天心脏取血,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;采用荧光实时定量PCR技术检测家兔肝脏低密度脂蛋白受体(LDL-R)、载脂蛋白E(ApoE) mRNA的表达。结果 与模型组相比,水蛭能显著降低血清中TC、TG、LDL-C水平(P<0.05),能显著上调血瘀证家兔肝脏中LDL-R mRNA、ApoE mRNA的表达(P<0.05)。结论 水蛭具有调节血瘀证家兔血脂代谢的作用,其机制可能与上调LDL-R基因和ApoE基因转录水平有关。     

水蛭ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的 建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据。方法 使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg²⁺、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择。结果 在25 μL总体积中,其中包括10×PCR 缓冲液 2.5 μL、Mg²⁺ 2.0 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.8 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2.0 ng/μL,最佳退火温度为49.7 ℃。结论 所建立的最佳ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于水蛭遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析。