紫外光核黄素胶原交联对兔角膜碱烧伤作用的实验研究

目的 探讨紫外光核黄素胶原交联对兔角膜碱烧伤的治疗作用.方法 新西兰兔48只,随机分为单纯碱烧伤组及碱烧伤联合核黄素胶原交联治疗组.单纯碱烧伤组建立单纯碱烧伤模型,治疗组建立碱烧伤模型后立即行角膜胶原交联治疗,两组分别于烧伤后1d、3d、1周、2周、4周、6周行裂隙灯观察,测量角膜上皮缺损面积,同时行角膜共聚焦显微镜检查以及HE染色,观察各时间点角膜损伤的变化情况.结果 单纯碱烧伤组在烧伤后2周时100％眼出现角膜溃疡,溃疡深及浅基质层,上皮缺损面积为(4.70±1.01) pixels2;碱烧伤联合核黄素胶原交联治疗组11眼仅出现上皮缺损,1眼角膜溃疡深及浅层基质,上皮缺损面积为(2.63±1.59) pixels2,差异有统计学意义(P＜0.05).烧伤后4周时两组上皮缺损区域逐渐缩小,单纯碱烧伤组8眼上皮缺损,上皮缺损面积为(4.08±1.65) pixels2;治疗组5眼(5/8)上皮愈合,2眼角膜仅有少量点状荧光着染,1眼仍有深及浅基质层角膜溃疡,上皮缺损面积为(1.23±2.32) pixels2,差异有统计学意义(P＜0.05).角膜共聚焦显微镜检查显示胶原交联治疗后2周浅基质层炎症反应较轻,较晚出现浅基质层的广泛纤维化.HE染色显示胶原交联治疗后角膜浅基质板层结构密度增加,炎性细胞浸润减少.结论 紫外光核黄素胶原交联治疗可减轻兔角膜碱烧伤后的基质损伤,角膜溃疡愈合时间缩短,基质炎性细胞浸润减轻.     

醛糖还原酶在小鼠视神经损伤后的表达及作用

目的 观察视神经中醛糖还原酶(AR)在小鼠视神经横断(ONT)损伤后的表达变化及其对视网膜神经节细胞存活和再生的影响.方法 采用C57BL/6-AR+/+(野生型)小鼠、C57BL/6-AR-/-(AR基因敲除)小鼠、Thy1-YFP/AR+/+(AR+/+ YFP 小鼠)小鼠和Thy1-YFP/AR-/-小鼠(AR-/-YFP小鼠),建立视神经横断模型.通过Western blot方法,检测横断损伤后的视网膜中AR分子的表达变化;利用视网膜组织冰冻切片计数观察比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠视神经横断损伤后存活的视网膜神经节细胞数目;通过Western blot法,观察比较神经生长相关蛋白43(GAP-43)在AR基因敲除小鼠和野生型小鼠视神经横断后的表达变化.结果 Western blot检测发现AR分子在野生型小鼠视神经横断后表达随时间延长逐渐升高.AR敲除小鼠在视神经横断损伤后其存活的视网膜神经节细胞数目多于野生型小鼠.AR敲除小鼠在视神经横断损伤后GAP-43的表达量高于野生型小鼠组(P＜0.05).结论 AR参与了视神经横断损伤后的视网膜神经节细胞存活的调节,AR缺失会促进视神经横断损伤后的再生修复.     

缺氧对人视网膜色素上皮细胞促血管生成素-1和促血管生成素-2表达的影响

目的 探讨缺氧环境下人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞中促血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang1)和促血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达变化及其可能的机制.方法 将人RPE细胞培养在厌氧箱中,以建立缺氧模型.按缺氧时间0h、1h、4h、12h和24 h分为5组,观察Ang-1、Ang-2与缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的变化;另取4h作为观察点,按处理因素分为缺氧对照组和HIF-1α抑制剂3-(5’-hydroxymethy1-2’-furyl)-1-benzyl indazole (YC-1)处理组,YC-1浓度分别为1μmol·L-1、10μmol·L-1和100 μmol·L-1,观察抑制HIF-1α后对Ang-1和Ang-2表达的影响. 应用免疫荧光染色法和Western blot分别检测Ang-1、Ang-2与HIF-lα蛋白的表达.结果 常氧条件下人RPE细胞内可见Ang-2蛋白表达,未见Ang-1及HIF-1α蛋白表达;缺氧条件下Ang-1和Ang-2分别与HIF-1α共表达于RPE细胞胞质中.HIF-1α与Ang-1在缺氧早期呈上升趋势,其中HIF-1α于缺氧后4h表达最高(0.451±0.022,与0h相比t=5.401,P＜0.05),24h后有所下降;Ang-1于缺氧后24 h表达最高(1.342±0.059,与0h相比t=20.100,P＜0.01);Ang-2表达几乎不变(1.542±0.129、1.621 ±0.131、1.574±0.146、1.624±0.027,与0h相比t=0.044、0.673、0.244、0.700,均为P＞0.05).浓度为1 μmol·L-、10 μmol·L-1和100 μmol·L-1的YC-1均可有效抑制HIF-1α蛋白的表达(t=21.583、27.154、27.431,均为P＜0.01).HIF-1α蛋白表达下调后,Ang-1蛋白表达也随之受到抑制(t=9.492、15.487、17.942,均为P＜0.05),而Ang-2蛋白表达无明显变化(f=0.859、0.178、1.565,均为P＞0.05).结论 缺氧条件下人RPE细胞表达Ang-1上调,并与HIF-1α表达具有时相关系,Ang-2无明显变化;抑制HIF-1α表达后,Ang-1表达随之降低.提示在脉络膜新生血管生成过程中Ang-1的表达可能受HIF-1α选择性调控.