外周血液中miRNA表达与老年性黄斑变性相关性研究

目的　检测微小核糖核酸（microribonucleicacids，miRNA）在老年性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）患者中的表达，并探讨miRNA的表达量与AMD病程之间的关系。方法　选取2014年1月至2016年11月于同济大学附属第十人民医院眼科门诊就诊的AMD患者6例为试验组，并选取同期6名正常人为对照组，通过基因芯片技术检测两组血液中miRNA的表达量。扩大样本的病例对照研究中共纳入126例AMD患者和140名正常人，检测其血液样本中miRNA的表达，比较两组人群间miRNA的表达量差异。结果　通过基因芯片技术，在试验组与对照组间共检测出216个miRNA存在表达差异（均为P<0.05），与对照组相比，试验组中111个miRNA表达量上升，105个miRNA表达量下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。扩大样本的病例对照研究结果表明，在AMD患者中，miR-27a-3p、miR-29b-3p、miR-195-5p的表达量显著上升，同时，湿性AMD患者血液中miR-27a-3p的表达量高于干性AMD患者，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　AMD患者外周血中miRNA表达量水平有明显变化，miR-27a-3p、miR-29b-3p、miR-195-5p可能成为AMD血清学诊断和预后的标志物。     

聚乙烯亚胺修饰的荧光素钠纳米颗粒在荧光素眼底血管造影术的应用和安全性

目的　探讨聚乙烯亚胺修饰的荧光素钠（PEI-NHAc-FS）纳米颗粒（nanoparticles,NPs）在荧光素眼底血管造影术的应用和安全性。方法　选取90只健康棕色雄性挪威大鼠作为实验动物。将1 mL 荧光素钠（200 g·L^-1）加入10 mol的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）混合物中搅拌30 min,再加入10 mol的N-羟基琥珀酰亚胺搅拌3 h。然后将该溶液加入到5 mL聚乙烯亚胺（polyethyleneimine,PEI）（76 g·L^-1）中,剧烈搅拌3 d获得PEI-NH₂-FS。将2 mL三乙胺加入到PEI-NH₂-FS原液中,30 min后再将1 mL的乙酸酐加入混合物中搅拌24 h,合成PEI-NHAc-FS。使用核磁共振波谱仪和紫外可见光吸收光谱观察PEI-NHAc-FS的结构,并对合成的NPs结构进行表征;CCK-8检测其细胞毒性。选取30只大鼠,根据荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs的浓度（5 g·L^-1、10 g·L^-1、50 g·L^-1）将大鼠分为6组,每组5只,分别于注射前及注射后5 min、20 min、30 min和60 min进行眼底摄像,采集大鼠眼底血管荧光素图像。用激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型后,取10只大鼠,随机分为10 g·L^-1荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组,每组5只,分别于注射前及注射后5 min、20 min、30 min和60 min通过眼底血管造影成像观察病灶处渗漏。另取40只大鼠,随机分为10 g·L^-1荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组,每组20只,于注射后10 min、20 min、30 min和60 min进行荧光冰冻切片。将10只大鼠随机分为对照组（注射生理盐水）和PEI-NHAc-FS NPs组,每组5只,行组织切片HE染色和视网膜电图检测。采用HE染色和视网膜电图观察PEI-NHAc-FS NPs在体内的生物安全性。结果　通过核磁共振和紫外可见光吸收光谱观察到荧光素钠与PEI成功耦合。发射荧光光谱显示,游离荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs的最大发射波长分别出现在546 nm和544 nm处。CCK-8检测结果表明,不同浓度的荧光素钠和PEI-NHAc-FS NPs处理人脐静脉内皮细胞12 h、24 h后,细胞活性差异无统计学意义（P>0.05）。即使用10 μmol·L^-1 PEI-NHAc-FS NPs处理24 h和未处理之间细胞存活率差异亦无统计学意义（P>0.05）。在5 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组中,均仅显影视网膜主要血管,不能用于荧光素眼底血管造影的诊断。而在10 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组可清晰地显示视网膜主要血管及微血管的结构,且在注射后30 min时血管荧光强度基本相同。PEI-NHAc-FS NPs组在60 min时荧光强度已基本消失,而游离荧光素钠组仍保持较强的荧光强度。10 g·L^-1游离荧光素钠组和PEI-NHAc-FS NPs组荧光素眼底血管造影结果显示,经尾静脉注射造影剂后,视网膜血管内可见荧光成像;同时病灶部位可见荧光渗漏。游离荧光素钠组在视网膜组织中荧光较强,对视网膜组织有较强的吸附和渗透作用,而PEI-NHAc-FS NPs组在视网膜组织中荧光较弱,对视网膜组织吸附较弱。HE染色和视网膜电图对造影剂进行体内生物安全性分析结果显示,PEI-NHAc-FS NPs安全性较好。结论　PEI-NHAc-FS NPs能够安全、有效地用于荧光素眼底血管造影。     

