蓝藻抗病毒蛋白N全长基因原核表达克隆的构建

目的构建蓝藻抗病毒蛋白（CV-N）全长基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中表达。方法根据GeneBank中CV-N的全基因序列，人工合成CV-N序列，进行PCR扩增。将扩增的PCR产物经双酶切后，克隆到原核表达载体pET30a（＋）上，构建重组表达载体pET30a—CV-N。重组质粒经核苷酸测序鉴定后，转化宿主茵BL21（DE3）诱导表达目的蛋白。结果CV-N基因可在大肠杆菌中高效表达，重组蛋白相对分子质量为11Kd，以包涵体形式存在。结论成功地构建了CV—N原核表达载体，为CV—N的纯化及其抗病毒的活性研究奠定了基础。     

2007-2012年铜绿假单胞菌耐药性分析及其与抗菌药物用量关系研究

目的 研究铜绿假单胞菌耐药性变迁趋势,探讨抗菌药物使用对铜绿假单胞菌耐药率变化的影响,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据.方法 回顾性分析2007-2012年铜绿假单胞菌耐药率变化趋势及抗菌药物年用量,计算用药频度（DDDs）,采用Pearson相关分析法对耐药率与DDDs进行分析.结果 3745株铜绿假单胞菌主要来源于痰液（占79.1％）,其次为分泌物（占13.7％）.菌株对常用抗菌药物均有不同程度耐药,2009年开始多数药物耐药率呈下降趋势;对哌拉西林、氨曲南、妥布霉素的耐药率较高,在32.0％～54.6％之间波动;对头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星的耐药率相对较低,在13.4％ ～ 28.4％之间波动;对碳青霉烯类抗菌药物呈现较高耐药性,耐药率在15.3％～37.9％之间波动.自2010年多数抗菌药物DDDs有不同程度下降;头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦的DDDs与铜绿假单胞菌耐药率呈高度正相关（r＞0.800,P＜0.05）.结论 铜绿假单胞菌对常用抗菌药物均有不同程度耐药,尤其是对碳青霉烯类耐药菌株,抗菌药物用量与铜绿假单胞菌耐药率之间存在一定相关性,应加强抗菌药物临床应用管理.     

我院2007-2012年抗菌药物临床应用对肺炎克雷伯菌耐药性变迁的影响

目的探讨抗菌药物使用对肺炎克雷伯菌耐药率变化的影响,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据。方法回顾性分析我院2007-2012年抗菌药物年用量及肺炎克雷伯菌耐药率变化趋势,计算用药频度（DDDs）,采用Pearson相关分析法对耐药率与DDDs进行分析。结果2007-2008年肺炎克雷伯菌对大部分抗菌药物耐药率较高,2009年开始呈下降趋势;自2010年多数抗菌药物DDDs有不同程度下降;头孢他啶、头孢哌酮／舒巴坦、头孢吡肟、阿米卡星、左氧氟沙星和亚胺培南的DDDs与肺炎克雷伯菌耐药率呈高度正相关（r〉0．800,P〈0．05）。结论抗菌药物用量与肺炎克雷伯菌耐药率之间存在一定相关性,应加强抗菌药物临床应用管理。     

于云华主任医师中药治疗脑病经验举隅

吾师于云华,潜心于中西医结合近三十年,擅长运用中医理论治疗多种疑难杂症,现总结治疗经验一二,以宣其艺。     

辨证分型施治配合抗病毒治疗EV71感染120例观察

目的：探讨辨证施治手足口病（EV71感染）临床疗效。方法：将160例临床确诊为手足口病（EV71感染）患儿，随机分为2组，对照组40例予抗病毒等常规治疗，治疗组在此基础上加用自拟方化湿解毒汤、清热解毒汤辨证施治，观察2组临床疗效。结果：治疗组在发热、皮疹消退时间，疱疹结痂时间，转为重症患儿例数，总病程天数方面均优于对照组（P〈0．01或0．05）；2组疗效比较差异也有显著性意义（P〈0．01），治疗组明显优于对照组。结论：运用自拟方辨证施治小儿手足口病（EV71感染），疗效显著，值得临床推广运用。     

蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性

目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a( )上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westenblot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白。结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同。经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%。Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应。将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好。结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药性分析及基因型研究

