不同区域晶状体上皮细胞基因表达差异分析

【目的】比较不同区域猪晶状体上皮细胞的基因表达在转录组水平上的差异。【方法】解剖显微镜下分离晶状体前囊膜，将附着于其上的上皮细胞分为中央（直径为10．56mm）和周边两部分。分别提取两个样本的总RNAs并经PCR扩增，以Cy3和Cy5分别标记扩增的中央与周边部分的cDNA。与含7548个基因的表达谱芯片杂交，经图像分析，生物信息学处理获得基因表达在转录水平差异的相关信息。【结果】中央与周边区域的猪晶状体上皮细胞在转录组水平共鉴定出952个有效表达的基因点，其中差异表达基因261个．以中央区域为参照，周边上皮细胞mRNA上调137个，下调124个。差异表达基因主要涉及的功能有：细胞周期与凋亡、细胞骨架蛋白及细胞外基质、转录、细胞信号分子等。【结论】中央与周边区域猪晶状体上皮细胞基因表达在转录组水平上差异明显。这类差异呈明显的功能聚类。     

HPLC测量维生素C在大鼠和豚鼠房水及晶体内的分布

目的测定豚鼠和大鼠眼房水及晶体不同部位的维生素Ｃ（ｖｉｔａｍｉｎＣ，ＶＣ）的含量。方法应用晶体分割技术将豚鼠和大鼠晶体分为赤道部、前皮质、核部和后皮质，然后用高压液相色谱测定了晶体不同部位以及房水内的ＶＣ含量。结果豚鼠和大鼠房水中的ＶＣ分别为１３０９．１和４４．６１μｍｏｌ／Ｌ。晶体内以赤道部的ＶＣ含量最高，晶体核为最低，前后皮质的含量介于二者之间。结论ＶＣ在不同动物的眼房水和晶体中的含量有很大差别，在晶体不同部位的分布也明显不同。     

人晶体 γ-晶体蛋白的研究:Ⅳ.近紫外线对胚 γ_2-晶体蛋白的光氧化作用

对人胚胎晶体γ_2-晶体蛋白溶液用近紫外线(γmax 365nm)照射,不同时间取样分析。利用巯基(-SH)特异性试剂 DACM[N-(7-甲基氨基-4-甲基-3-邻羟苯烯基)-马来酰亚胺],经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察光照射后的γ_2-晶体蛋白及其聚合物的游离巯基,同时检测照射后的蛋白溶液的紫外吸收光谱、光散射强度、色氨酸荧光发射光谱,以及丙烯酰胺对色氨酸荧光的猝灭效应。结果显示:人胚胎γ_2-晶体蛋白经紫外线照射,使其游离-SH 减少,蛋白聚合和分解,蛋白溶液的光散射增强,其二聚体不含游离-SH,γ_2-晶体蛋白的色氨酸荧光减少,这些变化随照射时间的延长而更明显;而对丙烯酰胺对蛋白分子中的色氨酸荧光猝灭效应影响不大。说明人胚胎γ_2-晶体蛋白通过光氧化,损伤及含游离-SH 的氨基酸残基、色氨酸残基,光氧化促使蛋白聚合和分解.提出通过进一步定量分析,可能在较深层次揭示紫外光氧化损伤含-SH 氨基酸、色氨酸残基,进而影响整个蛋白质分子结构的差异。眼科学报 1993;9:85-89。     

眼蛋白质组学

蛋白质组学是对一个细胞、组织或器官的基因组表达的所有蛋白质分析研究，是新世纪生命科学研究的前沿以及功能基因组学的研究重心。蛋白质组学为研究眼部细胞生命活动规律和眼科疾病病变机制提供了一个新的研究平台。本文就蛋白质组学在眼科的应用作一综述。眼科学报2003；19：67-70     

斗门县农村中老年人群原发闭角性青光眼流行病学调查

【目的】调查 5 0岁以上的中老年人群中的原发闭角性青光眼患病率。【方法】 1997年在广东省斗门县以村为单位 ,通过重组随机整群抽样确定检查对象 ,用ETDRS视力表检查裸眼视力、常戴镜视力和针孔视力 ,Schiotz计测定眼压 ,直接电眼底镜作视神经垂直C/D比的估计 ,手电筒侧照法和vanHerrick法测定前房深度 ,并结合急性发作史、前房角镜和视野检查作出诊断。【结果】在 5 34 2名实检对象 (受检率 92 7% )中 ,青光眼是第 5位致盲眼病。原发闭角性青光眼的患病率为1 0 % ,男性和女性中分别为 0 8%和 1 2 % ,在 5 0～ 5 9、6 0～ 6 9和 70～ 98岁年龄组中分别为 0 4%、0 8%和 1 6 % ,浅前房人群中为 5 9% ,经logistic回归校正混杂作用后 ,年龄和前房深度为独立的危险因素 ,以 5 0岁年龄组和深前房者为基准 ,70～ 98岁年龄组和浅前房者的调整比数比分别为 3 3和 11 3。【结论】原发闭角性青光眼是人群中重要的致盲眼病 ,老年和浅前房者是危险人群。     