不同光谱组成的人工照明对视网膜色素上皮细胞的影响

目的 探讨不同光谱组成的人工照明对视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞随机分组：无光照对照组、非全光谱照明组(细分为300 lx、600 lx两个亚组)、全光谱照明组(细分为100 lx、300 lx、600 lx、900 lx四个亚组),无光照对照组细胞避光培养,其他组细胞采用相应光谱和光照强度干预。将分组光照24 h、48 h、72 h后的ARPE-19细胞置于倒置荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞活力;线粒体膜电位法检测线粒体功能。结果 光学显微镜下可见,光照72 h后,各组细胞密度明显增大,细胞大小不一,细胞多边形不典型;全光谱照明组细胞较非全光谱照明组细胞形态规整,异形细胞数少。光照24 h后,与无光照对照组相比,非全光谱照明300 lx组,全光谱照明300 lx、600 lx、900 lx组细胞活力均降低(均为P<0.05)。全光谱照明900 lx组细胞活力高于非全光谱照明300 lx组(P<0.05)。光照48 h后,各组细胞活力较光照24 h时提高;全光谱照明100 lx、300 lx组细胞活力低于非全光谱...     

靶向下调SGTA抑制肝细胞肝癌细胞周期及细胞增殖

目的 :研究靶向下调小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α抗体(small glutamine-rich tetratricopeptide repeatcontaining protein alpha,SGTA)的表达对肝癌Hu H7细胞周期及细胞增殖的影响。方法:选择Hu H7细胞系作为研究对象,进行血清饥饿释放同步化处理后采用Western Blot方法检测SGTA蛋白表达水平变化;通过SGTA特异性si RNA下调Hu H7细胞中SGTA的表达,采用细胞计数盒8(cell counting kit 8,CCK8)、流式细胞术等方法检测细胞增殖能力及细胞周期。结果:血清饥饿使Hu H7细胞生长周期停滞,血清释放后刺激Hu H7细胞增殖,Western Blot显示SGTA﹑增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白随着细胞周期的进展表达增加,而细胞周期负性调控因子p27kip1蛋白表达却下降。SGTA缺失可引起cyclin A、cyclin B的表达下降、细胞增殖的下降以及细胞周期的阻滞。结论:SGTA特异性si RNA能明显抑制肝癌Hu H7细胞的增殖,细胞周期阻滞,提示其可为肝癌的靶基因治疗提供新的分子靶点。     

针刺治疗绝经后期干眼患者的疗效及其泪液蛋白质组学研究

目的　研究针刺疗法治疗绝经后期干眼患者的有效性及其分子机制。方法　选取28例（56眼）绝经后期干眼妇女,随机分成单纯人工泪液（artificial tears,AT）治疗组（AT组）14例28眼及针刺联合人工泪液 （acupuncture plus artificial tears,AC+AT） 治疗组（AC+AT组）14例28眼,每组均治疗2个月,并对治疗前后两组患者眼表疾病指数 （ocular surface disease index,OSDI）评分、症状评分、体征评分以及泪膜破裂时间（break-up time,BUT） 进行分析。同时采集治疗前后各组泪液样本,采用二维纳米液相色谱耦合串联质谱法 （two-dimensional nano-liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,2D Nano-LC-MS/MS）对AC+AT组治疗前后泪液进行蛋白质组学分析,采用蛋白质印记法比较两组泪液蛋白差异。结果　两组治疗后OSDI评分、症状评分、体征评分和BUT,AT组分别为39.08±18.68、7.43±2.08、11.46±2.29、（4.75±1.74）s,AC+AT组分别为24.55±17.43、4.68±2.54、11.21±2.96、（4.57±2.71）s;与治疗前相比均明显改善,差异均有统计学意义（均为P=0.000）。与AT组相比,针刺治疗后AC+AT组的症状评分明显改善（P=0.000）。2D Nano-LC-MS/MS法分析了泪液中2411种蛋白,其中142种表达下调,169种表达上调。与AT组相比,针刺治疗后AC+AT组患者泪液中细胞质蛋白表达下调（P=0.000）,分泌蛋白表达上调（P=0.000）。在蛋白功能方面,与AT组相比,AC+AT组细胞组分蛋白表达下调 （P=0.000）,免疫蛋白表达上调 （P=0.040）。结论　AC+AT治疗增加了泪液蛋白质合成及分泌,改善临床绝经后期干眼患者症状。针刺治疗可能成为治疗该类干眼患者的有效辅助疗法。