一种实时方法研究阪崎肠杆菌的生长情况

目的：建立一种实时方法研究阪崎肠杆菌生长情况。方法：采用96孔板培养阪崎肠杆菌，然后由扫描仪实时监测阪崎肠杆菌的生长。结果：采用传统的平板方法和微孔板光谱分析仪测定阪崎肠杆菌数量之间具有非常好的相关性（r^2=0．92）。采用这种新的快速方法测定阪崎肠杆菌的生长，从而缩短测定时间（由至少24h缩短为小于10h），比传统方法更方便、快速，并可实现实时监测阪崎肠杆菌的生长情况。     

黏土改性后对垃圾渗滤液的化学作用研究

通过室内静态的实验方法，研究了在黏土中掺入不同比例的石灰后，黏土和石灰与垃圾浸泡液的作用。试验表明：加入石灰的黏土比单独的黏土更有利于垃圾浸泡液中有机污染物的衰减，根据实验监测的COD、pH、Eh、电导率等，确定在黏土中加入10％的石灰，可以很好地降解垃圾浸泡液中的有机物，而且这种比例组成的防渗材料具有较低的渗透性，是较好的垃圾填埋场衬里材料。     

大连郊区儿童蛲虫感染调查分析

调查大连市郊区城镇和农村幼儿童207人,蛲虫感染率均为0,与儿童养成良好的卫生习惯密切相关。     

克罗诺杆菌种间鉴定recN基因方法建立

目的建立一种基于重组和修复蛋白基因(recN)的克罗诺杆菌种间鉴定方法,将不同来源的克罗诺杆菌分离株鉴定到种。方法扩增recN基因全长序列,选取不同长度的recN基因片段,用MEGA 4.0软件对克罗诺杆菌8个参考菌株进行聚类分析,确定克罗诺杆菌种间鉴定可信度高、序列较短的片段;设计并合成该片段的引物,以8株参考菌株作为参照,构建44株克罗诺杆菌实验菌株的聚类分析图,并用生化反应鉴定对聚类结果进行佐证。结果基于recN基因上一段640 bp的片段可对克罗诺杆菌不同种的菌株进行区分;以8株参考菌株在聚类图上的位置作为参考,根据遗传距离的远近,44株分离菌中有37株阪崎克罗诺杆菌,3株丙二酸盐阳性克罗诺杆菌,3株苏黎世克罗诺杆菌,1株尤尼沃斯克罗诺杆菌,与生化反应鉴定结果一致。结论该方法与生化鉴定和基于recN全基因方法相比简便快速,PCR扩增后,一次测序反应就可以将克罗诺杆菌鉴定到种。     

阪崎肠杆菌生长特性及耐热耐酸碱性分析

目的 研究不同阪崎肠杆菌菌株的生长特性和耐热耐酸碱性.方法 采用光谱扫描仪培养22株阪崎肠杆菌,由扫描仪实时监测不同阪崎肠杆菌菌株生长特性;采用显色平板涂布方法观察高温和酸碱条件下阪崎肠杆菌存活情况.结果 传统平板计数法和微孔板光谱扫描仪建立的阪崎肠杆菌生长曲线具有良好相关性(R2=0.92);22株阪崎肠杆菌经75℃处理2 min后,尚有1株存活;经碱处理后(pH 12.55)立检测,所有菌株均已死亡;用酸处理1min后(pH 1.18)检测,尚有2株存活.结论 采用光谱扫描仪方法测定阪崎肠杆菌生长曲线方便快捷,不需要培养计数;不同的阪崎肠杆菌菌株具有不同的耐热、耐酸特性.     

沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法建立

目的 建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法.方法 采用16S ～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清学和生化分型结果比较.结果 89株沙门菌共分为12个dHPLC型(D型);所有沙门菌均有1个相同色谱峰,克隆测序结果表明,其片断大小为600 bp,其他8种食源性致病菌对照株无此色谱峰,应为沙门菌16S～23S rRNA基因序列的特征性条带,分型结果与血清学差异较大,与生化分型结果有一定一致性.结论 所建立的沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法具快速、操作方便、重复性好、成本低廉、高通量和自动化的特点.     

多重实时荧光定量聚合酶链反应检测携带耐药基因及肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌

目的 建立一种快速鉴定携带耐药基因和肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法.方法 根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因nuc、甲氧西林耐药基因mecA和肠毒素A基因sea的序列,设计特异性的引物和不同荧光素标记的TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立了能同时检测鉴定耐甲氧西林和产肠毒素A的金黄色葡萄球菌的多...     

一种新型念珠菌显色培养基的研制

目的:研究设计一种新的用于分离与鉴别念珠菌的显色培养基及方法。方法:针对念珠菌特有的酶,设计出配方,应用质控菌株,通过特异性、灵敏度及生理特征方面比较实验,评价其效果。结果:本实验研制的念珠菌显色培养基具有较好的选择性和特异性,菌落特征出现时间早于科玛嘉念珠菌显色培养基,另外,本方法通过底物5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡糖苷反应,可以将都柏林念珠菌与白色念珠菌区分开,同时使白色念珠菌得到进一步确证。结论:新的显色培养基及方法能更有效地用于白色念珠菌及4种相关重要念珠菌的分离与鉴别,并且缩短了检测时间,降低了检测成本,具有较好的应用价值。     

MALDiI Botyper与API20E对克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的鉴定结果比较

目的:评价MALDI-TOF MS Biotyper鉴定克罗诺杆菌的效果。方法:应用MALDI-TOF MS Biotyper与API20E分别对32株克罗诺杆菌(28株分离株,4株参考菌株)与相近菌株阴沟肠杆菌、产气肠杆菌进行鉴定,并对鉴定结果分析比较。结果:MALDI-TOF MS Biotyper2.0将32株克罗诺杆菌鉴定到种、属水平分别为56.2%和37.5%;API20E为75%、21.9%。3株菌未获得鉴定结果,其余29株菌的鉴定结果相符。结论:MALDI-TOF MS Biotyper作为一种新的细菌鉴定手段,可用于克罗诺杆菌的鉴定。     

食品中腰果过敏原成分PCR检测方法建立

目的建立食品中腰果过敏原成分的PCR检测方法。方法采用溴化十六烷三甲基胺(CTAB)法和磁珠法提取的坚果DNA,根据GenBank中腰果3种主要致敏蛋白AnaO1、AnaO2、AnaO3的基因序列,设计9对引物;通过扩增效果和特异性,筛选腰果最佳扩增引物对;采用腰果特异性引物对AnaO3 F3R3和植物通用引物对P lant 159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果成分进行双重PCR扩增,确定方法特异性;通过腰果DNA梯度稀释确定该检测方法灵敏度;通过样品添加试验模拟食品中腰果过敏原成分的检测。结果采用CTAB法提取坚果DNA的A260/A280比值普遍<1.8,说明存在蛋白质污染,采用磁珠法提取DNA的比值>1.8,说明去除蛋白质较干净;9对引物中,引物对AnaO3 F3R3特异性最好,其最佳退火温度为55.4℃;采用该引物与植物通用引物对P lant 159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果DNA进行双重PCR,只有腰果样品能扩增出312 bp的特异性条带;采用该PCR法检测腰果过敏原成分的灵敏度为0.1 pg/μL;可以检出食品中>0.001%的腰果成分。结论建立了一种食品中腰果过敏原成分的双重PCR检...