丹参素在Caco-2细胞单层模型中的跨膜转运研究

目的:研究丹参素在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制。方法:通过研究丹参素在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度及转运蛋白抑制剂对丹参素吸收的影响。用液相-质谱联用法检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:表观渗透系数P_app值随时间延长而增大,到一定时间趋向饱和状态,并随丹参素浓度的增加而逐渐减小。双向转运的P_app比值即P_ratio均大于1.5。在加入P-gp转运蛋白抑制剂维拉帕米后,丹参素P_app,A-B值显著增大,而P_app,B-A值显著降低。结论:丹参素在Caco-2细胞模型中的转运可能主要是由P-gp转运蛋白介导的主动转运。     

100名健康人群CYP2C19基因型检测

CYP2C19又称为S—美芬妥英羟化酶,1993年Wrishton等从人类肝脏分离出来的一种酶,被发现参与十几种药物的代谢。美芬妥英羟化代谢在人群中有遗传的多态性,羟化速度快者为快代谢者(extensive metabolism EM),羟化速度慢者为慢代谢者(poor metabolism PM)。1994年de Morais等先后发现了CYP2Cl9的两个等位基因:CYP2C19ml     

冠心宁片中水溶性组分的抗血栓活性研究

目的:使用转基因斑马鱼模型筛选冠心宁片中具有抗血栓活性的组分及药效物质,并探讨其作用机制。方法:将斑马鱼胚胎分为对照组、造模组、给药组及阳性药组,使用苯肼诱导血栓模型。通过荧光显微成像结合血红蛋白染色对冠心宁片各组分抗血栓作用进行定性和定量分析。进一步探寻活性组分中起抗血栓作用的主要成分。最后进行活性氧（ROS）检测及脂质氧化损伤丙二醛(Malondialdehyde,MDA)分析,探讨其抗血栓机制。结果:实验结果显示冠心宁片水溶性组分可显著减少外周血红细胞聚集(P<0.01),增加回心血量,且效果呈剂量依赖性。因多糖为冠心宁片水溶性成分中的主要物质,进一步实验发现丹参多糖和川芎多糖也具有抗血栓活性,且能显著降低斑马鱼的氧化应激水平,丹参多糖还具有下调胚胎脂质过氧化水平的作用。结论:丹参多糖和川芎多糖为冠心宁片水溶性组分中具有抗血栓作用的活性化合物,可能与其抑制氧化应激作用有关,具有开发为抗血栓治疗先导物的潜在应用前景。     

基于三色荧光探针的红花肾保护活性物质筛选研究

该研究采用3种荧光探针FDA,MTR,Hoechst 33342对盐酸阿霉素损伤的HK-2细胞进行标记,通过细胞荧光显微成像平台进行荧光图像采集及分析,建立了一种潜在的肾保护活性物质筛选方法。应用该方法对红花的53个化学组分进行筛选,发现C17,C18,C19 3个组分对盐酸阿霉素损伤的HK-2细胞具有较好的保护作用,运用液相色谱质谱联用（LC-MS）技术对其进行定性分析,初步推测出8个化合物,羟基红花黄色素A,6-羟基山柰酚-3-O-芸香糖-6-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷或6-羟基山柰酚-6,7-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3-O-芸香糖苷,6-羟基山柰酚-3-O-葡萄糖苷或6-羟基山柰酚-7-O-葡萄糖苷,芦丁,异槲皮素和山柰酚-3-O-芸香糖苷。与对照品比对后确认其中4个化合物为异槲皮素、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷及羟基红花黄色素A,并对这4个化合物的肾细胞保护作用进行了验证,发现均具有一定的肾细胞保护作用,其中异槲皮素的保护作用最强,且具有良好的量效关系。实验结果提示,异槲皮素、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷及羟基红花黄色素A可能是红花发挥肾保护作用的活性成分。     

参麦注射液保护氧化损伤心肌细胞线粒体的机制研究

目的: 探究参麦注射液对氧化损伤心肌细胞的保护作用及其对线粒体能量代谢过程的影响。方法: 采用叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导构建H9c2心肌细胞氧化损伤模型。分别采用MTT法和化学发光法检测参麦注射液对细胞存活率和ATP水平的影响;采用Clark氧电极检测参麦注射液对细胞有氧呼吸速率的调节作用;采用ELISA法检测丙酮酸及丙酮酸脱氢酶（PDH）的含量及活性;采用蛋白质印迹法检测丙酮酸脱氢酶亚基（PDHA1）含量;采用实时定量RT-PCR检测丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）mRNA的表达。结果: 与氧化损伤模型比较,参麦注射液可有效提高心肌细胞存活率和ATP水平（均P < 0.01）,提高细胞氧呼吸速率,减少丙酮酸含量,并提高PDH活性（P < 0.05或P < 0.01）。在分子水平上,参麦注射液可提高PDHA1蛋白表达（P < 0.05）,并具有降低PDK1 mRNA表达的趋势（P>0.05）。结论: 参麦注射液可有效保护氧化损伤心肌细胞,其机制可能与提高PDH活性、减少丙酮酸堆积,从而维持线粒体功能稳定和细胞能量代谢稳定有关。     