摘要：目的：探讨本院耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌(CRE)的耐药性及基因型。 方法：收集临床分离的30株CRE,用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,PCR检测碳青霉烯酶bla_KPC、bla_IMP、bla_VIMVIM、bla_OXA-48及bla_NDM-1基因,阳性结果进行DNA测序,BLAST比对确定基因型。 结果: 30株CRE以肺炎克雷伯菌为主,占80%;感染患者主要来自ICU;感染部位以下呼吸道为主,占93.3%;对常用抗菌药物呈多重耐药;其中25株改良Hodge试验阳性;PCR扩增和DNA测序显示11株为bla_IMP-4,12株为bla_IMP-8,未检出bla_KPC、bla_VIM、bla_OXA-48及bla_NDM-1目的基因。 结论: bla_IMP-4型和bla_IMP-8型碳青霉烯酶是本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要型别,且已在ICU中局部流行。     

2009-2014年我院抗菌药物临床应用对鲍曼不动杆菌耐药性变迁的影响

目的 研究鲍曼不动杆菌耐药性变迁趋势,探讨抗菌药物使用对鲍曼不动杆菌耐药率变化的影响,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据.方法 回顾性分析2009-2014年鲍曼不动杆菌耐药率变化趋势及抗菌药物年用量,计算用药频度(DDDs),采用Pearson相关分析法对耐药率与DDDs进行分析.结果 2 859株鲍曼不动杆菌菌株对常用抗菌药物呈多重耐药趋势,对β-内酰胺类、大多β-内酰胺类加酶抑制剂、氨基糖苷类、喹诺酮类、碳青霉烯类、磺胺类的耐药率均超过65.0％,仅对头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素的耐药率相对较低,波动在32.1％ ～ 54.2％之间.2009-2014年不同抗菌药物的DDDs有不同程度升降.庆大霉素、头孢吡肟、左氧氟沙星和亚胺培南的DDDs与鲍曼不动杆菌耐药率呈高度正相关(r＞0.800,P＜0.05).结论 鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物耐药性较为严重,抗菌药物用量与鲍曼不动杆菌耐药率之间存在一定相关性,应加强抗菌药物临床应用管理.     

陌生的朋友

我拿着沈阳某某大学的录取通知书,在９２年那个如火夏日的午后,走出沈阳站;梦想中大都市的繁华立即让我这个自幼不曾走出那个辽西偏僻山乡的穷小子迷失了自己。邮递的不便使我很晚才接到录取通知书,数目不菲的学费又让我那苍老的父亲东奔西走了四五天,当我终于能够踏进这座陌生的城市时,已比规定的报到日期晚了两天。带着一丝侥幸,我遍寻火车站也没有找到通知书上说的接站车。我能理解———学校的接站车当然不会为我这个迟到者依然固守在原地。理解归理解,没有接站车,我不知道该怎样去大学报到。我只知道一个陌生的地址,而不知道…     

不同测试方法检测产IMP酶肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性

目的：评价临床常用的3种药敏方法对产IMP酶肺炎克雷伯菌耐药性的检出率,比较FDA与CLSI折点对判定结果的影响。方法：选取2010年6月-2013年6月临床分离的42株经PCIK证实产IMP酶的肺炎克雷伯菌,以纸片扩散法、Etest法及VITEK2系统检测各菌株对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率,比较FDA与CLSIM100-S22折点对耐药率的影响,FDA折点判读结合改良Hodge试验（MHT）分析。结果：依照FDA折点,纸片扩散法、Etest法及VITEK2系统检测厄他培南耐药率分别为95．2％（40株）、100％（42株）和100％（42株）,亚胺培南耐药率分别为76．2％（32株）、83．3％（35株）和90．5％（38株）,纸片扩散法和Etest法检测美罗培南耐药率分别为73．8％（31株）和83．3％（35株）;依照CLSIM100-S22折点,纸片扩散法、Etest法及VITEK2系统检测厄他培南耐药率分别为90．5％（38株）、100％（42株）和100％（42株）,亚胺培南耐药率分别为54．8％（23株）、59．5％（25株）和61．9％（26株）,纸片扩散法和EteSt法检测关罗培南耐药率分别为57．1％（24株）和61．9％（26株）。结论：厄他培南作为筛选产IMP酶肺炎克雷伯菌的指示药物优于其他药物,FDA标准结合MHT比CLSI标准更能检出菌株产IMP酶情况,VITEK2系统能更好地检出IMP酶介导的碳青霉烯类抗菌药物的耐药性。