4种重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-6融合蛋白对环磷酰胺引起的小鼠白细胞减少的恢复作用

目的探讨 4种重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 /白细胞介素 6 (rhGM CSF/IL 6 )融合蛋白在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致Balb/c系小鼠白细胞减少及造血功能损坏的影响。方法给小鼠注射环磷酰胺建立实验模型 ,分别同时注射融合蛋白 7d ,于第 13天摘除眼球采血 ,并进行外周血白细胞计数 ,骨髓有核细胞、单个核细胞记数及CFU GM的测定。结果 4种rhGM CSF/IL 6融合蛋白用药组与生理盐水对照组相比 ,小鼠外周血白细胞数 ,骨髓有核细胞和单个核细胞数以及骨髓CFU GM数均有所增加。结论 4种rhGM CSF /IL 6融合蛋白对环磷酰胺所致小鼠外周血白细胞数减少 ,骨髓有核细胞、单个核细胞数和骨髓CFU GM数减少以及造血功能的损坏具有不同程度的恢复作用。     

人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA．并构建成pBV220-survivin原核表达质粒，将其导入Ecoli Bl21(Gold)中，诱导表达survivin蛋白。通过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。用Western blotting检测表达产物。结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致，表达质粒在E-coli Bl21(Gold)中得到高效表达，表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30％以上，表达产物以包涵体的形式存在。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白，其纯度达到95％以上。Western blotting证明表达产物具有特异性。结论获得了较高纯度的survivin蛋白。为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具。     

点阵射频在皮肤美容领域的应用

点阵射频通过阵列式排布电极或微针发射的射频产生电流,点阵模式加热真皮层,对表皮损伤很小,热损伤后的修复过程涉及多种热休克蛋白、基质金属蛋白酶、细胞因子等的参与,可刺激胶原和弹力纤维增生,因此用于皱纹、松弛、痤疮瘢痕等皮肤问题的治疗。研究证明,点阵射频技术是一种安全有效的美容手段,可以紧肤、除皱、改善肤质,可显著改善萎缩性痤疮瘢痕,并可改善炎症性痤疮和炎症后红斑,不良反应较少,包括可耐受的疼痛、一过性红斑、水肿及细小结痂,停工期很短,引起炎症后色素沉着的风险小,更适合深肤色人群。近几年,点阵射频更多地与激光等设备的联合应用,或辅助经皮给药,疗效显著,有很好的应用前景。     

四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较

目的 构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF／IL-6融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造，同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3，克隆PCR产物，并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒，4种融合蛋白分别是GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(简称GII)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(简称GL2)、GM-CSF(1-127)-IL-6(1—184)(简称GI3)、GM-CSF(9-127)-IL-6(24～184)(简称GI4)，表达质粒分别导入E．coli BL-21中诱导表达。通过Q Sepharose HP离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用hGM—CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性。结果 对4种融合蛋白基因的测序结果表明，其序列与理论设计完全一致，表达质粒在E．coli BL-21中均得到高效表达，表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30％以上，表达产物以包涵体的形式存在，通过Q Sepharose HP离子交换柱和Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白，其纯度均达到95％以上。活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF／IL-6融合蛋白。     

人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coliBl21(Gold)中,诱导表达survivin蛋白。通过DEAESepharoseFastFlow离子交换柱和SephacrylS-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。用Westernblotting检测表达产物。结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coliBl21(Gold)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上。Westernblotting证明表达产物具有特异性。结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具。     

两种rHuIL-6/GM-CSF融合蛋白对化疗药物所致小鼠白细胞减少的恢复作用

以BALB/c系小鼠作为实验动物 ,探讨两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白 [包括IL 6 (1 184 )GM CSF (9 12 7) (简称IG1) ,IL 6 (2 4 184 ) GM CSF (9 12 7) (简称IG2 ) ]在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致BALB/c系小鼠白细胞减少及造血功能的影响。注射环磷酰胺建立化疗模型 ,分别同时注射融合蛋白 7d ,于 13d摘除眼球采血 ,并进行外周血白细胞记数 ,骨髓有核细胞 ,单个核细胞记数及CFU GM的测定。实验结果表明两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少及造血功能的损伤具有不同程度的修复作用。