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目的:构建能表达MINDY2的慢病毒质粒,并获取稳定过表达MINDY2的A549细胞株,探讨过表达MINDY2对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用同源重组法构建pLVX-Flag-MINDY2过表达质粒,并通过菌落PCR和测序对重组质粒进行鉴定;在HEK293T细胞中瞬时转染pLVX-Flag-MINDY2质粒,通过Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达;重组慢病毒载体包装HEK293T细胞,获取病毒上清液感染A549细胞,嘌呤霉素筛选后利用Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达;CCK8实验、Transwell和划痕实验检测过表达MINDY2对A549细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化。结果:测序结果证明成功构建了MINDY2过表达慢病毒载体;在HEK293T细胞中瞬时转染MINDY2重组质粒,能检测到Flag-MINDY2融合蛋白的表达;Western blot结果显示MINDY2在A549细胞中稳定过表达;CCK8实验表明过表达MINDY2能够抑制A549细胞的增殖;流式细胞术表明... 相似文献
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目的 探讨TXNDC12(thioredoxin domain-containing 12)在脑胶质瘤发生中的作用机制。方法 采用生物信息学分析TXNDC12基因在脑胶质瘤中mRNA的表达及其与预后的相关性，并通过Western blot检测TXNDC12在脑胶质瘤组织和正常脑组织中蛋白表达；构建沉默TXNDC12基因的shRNA慢病毒表达质粒，建立沉默TXNDC12的U251稳转细胞株。采用qRT-PCR和Western blot实验分别检测稳转细胞株中TXNDC12的mRNA及蛋白表达；用CCK-8实验、Transwell和划痕实验检测沉默TXNDC12对U251细胞增殖和迁移能力的影响。结果 生物学信息分析显示TXNDC12在脑胶质瘤组织(1.885±0.902)中的蛋白表达比正常脑组织(1.0±0.545,P<0.05)高，且与不良预后相关(高表达组51.5%vs低表达组70.7%,P<0.000 1);沉默TXNDC12后U251细胞增殖能力和迁移能力明显下降(P<0.05)。结论 TXNDC12在脑胶质瘤中可能发挥促癌基因的作用，其高表达可能促进脑胶质瘤细... 相似文献
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