川楝子中肝毒性成分的快速筛查研究

使用荧光探针FDA标记的HepG2细胞模型及细胞荧光显微图像自动分析法,对川楝子的23个化学组分进行快速筛查,发现5个组分具有明显毒性.对其中的2个组分进行液质联用分析,推测鉴定了10个化学成分,制备并鉴定出其中3个成分的分子结构(meliasenin B,trichilinin D,1-O-tigloy-l-O-debenzoylohchinal).进一步实验研究发现,这3个成分对HepG2细胞呈量-毒关系,提示川楝子中这些成分可能引起肝毒性.     

中药脑心同治药理学研究平台构建及丹红注射液脑心同治机制研究

脑心同治理论是基于中医传统理论并结合临床实践发展而来,该文提出了在脑心同治理论基础上,构建中药脑心同治药理学研究平台的思路,包括脑心同治网络建模、药效物质发现、作用机制研究以及脑心同治方药体内过程研究等。该文以脑心同治网络建模为例,采用数据库以及文献搜索收集疾病相关基因,并通过网络构建与模块分析,最终发现心、脑血管疾病相关的关键生物过程包括氧化应激、代谢、炎症等,其中GSK3B,NOTCH1,CDK4等基因占据网络子簇中关键节点。运用该研究平台,获得了丹红注射液主要成分调控的生物分子网络模型,从而发掘其治疗心脑血管疾病的共有靶点与作用途径。其中,GSK3B在网络中与丹红注射液成分相关性最多,且其所在的子簇涉及到的生物功能有细胞氧化应激。根据分析结果,在氧化损伤心肌细胞与神经细胞模型上验证了丹红注射液可显著提高氧化损伤后心肌细胞与神经细胞的存活率,其保护机制与提高GSK3β蛋白磷酸化水平有关,且丹参与红花配伍具有协同效应。以上结果显示,采用网络建模等方法,可研究揭示丹红注射液等脑心同治方药治疗心脑血管疾病的作用机制。该研究提出的中药脑心同治药理学研究平台框架,为综合运用现代科技手段科学揭示"脑心同治"的机制提供了可行途径。     

细胞色素p450 2C19基因多态性与胃癌易感性的关系

研究细胞色素ｐ４５０ ２Ｃ１９基历多态性与胃癌易感性的关系。方法：用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对１００例健康对照者和５０例胃癌患者进行ＣＹＰ２Ｃ１９等位基因多态性分组分析。结果：胃癌患者中ＣＹＰ２Ｃ１９ＰＭ发生率为２８．０％，较正常对照组的１４．０％高，经统计，两组间有显著性差异（χ＾２＝４．３０，Ｐ〈０．０５）。结论：ＣＹＰ２Ｃ１９ＰＭ增加了胃癌发生的危险性，实验结果提示ＣＹＰ２Ｃ１９参与了胃癌致癌物的     

ASA法和PCR-RFLP法对CYP2C19ml和CYP2C19m2等位基因分析的比较

[目的]建立等位基因特异性扩增法(ASA)检测CYP2C19ml和CYP2C19m2等位基因。[方法]用ASA法和聚合酶链反应与限制性片段长度多态性结合使用的方法(PCR-RFLP)同时检测100例随机健康受试者血样CYV2C19ml和CYV2C19m2等位基因。[结果]对100例随机健康受试者血样(CYP2C19ml和m2的检测，结果是wt／wt 45例、wt／ml 30例、wt／m2 11例、ml／m2 7例、ml／m2 7例、m2／m2 0例。[结论]ASA法简单、快速、复重性好，适用于一般实验室检查及大规模的人群调查。     

赤芍中护肝活性物质的筛选与鉴定

目的:建立中药潜在护肝活性物质快速筛选新方法,辨识赤芍内具有护肝活性的化学成分。方法:在半乳糖胺HepG2细胞损伤模型上,采用二乙酸荧光素荧光标记法和MTT法筛选赤芍中具有护肝活性的组分,使用色谱-质谱联用技术分析其化学组成,并对筛选出的赤芍护肝活性成分进行实验验证。结果:从赤芍中筛选发现具有明显护肝活性的化学组分3个,并分析鉴定出芍药苷、棕榈酸乙酯和亚油酸乙酯3个成分。验证实验表明,这3个化合物对HepG2细胞均具有较明显的保护作用。结论:赤芍所含的芍药苷、棕榈酸乙酯和亚油酸乙酯具有潜在的护肝活性。