维生素C在晶体蛋白光氧化中的作用及其机制

目的：观察维生素Ｃ（ＡＳＡ）在晶体蛋白发生光氧化时的作用及其机制。方法：牛日体蛋白溶液在加入或不加入ＡＳＡ时,于５天内共接受２００ｍＪ／ｃｍ＾２紫外线Ｂ（ＵＶＢ）照射,接着在３７℃继续孵育至第３周,然后测定晶体蛋白的非色氨酸我、游离巯基和进行蛋白电泳分析。结果：ＡＳＡ在溶液中易被氧化,蛋白溶液中加入ＡＳＡ促使晶体蛋白 非色氨酸荧光产生明显增强,导致非二硫键聚合形成,对晶体蛋白的游离巯基减少有保护作     

透镜对豚鼠眼屈光不正和眼轴的作用

观察凹透镜和凸透镜对豚鼠眼球生长和屈光变化的影响，建立透镜诱导型屈光不正动物模型。方法：3～4周龄有色豚鼠47只，随机分成7组，右眼分别戴不同度数的凸或凹透镜，其左眼作为对照眼，戴镜前和戴镜后第11天分别测量其眼轴长度、屈光度，观察其变化。结果：戴镜后第11天与戴镜前相比，戴+4.00?D、+8.00?D组的豚鼠眼分别增加了+1.46?D与+1.58?D的相对远视（P＜0.05）；戴-4.00?D、-8.00?D、-15.00?D组的豚鼠分别增加了-2.92?D、-3.17?D、-3.10?D的相对近视（P＜0.01）；而戴0.00?D、-2.00?D组的豚鼠的屈光度差异无统计学意义（P＞0.05）。7组豚鼠的眼轴长度在实验眼和对照眼之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：豚鼠眼球生长发育受透镜影响，可被用来建立一种简单经济的屈光不正动物模型。     

正常人眼小梁组织的二维凝胶电泳及质谱分析

【目的】应用二维电泳和质谱对正常人眼小梁组织蛋白质组的进行初步分析。【方法】采用二维凝胶电泳对正常人眼小梁组织进行蛋白分离和图像分析。分别用(7cm×8cm、13cm×16cm、18cm×16cm)3种不同尺寸大小凝胶分离蛋白,并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点。【结果】建立小梁组织蛋白样品处理及二维凝胶电泳的实验条件及方法,获得正常人眼小梁组织二维凝胶电泳蛋白图谱。3种不同尺寸大小凝胶的蛋白质分离斑点数分别为230个、875个、1213个。质谱鉴定出14个蛋白点。【结论】完成人眼小梁组织蛋白质的二维电泳凝胶“标准”图谱并作质谱分析的方法性探索对同类研究具有参考意义,为分析小梁组织在青光眼发病过程中蛋白质表达改变研究提供了新的方法及途径。     

胶质纤维酸性蛋白在青光眼大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在青光眼大鼠视网膜Müler细胞上的诱导表达情况及可能的意义。方法:采用烧灼涡静脉的方法制作大鼠青光眼模型,分别于术后2h;1,3d;1,2,3wk取材,制作视网膜矢状位冰冻切片和视网膜铺片,进行GS/GFAP免疫荧光双标。提取视网膜总蛋白行GFAP免疫印迹半定量分析。结果:视网膜矢状位切片可见,正常大鼠视网膜中,GFAP阳性染色只出现在神经节细胞层的星形胶质细胞上,而Müller细胞不表达GFAP。制作青光眼模型术后2h,Müller细胞上出现GFAP阳性染色,术后1,3d,GFAP的表达显著增加,到术后1wk,GFAP在Müller细胞上的表达量达到高峰,一直持续到术后3wk,免疫印迹半定量分析与以上结果吻合。术后1wk视网膜铺片中清晰可见Müller细胞足板出现GFAP的诱导表达。结论:高眼压时GFAP在Müller细胞上的诱导表达尤其在足板处的强烈表达是Müller细胞对眼压升高产生的一种反应,GFAP可能是一种潜在的有用的生物标记物。     

HSV-1感染对人视网膜色素上皮细胞生长的影响

目的:建立单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus,HSV-1)感染人视网膜色素上皮细胞(Retinal pigmentepith elial,RPE)的体外模型,观察HSV-1感染对体外培养RPE细胞生长的影响。方法:以感染复数(MOI)为5的HSV-1(F株)感染体外培养的RPE细胞。用相差显微镜观察RPE细胞的形态变化;用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对RPE细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;用PCR和免疫荧光法验证HSV-1感染RPE细胞是否成功。结果:成功在体外建立了HSV-1感染RPE的细胞模型。HSV-1感染RPE细胞8h后出现病变,细胞形态开始变得细长和皱缩;感染24h后细胞病变更加明显,细胞间间隙增加,甚至可见多核巨细胞;感染48h后所有细胞均变圆,细胞开始出现脱落甚至死亡。MTT法显示HSV-1感染RPE后24h和48h能抑制细胞生长(P<0.01),细胞的抑制率分别为(16.37±3.28)%和(47.91±6.39)%;流式细胞仪检测发现HSV-1感染可影响RPE细胞的细胞周期,但对细胞凋亡无明显影响。结论:HSV-1能感染体外培养的RPE细胞,抑制RPE细胞的增殖,并影响RPE细胞的细胞周期。眼科学报2007;23:212-218.